ELISA試劑(ji)盒質量平衡(heng)及(ji)實(shi)驗(yan)標準

ELISA試劑(ji)盒質量平衡(heng)及(ji)實(shi)驗(yan)標準
中(zhong)壹般有(you)3次(ci)加樣(yang)步聚(ju)，即加(jia)標本(ben)，加酶結合物，加底物。加樣時應(ying)將(jiang)所加(jia)物加在ELISA試劑(ji)盒板(ban)孔的底部(bu)，避(bi)免加在孔壁(bi)上(shang)部(bu)，並(bing)註(zhu)意不可濺出(chu)，不可產生氣(qi)泡(pao)。
加標本(ben)壹般用微(wei)量加樣(yang)器，按規定(ding)的量加入板(ban)孔中。每次(ci)加標本(ben)應更(geng)換(huan)吸嘴，以免發生(sheng)交(jiao)叉汙染(ran)，也(ye)可用(yong)壹次(ci)性(xing)的定(ding)量塑料(liao)管(guan)加(jia)樣。
有(you)此測(ce)定(ding)（如(ru)間(jian)接法(fa)ELISA）需用(yong)稀(xi)釋的血(xue)清，可在(zai)試管(guan)中(zhong)按規定(ding)的稀(xi)釋度(du)稀(xi)釋後再加(jia)樣。也(ye)可在(zai)板(ban)孔中加入稀(xi)釋液(ye)，再在(zai)其中(zhong)加(jia)入血(xue)清標本(ben)，然後在微(wei)型(xing)震(zhen)蕩器上(shang)震(zhen)蕩分(fen)鐘(zhong)以保(bao)證混和(he)。加(jia)酶結合物應用液(ye)和(he)底物應用液(ye)時可用(yong)定(ding)量多(duo)道加液(ye)器，使(shi)加(jia)液(ye)過程迅速完成(cheng)。在(zai)ELISA試劑(ji)盒中壹般有(you)兩次(ci)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反應，即加標本(ben)和(he)加(jia)酶結合物後。抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反應的完成(cheng)需要(yao)有(you)壹定(ding)的溫(wen)度(du)和(he)時間(jian)，這壹保溫過程稱為溫(wen)育(yu)（incubation），有(you)人稱之(zhi)為孵(fu)育(yu)，在(zai)ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒中似不(bu)恰當。
屬(shu)固相(xiang)免疫測(ce)定(ding)，抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)的結(jie)合(he)只在(zai)固相(xiang)表(biao)面(mian)上(shang)發生(sheng)。以(yi)抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)的夾心法為例(li)，加入板(ban)孔中的標本(ben)，其中(zhong)的抗(kang)原(yuan)並(bing)不(bu)是都有(you)均(jun)等(deng)的和(he)固相(xiang)抗(kang)結(jie)合(he)的機(ji)會(hui)，只有(you)zui貼近孔壁(bi)的壹層溶(rong)液(ye)中的抗(kang)原(yuan)直(zhi)接與抗(kang)體(ti)接觸。這是壹個(ge)逐(zhu)，因此需經(jing)擴散
才(cai)能(neng)達(da)到(dao)反應的終(zhong)點。在其後加入的酶標記抗(kang)體(ti)與固相(xiang)抗(kang)原(yuan)的結(jie)合(he)也(ye)同(tong)樣如此。這就(jiu)是為什(shen)麽ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒反應總(zong)是需要(yao)壹定(ding)時間(jian)的溫(wen)育(yu)。
溫(wen)育(yu)常(chang)采用的溫(wen)度(du)有(you)43℃、37℃、室溫和(he)4℃（冰箱溫度(du)）等。37℃是實驗(yan)室中(zhong)常(chang)用(yong)的保(bao)溫(wen)溫度(du)，也(ye)是大(da)多(duo)數抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)的合(he)適(shi)溫度(du)。在建(jian)立(li)ELISA方(fang)法作反應動(dong)力(li)學研究(jiu)時，實(shi)驗表(biao)明(ming)，兩(liang)次(ci)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反應壹般在37℃經(jing)-2小(xiao)時，產物的生(sheng)成(cheng)可達(da)。為加(jia)速反應，可提(ti)高反應的溫(wen)度(du)，有(you)些試驗(yan)在(zai)43℃進行(xing)，但(dan)不(bu)宜采用更(geng)高的溫(wen)度(du)。抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反應4℃更為*，在(zai)放(fang)射免疫測(ce)定(ding)中(zhong)多(duo)使反應在冰箱中，以(yi)形成(cheng)zui多(duo)的沈澱(dian)。但(dan)因所需時間(jian)太長，在ELISA試劑(ji)盒中壹般不予采用。