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魚(yu)磷(lin)酸化腺苷酸活(huo)化蛋(dan)白激酶(mei)樣(yang)本(ben)處理及(ji)要(yao)求(qiu):
. 血(xue)清(qing):室(shi)溫血(xue)液(ye)自然(ran)凝固(gu)0-20分鐘,離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。仔細收(shou)集上(shang)清,保存(cun)過(guo)程中如(ru)出現沈澱(dian),應(ying)再(zai)次離(li)心(xin)。
2. 血(xue)漿(jiang):應(ying)根(gen)據標(biao)本的要(yao)求(qiu)選(xuan)擇(ze)EDTA或檸(ning)檬(meng)酸鈉作為抗(kang)凝劑(ji),混(hun)合0-20分鐘後,離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。仔細收(shou)集上(shang)清,保存(cun)過(guo)程中如(ru)有(you)沈澱(dian)形(xing)成,應(ying)該(gai)再(zai)次離(li)心(xin)。
3. 尿(niao)液(ye):用無菌管(guan)收(shou)集,離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。仔細收(shou)集上(shang)清,保存(cun)過(guo)程中如(ru)有(you)沈澱(dian)形(xing)成,應(ying)再(zai)次離(li)心(xin)。胸(xiong)腹水(shui)、腦(nao)脊(ji)液(ye)參(can)照(zhao)實行(xing)。
4. 細(xi)胞培養(yang)上(shang)清:檢測(ce)分泌性的成份時(shi),用(yong)無菌管(guan)收(shou)集。離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。仔細收(shou)集上(shang)清。檢測(ce)細胞內的成份時(shi),用(yong)PBS(PH7.2-7.4)稀(xi)釋細胞懸(xuan)液(ye),細胞濃度(du)達到
00萬/ml左右。通(tong)過反復(fu)凍(dong)融(rong),以使細胞破壞並(bing)放出(chu)細(xi)胞內成份。離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。仔細收(shou)集上(shang)清。保存(cun)過(guo)程中如(ru)有(you)沈澱(dian)形(xing)成,應(ying)再(zai)次離(li)心(xin)。
5. 組織(zhi)標(biao)本(ben):切割(ge)標(biao)本(ben)後,稱(cheng)取重(zhong)量。加入(ru)壹(yi)定量(liang)的PBS,PH7.4。用(yong)液(ye)氮(dan)迅速(su)冷(leng)凍(dong)保(bao)存(cun)備(bei)用。標本融(rong)化後仍(reng)然(ran)保持2-8℃的溫度(du)。加(jia)入壹定量的(de)PBS(PH7.4),用(yong)手(shou)工(gong)或勻(yun)漿器將標(biao)本(ben)勻(yun)漿充分。離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。仔細收(shou)集上(shang)清。分裝後壹份待(dai)檢測(ce),其余冷凍(dong)備用(yong)。
6. 標本采(cai)集(ji)後盡早進行(xing)提(ti)取,提取按相(xiang)關(guan)文獻進(jin)行(xing),提(ti)取後應(ying)盡(jin)快(kuai)進行(xing)實驗(yan)。若不能馬(ma)上(shang)進行試(shi)驗(yan),可(ke)將標(biao)本(ben)放(fang)於-20℃保存(cun),但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong).
7. 不能檢測(ce)含NaN3的(de)樣(yang)品,因(yin)NaN3抑制(zhi)辣(la)根過(guo)氧(yang)化物酶(mei)的(de)(HRP)活(huo)性。
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