雙抗體夾心(xin)法(fa)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)如下(xia)

雙抗體夾心(xin)法(fa)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)如下(xia)： 
) 將特(te)異性(xing)抗體與固(gu)相(xiang)載(zai)體聯(lian)結，形成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)體。洗滌除(chu)去未(wei)結合的抗體及雜(za)質(zhi)。 
2) 加受檢標本，保(bao)溫反應(ying)。標本(ben)中的抗原(yuan)與(yu)固(gu)相(xiang)抗(kang)體結合，形(xing)成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)原抗體復合物(wu)。洗滌除(chu)去其(qi)他未(wei)結合物(wu)質(zhi)。 
3) 加酶(mei)標抗(kang)體，保(bao)溫反應(ying)。固(gu)相(xiang)免(mian)疫(yi)復(fu)合物(wu)上(shang)的抗原(yuan)與(yu)酶(mei)標抗(kang)體結合。*洗滌未(wei)結合的酶(mei)標抗(kang)體。此時(shi)固(gu)相(xiang)載(zai)體上帶(dai)有的酶(mei)量(liang)與(yu)標(biao)本(ben)中受(shou)檢抗原的量(liang)相(xiang)關。 
4) 加底物(wu)顯(xian)色。固(gu)相(xiang)上(shang)的酶(mei)催化(hua)底物(wu)成(cheng)為(wei)有色(se)產(chan)物。通(tong)過比色，測知(zhi)標本(ben)中抗(kang)原的量(liang)。在(zai)臨(lin)床檢驗中，此(ci)法(fa)適(shi)用於(yu)檢驗各種(zhong)蛋白(bai)質(zhi)等大(da)分(fen)子(zi)抗(kang)原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只(zhi)要獲得(de)針(zhen)對(dui)受(shou)檢抗原的異性(xing)抗體，就可(ke)用於(yu)包被固(gu)相(xiang)載(zai)體和制(zhi)備(bei)酶(mei)結合物(wu)而(er)建立(li)此法(fa)。如(ru)抗體的來源(yuan)為(wei)抗血清(qing)，包(bao)被(bei)和酶(mei)標用(yong)的抗體分別(bie)取自不(bu)同種(zhong)屬的動物。如應用單克隆(long)抗體，壹般(ban)選擇(ze)兩(liang)個(ge)針(zhen)對(dui)抗(kang)原(yuan)上(shang)不(bu)同決(jue)定簇的單抗，分(fen)別用(yong)於(yu)包被固(gu)相(xiang)載(zai)體和制(zhi)備(bei)酶(mei)結合物(wu)。這(zhe)種(zhong)雙位(wei)點夾(jia)心(xin)法(fa)具(ju)有很(hen)高(gao)的特異性(xing)，而且可(ke)以將受(shou)檢標本和酶(mei)標抗(kang)體壹起(qi)保(bao)溫反應(ying)，作(zuo)壹步檢測。 

在(zai)壹(yi)步法(fa)測(ce)定中，當(dang)標本(ben)中受(shou)檢抗原的含量(liang)很(hen)高(gao)時，過量(liang)抗(kang)原(yuan)分(fen)別(bie)和固(gu)相(xiang)抗(kang)體及酶(mei)標抗(kang)體結合，而(er)不(bu)再形成(cheng)"夾心復合物(wu)"。類同於(yu)沈澱(dian)反應(ying)中抗(kang)原過(guo)剩(sheng)的後帶(dai)現象(xiang)，此時反應(ying)後顯(xian)色(se)的吸光(guang)值(位(wei)於(yu)抗原過剩(sheng)帶(dai)上(shang))與(yu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(位(wei)於(yu)抗體過剩(sheng)帶(dai)上(shang))某壹抗原(yuan)濃度(du)的吸光(guang)值相(xiang)同(參見.3.2，圖-4)，如(ru)按(an)常(chang)法(fa)測(ce)讀(du)，所得(de)結果將低(di)於(yu)實際的含量(liang)，這(zhe)種(zhong)現象(xiang)被稱為鉤狀效(xiao)應(ying)(hook effect)，因(yin)為標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)到(dao)達(da)高(gao)峰(feng)後呈(cheng)鉤狀彎落。鉤狀(zhuang)效應(ying)嚴(yan)重(zhong)時，反應(ying)甚至(zhi)可(ke)不(bu)顯(xian)色(se)而(er)出(chu)現假(jia)陰(yin)性(xing)結果。因此在(zai)使(shi)用壹(yi)步法(fa)試(shi)劑測(ce)定標本中含量(liang)可(ke)異常(chang)增(zeng)高(gao)的物質(zhi)(例如血清(qing)中HBsAg、AFP和尿(niao)液(ye)hCG等)時，應(ying)註(zhu)意(yi)可(ke)測範(fan)圍的zui高(gao)值。用高(gao)親和力的單克隆(long)抗體制(zhi)備(bei)此(ci)類試(shi)劑可(ke)削弱(ruo)鉤(gou)狀(zhuang)效應。 

假(jia)使(shi)在(zai)被(bei)測分(fen)子(zi)的不(bu)同位(wei)點上(shang)含有多(duo)個(ge)相(xiang)同的決(jue)定簇，例如HBsAg的a決(jue)定簇，也可(ke)用針(zhen)對(dui)此(ci)決(jue)定的同壹單抗分(fen)別包(bao)被(bei)固(gu)相(xiang)和制(zhi)備(bei)酶(mei)結合物(wu)。但(dan)在(zai)HBsAg的檢測中應(ying)註(zhu)意(yi)亞(ya)型問(wen)題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個(ge)亞(ya)型(xing)，雖然(ran)每種(zhong)亞型(xing)均(jun)有相(xiang)同的a決(jue)定簇的反應(ying)性(xing)，這也(ye)是用單抗作(zuo)夾心法(fa)應(ying)註(zhu)意(yi)的問(wen)題。