熒光原位(wei)雜(za)交(jiao)特(te)點(dian)和應用

熒光原位(wei)雜(za)交(jiao)特(te)點(dian)和應用

原位(wei)雜(za)交(jiao)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)價(jia)格的(de)探針(zhen)按標(biao)記(ji)分(fen)子類型分(fen)為放射(she)性(xing)標記(ji)和(he)非放射(she)性(xing)標記(ji)。用(yong)同(tong)位(wei)素(su)標(biao)記(ji)的(de)放射(she)性(xing)探針優勢在於對(dui)制備(bei)樣品(pin)的(de)要(yao)求(qiu)不(bu)高，可以(yi)通過(guo)延(yan)長曝(pu)光時間加(jia)強(qiang)信號(hao)強(qiang)度，故(gu)較靈(ling)敏(min)。缺點(dian)是探針不(bu)穩定、自(zi)顯(xian)影(ying)時間長、放射(she)線(xian)的(de)散射(she)使得(de)空間分(fen)辨率(lv)不(bu)高、及同(tong)位(wei)素(su)操作(zuo)較繁瑣(suo)等(deng)。采用熒光標(biao)記(ji)系(xi)統則可克服(fu)這些(xie)不(bu)足，這就是FISH技術(shu)。FISH技術(shu)作(zuo)為非(fei)放射(she)性(xing)檢測(ce)體系(xi)，有以(yi)下特(te)點(dian)。

熒光原位(wei)雜(za)交(jiao)優(you)點(dian):、熒光試(shi)劑(ji)和探(tan)針經濟、安全(quan);2、探針穩(wen)定，壹(yi)次標記(ji)後(hou)可在兩年內使用(yong);3、實驗周期短(duan)、能迅(xun)速得(de)到結(jie)果(guo)、特(te)異(yi)性好、定(ding)位(wei)準確(que);4、FISH可(ke)定(ding)位(wei)長(chang)度在kb的(de)DNA序(xu)列，其靈(ling)敏(min)度與(yu)放射(she)性(xing)探針相當;5、多(duo)色FISH通過(guo)在同(tong)壹(yi)個(ge)核(he)中(zhong)顯示(shi)不(bu)同(tong)的(de)顏色可同(tong)時檢測(ce)多種(zhong)序(xu)列;6、既(ji)可(ke)以(yi)在玻(bo)片上(shang)顯(xian)示(shi)中(zhong)期染色體數量或(huo)結(jie)構(gou)的(de)變化(hua)，也可以(yi)在懸液(ye)中(zhong)顯示(shi)間期染色體DNA的(de)結(jie)構(gou)。

熒光原位(wei)雜(za)交(jiao)缺(que)點(dian)：不(bu)能達到00%雜(za)交(jiao)，特(te)別(bie)是在應用(yong)較短(duan)的(de)cDNA探針(zhen)時效(xiao)率(lv)明顯下降(jiang)。

