ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)測(ce)定操(cao)作(zuo)-加樣(yang)

 國產(chan)ELISA試劑(ji)盒(he)測(ce)定操(cao)作(zuo)非(fei)常簡(jian)單，壹(yi)般(ban)涉(she)及到(dao)標(biao)本的(de)收(shou)集(ji)保存、試劑(ji)準備、加樣(yang)、溫(wen)育(yu)、洗板、顯色(se)、比色(se)、結果(guo)判(pan)斷(duan)和結果(guo)報告及(ji)解釋等(deng)方(fang)面(mian)，ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)其中(zhong)任壹(yi)步(bu)驟的(de)不(bu)當都會(hui)影(ying)響測定結果(guo)，且(qie)尤(you)以加樣(yang)、溫(wen)育(yu)和洗板等(deng)步(bu)驟為(wei)甚(shen)。正(zheng)確的(de)加樣(yang)方(fang)法應(ying)為(wei)45度(du)，吸(xi)頭(tou)貼著(zhe)孔壁加入(ru)，應(ying)註意(yi)角(jiao)度(du)太(tai)小，會(hui)使(shi)液(ye)體殘(can)留在孔壁上(shang)，導致加樣(yang)不(bu)準確；吸頭(tou)應當(dang)貼(tie)著(zhe)管壁和液(ye)面的(de)交界處！
    目(mu)前(qian)臨床(chuang)上(shang)使(shi)用(yong)血清(qing)標(biao)本測(ce)定的(de)標(biao)誌物(wu)壹(yi)般(ban)有傳(chuan)染原(yuan)體的(de)抗(kang)原(yuan)和抗(kang)體、腫(zhong)瘤標(biao)誌物(wu)、激素(su)、特(te)種蛋(dan)白、細(xi)胞(bao)因子(zi)和治療(liao)藥(yao)物(wu)等(deng)。用(yong)於傳(chuan)染原(yuan)體的(de)抗(kang)原(yuan)和抗(kang)體、腫(zhong)瘤標(biao)誌物(wu)和特種(zhong)蛋(dan)白等(deng)的(de)檢(jian)測(ce)的(de)血清(qing)標(biao)本的(de)收(shou)集(ji)則沒(mei)有時間(jian)和體位方面的(de)影(ying)響，用(yong)於ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)測(ce)定的(de)臨(lin)床(chuang)標(biao)本zui為(wei)常用(yong)的(de)是(shi)血清(qing)（漿），有時由(you)於特定的(de)檢(jian)測(ce)目(mu)的(de)，也(ye)用(yong)到(dao)唾(tuo)液(ye)、腦(nao)脊(ji)液(ye)、尿液(ye)、糞便等(deng)標(biao)本。對(dui)用(yong)於激(ji)素(su)和治療(liao)藥(yao)物(wu)測定的(de)血清(qing)標(biao)本的(de)收(shou)集(ji)，要留意(yi)收(shou)集(ji)時間(jian)甚(shen)或體位有可(ke)能(neng)會(hui)對(dui)測定結果(guo)產生影(ying)響。再如(ru)治(zhi)療(liao)藥(yao)物(wu)的(de)檢(jian)測(ce)，應(ying)根(gen)據藥代(dai)動(dong)力學(xue)選(xuan)擇服藥(yao)後的(de)zui適時間(jian)抽(chou)血檢(jian)測(ce)。國產(chan)ELISA試劑(ji)盒(he)又(you)如(ru)當(dang)從(cong)臥位變為(wei)站立(li)位時，血清(qing)中(zhong)腎素(su)活(huo)性將(jiang)泛(fan)起顯著(zhu)增高。