【概(gai)要(yao)描(miao)述】人胃(wei)黏膜上(shang)皮(pi)細胞公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：U251 MG/TMZ+LUC(3000)人類(lei)星(xing)形(xing)膠(jiao)質(zhi)瘤耐細胞熒(ying)光(guang)酶(mei)標記人類(lei)星(xing)形(xing)膠(jiao)質(zhi)瘤耐細胞U251MG/TMZ (STR鑒定(ding)正確(que))小鼠(shu)淋巴瘤細胞EL-4-B51（種(zhong)屬(shu)鑒定(ding)）人肝(gan)細胞HL-7702[L-02](STR鑒定(ding)正確(que))負鼠(shu)腎細胞OK（種(zhong)屬(shu)鑒定(ding)）中(zhong)國倉鼠(shu)卵(luan)巢(chao)細胞CTLA4 Ig-24（種(zhong)屬(shu)鑒定(ding)）小(xiao)鼠網織(zhi)細胞肉(rou)瘤M5076（種屬(shu)鑒定(ding)）人非(fei)小(xiao)細胞肺(fei)癌(ai)細胞 NC

本公(gong)司(si)所有產品(pin)僅(jin)供科學(xue)實驗，不做其(qi)他科學(xue)實(shi)驗外(wai)的使用！

人胃(wei)黏膜上(shang)皮(pi)分(fen)離(li)自胃(wei)黏膜組(zu)織(zhi)；胃(wei)黏膜柔(rou)軟，活體(ti)呈橘紅(hong)色。胃(wei)空虛時形(xing)成(cheng)許多(duo)皺襞，充盈(ying)時變平坦。幽(you)門(men)處(chu)的黏膜形(xing)成(cheng)環(huan)形皺襞，突向腔內(nei)稱(cheng)幽(you)門(men)瓣(ban)。胃(wei)黏膜可(ke)分(fen)為三(san)層(ceng)，即上(shang)皮(pi)層(ceng)（單層(ceng)柱狀(zhuang)上(shang)皮(pi)）、固有(you)層(ceng)（由結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)構成(cheng)、含(han)有(you)大量的胃(wei)腺(xian)）和黏(nian)膜肌(ji)層(ceng)（為薄層(ceng)平滑肌(ji)、排列(lie)成(cheng)內環(huan)外(wai)縱）。胃(wei)黏膜上(shang)皮(pi)細胞源(yuan)自胃(wei)黏膜的(de)上(shang)皮(pi)層(ceng)，細胞為單(dan)層(ceng)柱狀(zhuang)上(shang)皮(pi)，排列(lie)整(zheng)齊，能分(fen)泌(mi)黏液(ye)覆(fu)蓋(gai)於胃(wei)黏膜的(de)表(biao)面，防(fang)止(zhi)胃(wei)酸(suan)和胃(wei)dan白酶(mei)對胃(wei)黏膜的(de)損(sun)害。體(ti)外(wai)培養(yang)胃(wei)黏膜上(shang)皮(pi)細胞為研(yan)究(jiu)細胞功能及(ji)致病(bing)因(yin)子(zi)、藥物(wu)、激(ji)素(su)對細胞的(de)損(sun)傷、保護和功能調控提供了簡單而(er)的模(mo)型。
方(fang)法簡(jian)介：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分(fen)離(li)的(de)人胃(wei)黏膜上(shang)皮(pi)采(cai)用yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)混(hun)合消化(hua)法結(jie)合(he)差速(su)貼壁(bi)法，並通(tong)過上(shang)皮(pi)細胞專用培養(yang)基(ji)培養(yang)篩(shai)選制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞總量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分(fen)離(li)的(de)人胃(wei)黏膜上(shang)皮(pi)經Cytokeratin-18免疫熒光(guang)鑒定(ding)，純(chun)度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細菌(jun)、酵母和真菌(jun)等。

包(bao)被條(tiao)件 鼠(shu)尾(wei)膠(jiao)原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性 貼壁(bi)

細胞形(xing)態(tai) 上(shang)皮(pi)細胞樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特(te)性 可(ke)傳(chuan)2-3代(dai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準備(bei)：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器械(xie)等，並進行高壓(ya)滅菌(jun)或其(qi)他合適(shi)的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準備：配制或(huo)購(gou)買(mai)合適(shi)的培養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎(tai)牛血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確保其(qi)無(wu)菌(jun)且在(zai)有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實(shi)驗動物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根(gen)據實驗需求，選擇(ze)合適(shi)的動物(wu)並進行相應的(de)麻醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所需組(zu)織(zhi)；或從(cong)已有(you)的組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌(jun)條件下(xia)，迅(xun)速取(qu)出(chu)目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡量減(jian)少(shao)對組(zu)織(zhi)的損(sun)傷，並去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取出的組(zu)織(zhi)用預冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數次(ci)，以去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便後續(xu)消化(hua)。

細胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含有適量消化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培養(yang)箱中(zhong)消化(hua)壹(yi)段時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心(xin)管(guan)，使(shi)消化(hua)更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細胞團(tuan)時，加入含血清的(de)培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾與(yu)離(li)心：用(yong)細胞篩(shai)過濾細胞懸液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎片，然後將濾液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉速(su)離(li)心，收(shou)集細胞沈澱。

細胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)：每天(tian)用倒置顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細胞的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄細胞的(de)變化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細胞汙染或異(yi)常，及(ji)時采(cai)取(qu)相應(ying)措施(shi)。
2. 細胞計數與(yu)活(huo)力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要時，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼藍(lan)染色等方(fang)法對細胞進(jin)行計數和(he)活力(li)檢測，以了解(jie)細胞的(de)生(sheng)長(chang)情況和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後需(xu)立(li)即處(chu)理(li)，避(bi)免長(chang)時間(jian)暴(bao)露於室溫或非營(ying)養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類(lei)型選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避(bi)免過度消化(hua)導致細胞損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格(ge)控制（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯微鏡觀(guan)察(cha)細胞解(jie)離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件優化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或特定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞需(xu)添加胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌或批次，減(jian)少(shao)細胞適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原代細胞貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被培養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋白、多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度(du)建議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過度匯合會(hui)導致接觸抑制(zhi)和(he)分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染控制

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺操(cao)作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次性耗材(cai)，避(bi)免交(jiao)叉汙染。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙(shuang)抗(kang)，但長(chang)期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)汙染（如 PCR 法），汙染後需(xu)及(ji)時丟(diu)棄細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查細胞形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色，及(ji)時更換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常每 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常形態(tai)（如(ru)細胞變圓(yuan)、碎片增(zeng)多）可(ke)能(neng)提示(shi)汙染或營(ying)養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原代細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍存(cun)早(zao)期代(dai)次(ci)細胞。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血清（或專用凍存(cun)培養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮保存(cun)。