ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒基礎(chu)技術

ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒基礎(chu)技術
ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒應用定性(xing)夾心免(mian)疫(yi)檢(jian)測技術，用(yong)合(he)成(cheng)的HEV多(duo)肽抗原(yuan)包(bao)被微孔板(ban)板(ban)條(tiao)，這(zhe)些多(duo)肽是中(zhong)國(guo)型(xing)HEV毒株(zhu)核(he)心氨(an)基酸序(xu)列(lie)中(zhong)抗原(yuan)性(xing)很強(qiang)的肽段，分別(bie)來(lai)自於(yu)該(gai)毒株(zhu)的開放(fang)閱讀(du)框2和開放(fang)閱讀(du)框3。將(jiang)樣品(pin)或標(biao)準(zhun)品(pin)加入孔中(zhong)並孵育(yu)，如(ru)果(guo)其中(zhong)存在(zai)HEV IgM抗(kang)體(ti)，這(zhe)些抗體(ti)就(jiu)會與(yu)HEV 的多(duo)肽抗原(yuan)結(jie)合(he)，並固(gu)定在(zai)上(shang)面(mian)，洗板(ban)除(chu)去(qu)其它(ta)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)和(he)樣品(pin)中(zhong)的其它(ta)成(cheng)份(fen)。然後(hou)加(jia)入羊抗(kang)人IgM-HRP（辣(la)根(gen)過氧化物酶）酶結合(he)物，經第(di)二次孵育(yu)後(hou)，酶(mei)結(jie)合(he)物就會與(yu)*次孵育(yu)結合(he)上(shang)的HEV IgM抗體(ti)相(xiang)結(jie)合(he)，洗板(ban)除(chu)去(qu)未結(jie)合(he)的酶結合(he)物，加入TMB底物溶(rong)液，在(zai)第(di)三(san)次孵育(yu)時會(hui)發(fa)生(sheng)酶(mei)-底物反(fan)應，只(zhi)有那(na)些含有HEV IgM抗體(ti)和(he)酶結(jie)合(he)物所形成(cheng)的復合(he)物的孔才會(hui)發(fa)生(sheng)顏(yan)色(se)變化，加(jia)入硫(liu)酸(suan)溶(rong)液終止酶(mei)和(he)底物間的反(fan)應，並在(zai)波(bo)長(chang): 450nm處測(ce)量(liang)O.D.值(zhi),按(an)照本HEV IgM抗體(ti)elisa試劑(ji)盒的測試標(biao)準(zhun), O.D.值(zhi)大於(yu)或(huo)等於(yu)Cut-Off值(zhi)的樣品(pin)被認(ren)為(wei)是初試陽(yang)性(xing)。
ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒基礎(chu)技術elisa技術流(liu)程(cheng)
ELISA的基礎(chu)是抗(kang)原(yuan)或(huo)抗體(ti)的固相(xiang)化(hua)及抗(kang)原(yuan)或(huo)抗體(ti)的酶標(biao)記(ji)。結合(he)在(zai)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)表面(mian)的抗原(yuan)或(huo)抗體(ti)仍(reng)保(bao)持(chi)其(qi)免(mian)疫(yi)學活(huo)性(xing)，酶(mei)標(biao)記(ji)的抗原(yuan)或(huo)抗體(ti)既保(bao)留(liu)其(qi)免(mian)疫學活(huo)性(xing)，又(you)保(bao)留(liu)酶(mei)的活(huo)性(xing)。在(zai)測(ce)定時(shi)，受(shou)檢(jian)標(biao)本（測定其(qi)中(zhong)的抗體(ti)或(huo)抗原(yuan)）與(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)表面(mian)的抗原(yuan)或(huo)抗體(ti)起(qi)反(fan)應。用洗滌的方(fang)法使固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)形成(cheng)的抗原(yuan)抗(kang)體(ti)復合(he)物與(yu)液體(ti)中(zhong)的其他物質分開。再加入酶標(biao)記(ji)的抗原(yuan)或(huo)抗體(ti)，也(ye)通(tong)過反(fan)應而結合(he)在(zai)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)。此(ci)時(shi)固(gu)相(xiang)上(shang)的酶量與(yu)標(biao)本中(zhong)受檢(jian)物質的量呈(cheng)壹定的比例(li)。加入酶反(fan)應的底物後(hou)，底(di)物被酶催(cui)化(hua)成(cheng)為(wei)有色產物，產物的量與(yu)標(biao)本中(zhong)受檢(jian)物質的量直接(jie)相(xiang)關，故可(ke)根(gen)據(ju)呈(cheng)色的深(shen)淺(qian)進(jin)行定性(xing)或(huo)定量(liang)分析(xi)。由於(yu)酶(mei)的催(cui)化(hua)效(xiao)率(lv)很高，間接(jie)地放(fang)大了(le)免(mian)疫(yi)反(fan)應的結果(guo)，使測(ce)定方(fang)法達到(dao)很高的敏感度(du)。 ELISA可(ke)用(yong)於(yu)測(ce)定抗(kang)原(yuan)，也(ye)可(ke)用(yong)於(yu)測(ce)定抗(kang)體(ti)。