小(xiao)鼠(shu)小(xiao)扁豆(dou)素結合(he)型(xing)甲(jia)胎蛋白(bai)間(jian)接(jie)法

 小(xiao)鼠(shu)小(xiao)扁豆(dou)素結合(he)型(xing)甲(jia)胎蛋白(bai)間(jian)接(jie)法(檢測未知抗體(ti))

、用(yong)包被(bei)緩沖(chong)液將(jiang)已知(zhi)抗原(yuan)稀釋至(zhi)-0ug/ml， 每(mei)孔加0.ml，4℃過(guo)夜(ye)。次(ci)日(ri)洗(xi)滌3次(ci)。
2、加樣：加壹(yi)定稀(xi)釋的(de)待(dai)檢樣品(pin)(未(wei)知抗體(ti))0.05ml於上(shang)述(shu)已(yi)包(bao)被(bei)之反(fan)應(ying)孔中(zhong),置(zhi)37℃孵(fu)育小(xiao)時,洗(xi)滌。(同時做空白(bai)、陰(yin)性(xing)及陽(yang)性(xing)孔對(dui)照)
3、加酶(mei)標(biao)抗體(ti)：於反(fan)應(ying)孔中(zhong)，加入新鮮(xian)稀(xi)釋的(de)酶(mei)標(biao)第二抗體(ti)(抗抗體(ti))0.05ml，37℃孵(fu)育30-60分鐘，洗(xi)滌,壹(yi)遍(bian)用(yong)DDW洗滌。
4、加底物(wu)液顯(xian)色：於各(ge)反(fan)應(ying)孔中(zhong)加入臨時(shi)配(pei)制的TMB底物(wu)溶液0.ml，37℃ 0～30分鐘。
5、終止反(fan)應(ying)：於各(ge)反(fan)應(ying)孔中(zhong)加入2M硫(liu)酸(suan)0.05ml
6、結果(guo)判(pan)定：可於白(bai)色背景上(shang)，直(zhi)接(jie)用肉眼(yan)觀察(cha)結果(guo)：反(fan)應(ying)孔內顏色越(yue)深，陽(yang)性(xing)程度越(yue)強(qiang)，陰(yin)性(xing)反應(ying)為無色或(huo)極(ji)淺，依(yi)據所呈(cheng)顏色的(de)深淺(qian)，以(yi)“+”、“-”號(hao)表(biao)示。也(ye)可測(ce)OD值(zhi)：在ELISA檢測儀上(shang)，於450nm(若(ruo)以(yi)ABTS顯(xian)色，則40nm)處，以(yi)空白(bai)對照孔調(tiao)零(ling)後(hou)測(ce)各(ge)孔OD值(zhi)，若(ruo)大(da)於規(gui)定的(de)陰(yin)性(xing)對照OD值(zhi)的(de)2.倍(bei)，即(ji)為陽(yang)性(xing)