雌二(er)醇(chun)Elisa試劑(ji)盒(he)的(de)原理(li)及(ji)操(cao)作步驟

　　雌(ci)二醇(chun)Elisa試劑(ji)盒(he)中的雌(ci)二(er)醇(chun)是卵(luan)巢(chao)分泌(mi)的(de)類固(gu)醇(chun)激(ji)素(su)，是(shi)主(zhu)要的(de)雌(ci)性(xing)激(ji)素(su)，負(fu)責調(tiao)節女(nv)性特(te)征(zheng)、附(fu)屬性(xing)器(qi)官的成(cheng)熟和(he)月(yue)經-排(pai)卵周期(qi)，促進乳腺(xian)導管(guan)系(xi)統(tong)的產(chan)生(sheng)，雌二(er)醇(chun)是人體(ti)壹種重(zhong)要的(de)黃體(ti)解體(ti)劑(ji)，雌(ci)二(er)醇(chun)主(zhu)要是(shi)卵(luan)巢(chao)濾泡和胎盤的睪(gao)酮(tong)合成(cheng)的，在(zai)腎臟也(ye)能合(he)成(cheng)少許(xu)，睪(gao)酮(tong)與雌(ci)二醇(chun)的轉(zhuan)換(huan)是芳(fang)香酶系(xi)統(tong)完成(cheng)的，血(xue)漿中雌二(er)醇(chun)是壹種動態過程。

　　將雌(ci)二(er)醇(chun)抗體(ti)包(bao)被(bei)於96孔微孔板中，制成(cheng)固相(xiang)載(zai)體(ti)，向微孔中分別加入標準(zhun)品(pin)或(huo)標本(ben)，其(qi)中的雌(ci)二(er)醇(chun)與連接(jie)於(yu)固相載(zai)體(ti)上(shang)的抗(kang)體(ti)結(jie)合，然後(hou)加入化的(de)雌(ci)二(er)醇(chun)抗體(ti)，將未(wei)結(jie)合的(de)化抗(kang)體(ti)洗凈後(hou)，加入HRP標記的(de)親和(he)素(su)，再(zai)次*洗滌後(hou)加入TMB底物顯(xian)色(se)。TMB在(zai)過氧(yang)化物(wu)酶的(de)催化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍(lan)色(se)，並在(zai)酸的(de)作用下轉化成(cheng)終的黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深淺和樣品(pin)中的雌(ci)二(er)醇(chun)呈正(zheng)相關(guan)。用酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長下測定吸光(guang)度，計算樣品(pin)濃(nong)度。

　　加壹定稀(xi)釋(shi)的待(dai)檢(jian)樣品(pin)0.ml於(yu)雌二醇(chun)Elisa試劑(ji)盒(he)中，置(zhi)37℃孵育(yu)小時。然後(hou)洗滌，同(tong)時做(zuo)空(kong)白孔(kong)，陰性(xing)對(dui)照(zhao)孔(kong)及(ji)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)孔(kong)。

　　用0.05MPH9.牰碳(tan)酸鹽(yan)包(bao)被(bei)緩沖(chong)液(ye)將(jiang)抗體(ti)稀釋(shi)至(zhi)蛋白質含(han)量(liang)為(wei)～0μg/毫升(sheng)。在(zai)每個(ge)聚(ju)苯(ben)乙烯(xi)板的(de)反(fan)應(ying)孔中加0.ml，4℃過壹夜。次日棄(qi)去(qu)孔(kong)內溶液(ye)，用洗滌緩(huan)沖(chong)液(ye)洗3次，每次3分鐘。

　　加酶標(biao)抗(kang)體(ti)於各(ge)反(fan)應(ying)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biao)抗(kang)體(ti)（經滴(di)定後(hou)的(de)稀釋度）0.毫升(sheng)。37℃孵育(yu)0.5～小時，洗滌。

　　加底物液(ye)顯(xian)色(se)：於(yu)各反(fan)應(ying)孔中加入臨時配(pei)制的TMB底物溶液(ye)0.ml，37℃0～30分(fen)鐘。

　　終止反(fan)應(ying)於各(ge)反(fan)應(ying)孔中加入2M硫酸0.05毫(hao)升(sheng)。