雙花(hua)扁豆凝(ning)集素(su)ELISA試(shi)劑盒(he)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾心法

雙(shuang)花(hua)扁豆凝(ning)集素(su)ELISA試(shi)劑盒(he)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾心法:

.包被(bei)：用0.05MPH9.牰碳酸(suan)鹽(yan)包被緩沖液將抗(kang)體(ti)稀釋至蛋白(bai)質(zhi)含量為(wei)～0μg/ml。在每(mei)個(ge)聚(ju)苯乙烯板的(de)反(fan)應孔中(zhong)加0.ml，4℃ 過(guo)夜(ye)。次(ci)日(ri)，棄(qi)去(qu)孔內溶液，用洗(xi)滌緩沖液洗(xi)3次(ci)，每次(ci)3分鐘。（簡稱(cheng)洗(xi)滌，下(xia)同）。
2. 加(jia)樣：加壹定(ding)稀(xi)釋的(de)待(dai)檢樣品0.ml於上(shang)述(shu)已包(bao)被之反應(ying)孔中(zhong)，置37℃ 孵育(yu)小時。然後洗(xi)滌。（同時做(zuo)空(kong)白(bai)孔，陰性(xing)對(dui)照孔及陽(yang)性(xing)對(dui)照孔）。
3. 加酶標抗(kang)體(ti)：於各(ge)反(fan)應(ying)孔中(zhong)，加入(ru)新(xin)鮮稀(xi)釋的(de)酶標抗(kang)體(ti)（經滴定(ding)後(hou)的(de)稀(xi)釋度）0.ml。37℃ 孵育(yu)0.5～小時，洗(xi)滌。
4. 加(jia)底(di)物液顯(xian)色：於各(ge)反(fan)應(ying)孔中(zhong)加入(ru)臨(lin)時配制(zhi)的(de)TMB底(di)物溶液0.ml，37℃ 0～30分鐘。
5. 終止反應：於(yu)各(ge)反(fan)應(ying)孔中(zhong)加入(ru)2M硫(liu)酸(suan)0.05ml。
6. 結(jie)果判(pan)定(ding)：可(ke)於(yu)白(bai)色(se)背景(jing)上(shang)，直接用肉(rou)眼觀(guan)察(cha)結(jie)果：反應孔內顏色越深，陽(yang)性(xing)程度越強，陰(yin)性(xing)反(fan)應(ying)為(wei)無色或(huo)極(ji)淺(qian)，依據所(suo)呈顏色(se)的(de)深(shen)淺(qian)，以“+”、“-”號表示(shi)。也(ye)可測(ce)OD值(zhi)：在ELISA檢(jian)測(ce)儀上(shang)，於450nm（若(ruo)以ABTS顯(xian)色(se)，則(ze)40nm）處，以空(kong)白(bai)對(dui)照孔調零後(hou)測(ce)各(ge)孔OD值(zhi)，若(ruo)大於規(gui)定(ding)的(de)陰(yin)性(xing)對(dui)照OD值(zhi)的(de)2.倍(bei)，即為(wei)陽(yang)性(xing)。