如(ru)可(ke)的(de)松(song)在早晨(chen)4～6點之(zhi)間(jian)，會(hui)有壹(yi)峰值(zhi)泛起：生長激素(su)、促(cu)黃體激素(su)（LH）和促卵泡激素(su)（FSH）均以(yi)陣(zhen)發性方(fang)式(shi)開釋(shi)，因(yin)此(ci)，在測(ce)定此(ci)類激(ji)素(su)時，有必(bi)要在緊密(mi)親(qin)密(mi)相(xiang)連的(de)時間(jian)距(ju)離內采(cai)取數(shu)份(fen)血樣(yang)本，以(yi)其中(zhong)間(jian)值(zhi)為(wei)測定值(zhi)。只(zhi)是在處(chu)理(li)和保存方面(mian)要(yao)考慮以(yi)下幾個(ge)方面：首(shou)先(xian)要註意(yi)避(bi)免出現嚴(yan)重(zhong)溶(rong)血。血紅(hong)蛋(dan)白中(zhong)含有血紅(hong)素(su)基(ji)團，其有類(lei)似(si)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)的(de)活(huo)性，因此(ci)，在以(yi)HRP為(wei)標(biao)記(ji)酶(mei)的(de)ELISA測(ce)定中(zhong)，如(ru)血清(qing)標(biao)本中(zhong)血紅(hong)蛋(dan)白濃(nong)度(du)較(jiao)高，則其就(jiu)很容(rong)易在溫(wen)育(yu)過(guo)程(cheng)中(zhong)吸附(fu)於(yu)固(gu)相(xiang)，從(cong)而(er)與(yu)後面(mian)加入(ru)的(de)HRP底(di)物(wu)反應顯色(se)。血清(qing)標(biao)本如(ru)是(shi)以(yi)無(wu)菌操(cao)作(zuo)分離，則可以(yi)在2～8 ℃下保存壹(yi)周(zhou)，如(ru)為(wei)有菌操(cao)作(zuo)，則建(jian)議(yi)冰(bing)凍(dong)保存。ELISA試劑(ji)盒(he)樣(yang)本的(de)長(chang)時間(jian)保存，應在-70 ℃以(yi)下。樣本的(de)采(cai)集(ji)及血清(qing)分離中(zhong)要註意(yi)盡量避(bi)免細菌汙染(ran)，壹(yi)則細菌的(de)生(sheng)長，其所分(fen)泌(mi)的(de)壹(yi)些(xie)酶(mei)可能(neng)會(hui)對(dui)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體等(deng)蛋(dan)白產(chan)生(sheng)分解作用(yong)；二則壹(yi)些(xie)細(xi)菌的(de)內源性(xing)酶(mei)如(ru)大(da)腸(chang)桿(gan)菌的(de)β-半(ban)乳糖(tang)苷(gan)酶(mei)本身會(hui)對(dui)用(yong)相應(ying)酶(mei)作標(biao)記(ji)的(de)測(ce)定方(fang)法產(chan)生(sheng)非(fei)特異(yi)性幹(gan)擾(rao)。標(biao)本在保(bao)存中(zhong)如(ru)出(chu)現(xian)細(xi)菌汙染(ran)所致的(de)混(hun)濁或絮狀(zhuang)物(wu)時，應離心沈澱(dian)後(hou)取上(shang)清(qing)檢(jian)測(ce)。冰(bing)凍(dong)保存的(de)血清(qing)標(biao)本須註意(yi)避(bi)免因停(ting)電等(deng)造(zao)成的(de)反(fan)復凍(dong)融。標(biao)本的(de)反(fan)復凍(dong)融所產(chan)生(sheng)的(de)機(ji)械剪(jian)切(qie)力(li)將(jiang)對(dui)標(biao)本中(zhong)的(de)蛋(dan)白等(deng)分(fen)子(zi)產(chan)生(sheng)破壞作(zuo)用(yong)，從(cong)而(er)國產(chan)ELISA試劑(ji)盒(he)引(yin)起假陰(yin)性結果(guo)。此(ci)外(wai)，凍(dong)融標(biao)本的(de)混(hun)勻亦(yi)應(ying)註意(yi)，不(bu)要進行(xing)劇烈(lie)振(zhen)蕩，反(fan)復顛倒混(hun)勻即可(ke)。