【概(gai)要描述(shu)】人肝竇(dou)內皮(pi)細胞公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的產品：U251 MG/TMZ人類(lei)星(xing)形膠質瘤(liu)耐細(xi)胞果蠅(ying)胚胎細胞S2人彌漫(man)大(da)B細(xi)胞淋巴(ba)瘤(liu)細(xi)胞 OCI-LY7(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))人紅(hong)白細(xi)胞白血病細(xi)胞HEL(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))人腎癌細胞A-704(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))大(da)鼠(shu)表皮(pi)幹(gan)細胞人肺(fei)腺(xian)癌細(xi)胞NCI-H292(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))人B淋巴(ba)母(mu)細(xi)胞瘤(liu)pfeiffer(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)人結直腸腺(xian)癌上皮(pi)細(xi)胞DLD-1(STR鑒(jian)定(ding)正確(que))人肺(fei)鱗癌細(xi)

人肝竇(dou)內皮(pi)分(fen)離(li)自(zi)肝臟組(zu)織；肝(gan)臟是身(shen)體內以代(dai)謝功能(neng)為(wei)主的(de)壹(yi)個器官，並(bing)在(zai)身(shen)體裏面(mian)起(qi)著去氧化(hua)、儲(chu)存(cun)肝(gan)糖(tang)、分(fen)泌(mi)性蛋白質的(de)合(he)成等作用(yong)；肝臟也制造消(xiao)化(hua)系統(tong)中之(zhi)膽(dan)汁。肝(gan)臟是機(ji)體內臟裏最(zui)大(da)的(de)器官，位於(yu)機體(ti)中(zhong)的(de)腹(fu)部(bu)位置，在(zai)右(you)側橫隔膜(mo)之下(xia)，位於(yu)膽(dan)囊之前(qian)端且於(yu)右邊腎臟的前(qian)方，胃的上方。肝臟是機(ji)體消(xiao)化(hua)系統(tong)中最(zui)大(da)的(de)消(xiao)化(hua)腺(xian)，為壹(yi)紅(hong)棕(zong)色(se)的(de)V字形器官。肝(gan)臟是尿(niao)素合(he)成的主要器官，又(you)是(shi)新(xin)陳(chen)代(dai)謝的(de)重(zhong)要器官。肝(gan)臟在機(ji)體位置和形態(tai)結構(gou)：肝(gan)臟位於(yu)右上腹(fu)，隱(yin)藏(zang)在(zai)右側膈(ge)下和肋(lei)骨深面(mian)，大(da)部(bu)分(fen)肝(gan)為肋(lei)弓所復(fu)蓋，僅在(zai)腹上區(qu)、右肋(lei)弓間露(lu)出(chu)並(bing)直接接觸腹前(qian)壁(bi)，肝(gan)上面(mian)則與(yu)膈(ge)及(ji)腹前(qian)壁(bi)相(xiang)接。肝竇(dou)內皮(pi)細胞（SEC）是(shi)肝(gan)臟內所(suo)占比例(li)最(zui)高的非實質細(xi)胞，位於(yu)肝竇(dou)腔(qiang)與(yu)肝細(xi)胞之(zhi)間，具有物(wu)質轉(zhuan)運(yun)、吞(tun)噬、抗原(yuan)提呈(cheng)、免(mian)疫(yi)耐受等功能(neng)。SEC由(you)於(yu)擁有壹般細(xi)胞所(suo)沒有的窗孔結構(gou)、細(xi)胞間連(lian)結松散(san)、內皮(pi)下缺少基(ji)底(di)膜(mo)而(er)使其具有高度通透(tou)性，從而(er)達到快(kuai)速交換各(ge)種(zhong)大(da)小(xiao)分(fen)子的(de)目的(de)。肝(gan)在(zai)遭(zao)到多種(zhong)病原(yuan)侵(qin)襲時(shi)，肝竇(dou)內皮(pi)細胞窗孔逐漸(jian)減少(shao)或(huo)消(xiao)失，內皮(pi)下基膜(mo)形成，產生(sheng)類(lei)似(si)於(yu)連續(xu)型(xing)毛細(xi)血管(guan)的結(jie)構(gou)，這(zhe)壹(yi)過程稱為(wei)肝竇(dou)毛細(xi)血管(guan)化。它(ta)由多(duo)種(zhong)因(yin)素引起，其過程極復(fu)雜，在(zai)多種(zhong)肝病的(de)發病前(qian)期階段均有出(chu)現(xian)，近年(nian)來受到廣(guang)泛(fan)關(guan)註(zhu)。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的人肝竇(dou)內皮(pi)采用(yong)混合酶灌流消(xiao)化(hua)、反復(fu)低(di)速離(li)心(xin)、密(mi)度(du)梯(ti)度離(li)心(xin)法(fa)，並(bing)通(tong)過內皮(pi)細胞專(zhuan)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)篩(shai)選制備而(er)來，細(xi)胞總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的人肝竇(dou)內皮(pi)經(jing)CD31、CD14免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純度(du)可(ke)達90%以上，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母和真(zhen)菌等。

