細胞培養(yang)方法

細(xi)胞培養(yang)方法
、獲取腦(nao)組織後(hou),先(xian)仔(zai)細剝除(chu)腦(nao)膜和(he)血(xue)管等纖(xian)維(wei)成(cheng)分(fen),置(zhi)入(ru)Hanks液中(zhong)漂洗(xi)～2次後(hou),置(zhi)於(yu)30～50倍的(de)Hanks液(ye)中(zhong),腦組織比(bi)較(jiao)柔(rou)軟(ruan),反復吹(chui)打即可制成(cheng)細(xi)胞懸液,

2、為(wei)排(pai)除(chu)脂(zhi)肪成(cheng)分(fen)和(he)其(qi)它(ta)碎塊(kuai),把懸液註(zhu)入(ru)離心(xin)管中(zhong),在室溫直(zhi)立(li)5～0分(fen)鐘(zhong)後(hou),細(xi)胞(bao)或細胞(bao)團塊(kuai)自(zi)然(ran)下(xia)沈,脂(zhi)肪等雜(za)物易漂浮於(yu)懸液(ye)表(biao)層,吸(xi)除(chu)上清(qing),如(ru)此反復二(er)三(san)次可獲得(de)較(jiao)多(duo)的(de)細胞成(cheng)分(fen),

3、向(xiang)末次(ci)沈澱(dian)物中加入(ru)適量營(ying)養(yang)液,通(tong)過(guo)紗網(wang)或(huo)紗布(bu)濾(lv)過(guo),計數細(xi)胞(bao)並(bing)調(tiao)整好細(xi)胞密(mi)度(du),接種入(ru)培養(yang)瓶或(huo)皿(min)中(zhong),置5％CO2溫箱中培養(yang),

4、細胞(bao)生長匯合(he)後(hou),可用0.25％消(xiao)化(hua)法(fa)做(zuo)傳(chuan)代(dai)處理,加消(xiao)化(hua)液(ye)的(de)量以能覆(fu)蓋細胞層即可,待(dai)細(xi)胞(bao)開(kai)始從瓶(ping)壁脫離(li)（平均5～0分(fen)鐘(zhong)）,加入(ru)含(han)有血(xue)清(qing)培養(yang)液,吹(chui)打制成(cheng)細(xi)胞懸液,