【概要描述】人(ren)直(zhi)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞公(gong)司(si)正在出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：U266人(ren)骨髓瘤(liu)細(xi)胞人(ren)多發(fa)性(xing)骨(gu)髓瘤(liu)細(xi)胞帶熒(ying)光(guang)酶MM.1S+LUC(STR鑒定正確)人(ren)非小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌(ai)細(xi)胞NCI-H23(STR鑒定正確)人(ren)神(shen)經母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞SK-N-SH(STR鑒定正確)豬(zhu)內(nei)皮細(xi)胞PED(種(zhong)屬鑒定)人(ren)結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞HT-29(STR鑒定正確)人(ren)膽囊(nang)癌(ai)細(xi)胞GBC-SD(STR鑒定正確)人(ren)非小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌(ai)腺癌(ai)細(xi)胞NCI-H522 (STR鑒定正確)小(xiao)鼠腫瘤(liu)細(xi)胞系(xi)

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科學實(shi)驗，不做其他(ta)科學實(shi)驗外(wai)的使用！

人(ren)直(zhi)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)分(fen)離自直(zhi)腸(chang)組織；直(zhi)腸(chang)為(wei)大腸(chang)的(de)未段(duan)，位(wei)於小(xiao)骨(gu)盆內(nei)。上端平第(di)3骶(di)椎(zhui)處接續(xu)乙狀(zhuang)結腸(chang)，沿(yan)骶骨(gu)和(he)尾(wei)骨(gu)的前(qian)面(mian)下(xia)行，穿(chuan)過(guo)盆(pen)膈，下(xia)端以(yi)而終。直(zhi)腸(chang)上(shang)端的(de)大小(xiao)似(si)結腸(chang)，其下(xia)端擴(kuo)大成(cheng)直(zhi)腸(chang)壺(hu)腹(fu)，是(shi)糞便(bian)排出(chu)前(qian)的(de)暫(zan)存部(bu)位(wei)，最(zui)下(xia)端變(bian)細(xi)接肛管。直(zhi)腸(chang)在(zai)盆腔內的(de)位置(zhi)與骶椎(zhui)腹(fu)面(mian)關(guan)系密(mi)切，與骶椎(zhui)有(you)相(xiang)同的曲(qu)度。直(zhi)腸(chang)周(zhou)圍(wei)多(duo)脂(zhi)肪(fang)、無(wu)縱(zong)帶，位(wei)於膀(pang)胱和(he)生殖(zhi)器(qi)官的背(bei)側。直(zhi)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞原(yuan)代分(fen)離培養3天(tian)後(hou)，可(ke)見細(xi)胞貼(tie)壁伸展，細(xi)胞形(xing)態大小(xiao)不壹，呈(cheng)梭形(xing)、不規則形(xing)、三角形(xing)或扇(shan)形(xing)，核卵(luan)圓形(xing)、居(ju)中；2周(zhou)後細(xi)胞匯(hui)合，多(duo)數細(xi)胞伸(shen)展呈長(chang)梭(suo)形(xing)，胞漿(jiang)豐富(fu)，有(you)分(fen)枝狀(zhuang)突起(qi)，細(xi)胞平(ping)行排列成(cheng)單層或部(bu)分(fen)區域(yu)多層重(zhong)疊(die)生長(chang)，高低起(qi)伏(fu)；細(xi)胞密(mi)度低時(shi)，常(chang)交織成(cheng)網(wang)狀(zhuang)；密(mi)度高時，則排列為(wei)旋渦(wo)狀(zhuang)或(huo)柵欄狀(zhuang)。傳(chuan)代(dai)後(hou)細(xi)胞生長(chang)較(jiao)快，4-6天(tian)即(ji)可(ke)匯(hui)合，並(bing)保持上述形(xing)態學特(te)征(zheng)和(he)生長(chang)特(te)點(dian)。直(zhi)腸(chang)的(de)動脈血(xue)供(gong)主(zhu)要是(shi)來自腸(chang)系(xi)膜下(xia)動脈的(de)直(zhi)腸(chang)上(shang)動脈，來(lai)自髂內動脈的(de)直(zhi)腸(chang)中動脈和(he)來(lai)自髂內動脈的(de)直(zhi)腸(chang)下(xia)動脈。平(ping)滑(hua)肌(ji)收縮是(shi)胃(wei)腸(chang)蠕(ru)動中基本的運(yun)動(dong)方式；腸(chang)炎(yan)時(shi)由(you)於平(ping)滑(hua)肌(ji)特(te)殊(shu)肌(ji)動(dong)蛋白(bai)的增(zeng)加導(dao)致(zhi)了(le)平滑(hua)肌(ji)層的增(zeng)厚(hou)。平滑肌(ji)肌(ji)動(dong)蛋白(bai)可(ke)能(neng)影響(xiang)收縮力的(de)產生，這進(jin)壹(yi)步(bu)證明(ming)了(le)炎(yan)癥(zheng)時(shi)的(de)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞具(ju)有可(ke)塑性(xing)。利(li)用腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞的(de)培養，可(ke)以(yi)幫助(zhu)了(le)解收縮、增殖(zhi)和(he)胃(wei)腸(chang)道(dao)結締(di)組織對(dui)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞的(de)反應(ying)。
方法(fa)簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗室(shi)分(fen)離的人(ren)直(zhi)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)采(cai)用yi蛋白(bai)酶-膠原酶聯合消(xiao)化法(fa)結合差(cha)速貼壁法制備而(er)來，細(xi)胞總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司(si)實(shi)驗室(shi)分(fen)離的人(ren)直(zhi)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)經α-SMA免(mian)疫熒光鑒定，純(chun)度可(ke)達(da)90%以(yi)上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌等。