熒光原位(wei)雜(za)交(jiao)技術(shu)zui初(chu)用(yong)於(yu)中(zhong)期染色體。從(cong)正(zheng)在分(fen)化(hua)的(de)細胞核(he)中(zhong)制備(bei)的(de)這種(zhong)染(ran)色體是(shi)高度凝縮的(de)，每條(tiao)染(ran)色體都(dou)具有可(ke)識別(bie)的(de)形(xing)態，它們染色後將(jiang)顯現(xian)出(chu)特征性的(de)著絲粒位(wei)置(zhi)及(ji)染色帶(dai)型(xing)。在處(chu)理(li)中(zhong)期染色體時，ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)價(jia)格通過測(ce)定FISH所獲得(de)熒光信號(hao)相對(dui)於(yu)染(ran)色體短(duan)臂末(mo)端(duan)的(de)位(wei)置(zhi)(FLpter值(zhi))來進行作(zuo)圖。使用(yong)中(zhong)期染色體的(de)不(bu)足之(zhi)處(chu)在於，由(you)於(yu)它的(de)高度凝縮的(de)性質(zhi)，只(zhi)能進行低分(fen)辨率(lv)作(zuo)圖，兩個標記(ji)至少分(fen)隔Mb才(cai)能作(zuo)為分(fen)開(kai)的(de)雜(za)交(jiao)信號(hao)被(bei)分(fen)辨出來(Trask et al.，99)。這(zhe)種(zhong)分(fen)辨率(lv)不(bu)足以(yi)構建(jian)有交(jiao)往(wang)的(de)染色體圖(tu)譜(pu)。故(gu)此中(zhong)期染色體FISH主(zhu)要(yao)用(yong)於(yu)確(que)定(ding)新(xin)標記(ji)在染色體上(shang)的(de)大概位(wei)置(zhi)，為(wei)其他更(geng)精(jing)細的(de)作(zuo)圖方(fang)法(fa)做準備。 壹(yi)直(zhi)以(yi)來，這(zhe)些“其他方(fang)法(fa)”並(bing)不(bu)包括(kuo)任壹(yi)種(zhong)FISH，但(dan)995年(nian)後，壹(yi)系(xi)列(lie)高分(fen)辨率(lv)的(de)FISH技術(shu)已發展起(qi)來。這(zhe)些技術(shu)通(tong)過(guo)改(gai)變(bian)待研究(jiu)的(de)染色體制備(bei)的(de)性質(zhi)而達到較高的(de)分(fen)辨率(lv)。中(zhong)期染色體對(dui)於(yu)精(jing)細作(zuo)圖來說(shuo)凝縮度太高，因而我們(men)需(xu)要(yao)選(xuan)用較為伸展(zhan)的(de)染色體。有兩種(zhong)途(tu)徑可(ke)以(yi)滿足這壹(yi)要(yao)求(qiu)(Heiskanen et al.，996)： 機械伸展(zhan)的(de)染色體(mechanically stretched chromosome)通(tong)過(guo)改(gai)變(bian)從(cong)中(zhong)期細胞核(he)中(zhong)分(fen)享染(ran)色體的(de)方法(fa)而獲得(de)。離(li)心產(chan)生剪(jian)切(qie)力(li)可(ke)將(jiang)染色體伸展(zhan)到正(zheng)常(chang)長度20倍。每(mei)條(tiao)染(ran)色體仍(reng)可(ke)識別(bie)，而FISH信號(hao)作(zuo)圖方(fang)法(fa)與(yu)通常(chang)處(chu)理(li)的(de)中(zhong)期染色體相同(tong)，這(zhe)樣，分(fen)辨率(lv)可明顯提高，能夠區分(fen)出相隔(ge)200~300kb的(de)標記(ji)。 非(fei)中(zhong)期染色體(non-metaphase chromosome)染(ran)色體僅(jin)在中(zhong)期高度凝縮，而在細胞周期的(de)其他階(jie)段(duan)保持天然未包裝狀(zhuang)態(tai)，有研究(jiu)者(zhe)曾利(li)用前期細胞核(he)，此時染(ran)色體凝縮程度足以(yi)區分(fen)出單(dan)個染(ran)色體。實際(ji)應用中(zhong)，這種(zhong)方(fang)法(fa)並(bing)無優於(yu)機械伸展(zhan)的(de)染色體之(zhi)處(chu)。相比之(zhi)下分(fen)裂(lie)間期(interphase)的(de)染色體更(geng)為(wei)有用(yong)，因(yin)為分(fen)裂(lie)間期(再次細胞核(he)分(fen)裂(lie)之(zhi)間)的(de)染色體包裝程(cheng)度zui低。使用(yong)分(fen)裂(lie)間期的(de)染色體，分(fen)辨率(lv)有可(ke)能達到25kb以(yi)下，但(dan)染(ran)色體形(xing)態特(te)征消失，推動(dong)了定位(wei)探(tan)針(zhen)位(wei)置(zhi)所需(xu)的(de)外部(bu)參照點(dian)。因此，該(gai)技術(shu)可(ke)在已獲得(de)染(ran)色體粗(cu)略(lve)圖譜(pu)後使用(yong)，通(tong)常作(zuo)為確(que)定(ding)染(ran)色體壹(yi)段(duan)小(xiao)區域(yu)內壹(yi)系(xi)列(lie)標(biao)記(ji)物順(shun)序(xu)的(de)方法(fa)。 間期染色體含有去(qu)組裝的(de)全(quan)部的(de)細胞DNA分(fen)子。為了進壹(yi)步(bu)提高FISH的(de)分(fen)辨率(lv)到25kb以(yi)下，有必(bi)要(yao)放棄(qi)完(wan)整(zheng)的(de)染色體，而使用(yong)純(chun)化(hua)的(de)DNA。這種(zhong)方(fang)法(fa)叫做(zuo)纖(xian)維(wei)-FISH(fiber-FISH)，ELISA試劑(ji)盒(he)價(jia)格利(li)用凝膠(jiao)拉伸或(huo)分(fen)子梳理(li)技術(shu)制備(bei)DNA，可以(yi)分(fen)辨間距小(xiao)於0kb的(de)標記(ji)。