本公(gong)司所有產品僅(jin)供(gong)科(ke)學實驗(yan)，不(bu)做其他(ta)科(ke)學實驗(yan)外(wai)的(de)使用(yong)！

包被(bei)條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml），明(ming)膠（0.1%）

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液壹次(ci)

生(sheng)長特(te)性 貼壁(bi)

細(xi)胞形態(tai) 內皮(pi)細胞樣(yang)

傳代(dai)特(te)性 可(ke)傳1-2代(dai)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實驗(yan)器材準備：準備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術(shu)器械(xie)等，並(bing)進(jin)行(xing)高壓滅菌或(huo)其他(ta)合適(shi)的消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑準備：配制或(huo)購買合適(shi)的培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試(shi)劑，確(que)保(bao)其無(wu)菌且(qie)在有效(xiao)期內。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據(ju)實驗(yan)需(xu)求，選擇合適(shi)的動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應的麻醉或(huo)處(chu)死，獲(huo)取(qu)所(suo)需組(zu)織；或(huo)從(cong)已(yi)有的組(zu)織樣(yang)本庫(ku)中獲取(qu)組(zu)織。

取(qu)材(cai)與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出(chu)目標組(zu)織，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組(zu)織的(de)損(sun)傷，並(bing)去除多余的脂肪、結締組(zu)織等非目的(de)組(zu)織。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌PBS沖(chong)洗數次(ci)，以去除血液和雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的組(zu)織塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的離心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時(shi)間。期間可(ke)輕輕(qing)搖(yao)晃離(li)心(xin)管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成單(dan)細胞懸液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血清的培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過濾(lv)細(xi)胞懸液，去除未消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織碎(sui)片，然後將(jiang)濾(lv)液以適(shi)當(dang)的轉速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞的(de)形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密(mi)度(du)等，記(ji)錄細(xi)胞的(de)變(bian)化(hua)情況(kuang)，如(ru)發現(xian)細胞汙染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采取(qu)相(xiang)應措施(shi)。
2. 細胞計數與(yu)活力檢測(ce)：在(zai)需要時(shi)，可(ke)采用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色等方法(fa)對(dui)細(xi)胞進(jin)行(xing)計數和活(huo)力檢測(ce)，以了解(jie)細胞的(de)生(sheng)長情況(kuang)和健(jian)康狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速操作(zuo)

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立即處(chu)理，避免長時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使用(yong)無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水沖(chong)洗組(zu)織，去除血液、雜質。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織類(lei)型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免過度(du)消(xiao)化(hua)導致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞解(jie)離狀態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使用(yong)含(han)血清或(huo)特(te)定生(sheng)長因(yin)子的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞需(xu)添加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次(ci)，減少(shao)細(xi)胞適(shi)應壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要包被(bei)培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控制在 70%-80%，過度(du)匯合(he)會(hui)導致接觸抑制和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染控制

1. 無(wu)菌操作(zuo)

- 全程在超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使用(yong)壹(yi)次(ci)性耗(hao)材，避免交叉汙染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙(shuang)抗，但長期使用(yong)可(ke)能影(ying)響細(xi)胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支(zhi)原體汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後需及(ji)時(shi)丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀態(tai)監控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞形態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色，及(ji)時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如(ru)細胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增多(duo)）可(ke)能提示汙染或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數有限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍存(cun)早期代(dai)次(ci)細胞。

- 凍(dong)存(cun)液建議(yi)使用(yong) DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存培(pei)養(yang)基(ji)），梯(ti)度降溫後(hou)液氮保(bao)存(cun)。