尿素氮測(ce)試盒(he)​操(cao)作步驟

尿素氮測(ce)試盒(he)操(cao)作步驟：

. 標準(zhun)品(pin)的稀釋與(yu)加(jia)樣(yang)：在(zai)酶標包(bao)被(bei)板上(shang)設標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)0孔(kong)，在di壹、第(di)二孔中(zhong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品(pin)00μl，然(ran)後(hou)在(zai)di壹、第(di)二孔中(zhong)加(jia)標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻；然後(hou)從(cong)di壹孔(kong)、第(di)二孔中(zhong)各(ge)取(qu)00μl分(fen)別加(jia)到第(di)三孔和(he)第(di)四孔(kong)，再(zai)在(zai)第(di)三、第四孔(kong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻；然後(hou)在(zai)第三孔和(he)第(di)四孔(kong)中(zhong)先(xian)各(ge)取(qu)50μl棄掉，再(zai)各(ge)取(qu)50μl分(fen)別加(jia)到第(di)五(wu)、第(di)六孔(kong)中(zhong)，再(zai)在(zai)第(di)五(wu)、第(di)六孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50ul，混(hun)勻；混勻(yun)後(hou)從(cong)第五(wu)、第(di)六孔(kong)中(zhong)各(ge)取(qu)50μl分(fen)別加(jia)到第(di)七、第(di)八(ba)孔中(zhong)，再(zai)在(zai)第(di)七、第(di)八(ba)孔中(zhong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻後(hou)從(cong)第七、第(di)八(ba)孔中(zhong)分(fen)別取50μl加(jia)到第(di)九、第十(shi)孔中(zhong)，再(zai)在(zai)第(di)九第十(shi)孔分(fen)別加(jia)標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻後(hou)從(cong)第九第十(shi)孔中(zhong)各(ge)取(qu)50μl棄掉。（稀釋後(hou)各(ge)孔加(jia)樣(yang)量(liang)都為50μl，濃度分(fen)別為80 ng/L，20 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，5 ng/L）。

2. 加(jia)樣(yang)：分(fen)別設空(kong)白(bai)孔(kong)（空白(bai)對(dui)照孔(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶標試劑，其余各(ge)步操(cao)作相同(tong)）、待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標包(bao)被(bei)板上(shang)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)最終(zhong)稀釋度為5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於酶標板(ban)孔(kong)底(di)部，盡量不觸(chu)及(ji)孔壁，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混勻。

3. 溫(wen)育：用封(feng)板膜封(feng)板後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。

4. 配(pei)液：將(jiang)30（48T的20倍）倍(bei)濃縮洗滌液用(yong)蒸餾水(shui)30（48T的20倍）倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備(bei)用(yong)。

5. 洗滌：小(xiao)心揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜，棄去(qu)液體(ti)，甩幹，每孔加(jia)滿洗滌液，靜(jing)置(zhi)30秒(miao)後(hou)棄去(qu)，如此重復5次(ci)，拍幹(gan)。

6. 加(jia)酶：每孔加(jia)入酶標試劑50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除外。

7. 溫(wen)育：操(cao)作同3。

8. 洗滌：操(cao)作同5。

9. 顯(xian)色：每孔先加(jia)入顯(xian)色劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光(guang)顯(xian)色5分(fen)鐘(zhong).

0. 終(zhong)止(zhi)：每孔加(jia)終止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此時藍(lan)色(se)立(li)轉黃色(se)）。

. 測(ce)定(ding)：以(yi)空白(bai)空(kong)調零，450nm波(bo)長(chang)依(yi)序測(ce)量(liang)各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度（OD值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應(ying)在加(jia)終止(zhi)液後(hou)5分(fen)鐘(zhong)。