培(pei)養基(ji) 含FBS、生長(chang)添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次

生長(chang)特(te)性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞形(xing)態 成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代特(te)性 可(ke)傳5代(dai)左右(you)；3代以(yi)內狀(zhuang)態(tai)

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離心管、手(shou)術器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高壓滅菌或其他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配制或(huo)購(gou)買(mai)合適(shi)的(de)培(pei)養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎(tai)牛血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其無(wu)菌且在(zai)有(you)效期內。

3. 實(shi)驗動(dong)物或組織來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的(de)動(dong)物並進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉或(huo)處死，獲取所需(xu)組織；或(huo)從(cong)已有(you)的(de)組織樣(yang)本庫(ku)中獲取組織。

取材與處理

1. 取材：在無(wu)菌條件(jian)下(xia)，迅速取出(chu)目(mu)標組織，盡(jin)量(liang)減少(shao)對組織的(de)損(sun)傷，並(bing)去除(chu)多余(yu)的(de)脂(zhi)肪、結締(di)組織等(deng)非目(mu)的(de)組織。

2. 清(qing)洗：將取出(chu)的(de)組織用預冷(leng)的無(wu)菌PBS沖洗數(shu)次，以(yi)去除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜質。

3. 剪(jian)切：將組織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便(bian)後續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞分(fen)離

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎的組織塊放入(ru)含有適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶的離心管中，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養箱(xiang)中消化壹段(duan)時(shi)間(jian)。期間(jian)可(ke)輕輕搖晃(huang)離心管，使消化更(geng)均勻。

2. 終止消(xiao)化：當(dang)組織塊大部(bu)分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時，加入(ru)含血(xue)清的(de)培養基(ji)終止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與離心：用細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未消(xiao)化(hua)的(de)組織碎(sui)片，然後(hou)將濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心，收集細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀察(cha)與檢(jian)測

1. 日常(chang)觀察(cha)：每(mei)天(tian)用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡觀察(cha)細(xi)胞的(de)形(xing)態、生長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的(de)變(bian)化情況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細(xi)胞汙染(ran)或異(yi)常，及(ji)時采(cai)取相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞計數與活(huo)力檢(jian)測：在需(xu)要時，可(ke)采(cai)用臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等方法(fa)對(dui)細(xi)胞進(jin)行(xing)計數和(he)活(huo)力檢(jian)測，以(yi)了(le)解細(xi)胞的(de)生長(chang)情況(kuang)和(he)健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材與分(fen)離

1. 快速操作

- 組織取材後需(xu)立(li)即(ji)處理，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於室(shi)溫(wen)或非營(ying)養環(huan)境。

- 使用無(wu)菌 PBS 或生理鹽(yan)水(shui)沖洗組織，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根(gen)據組織類型(xing)選擇(ze)消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度消化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞損(sun)傷。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需(xu)嚴格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡觀察(cha)細(xi)胞解(jie)離狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養條(tiao)件(jian)優化

1. 培(pei)養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用含血(xue)清或(huo)特定生長(chang)因(yin)子的(de)培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)品(pin)牌或批(pi)次，減少(shao)細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與傳代(dai)

- 原(yuan)代細(xi)胞貼(tie)壁能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要包(bao)被培(pei)養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度建議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑制和(he)分(fen)化。

三(san)、汙染(ran)控制

1. 無(wu)菌操作

- 全(quan)程在(zai)超凈臺操作，使用壹次性耗(hao)材，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養基(ji)中可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可(ke)能(neng)影響(xiang)細(xi)胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測

- 定期檢(jian)測支(zhi)原體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後需(xu)及時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞形(xing)態、密度及培(pei)養基(ji)顏色(se)，及時(shi)更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次）。

- 異(yi)常形(xing)態（如(ru)細(xi)胞變(bian)圓、碎(sui)片增多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或營(ying)養不足。

2. 傳(chuan)代與凍存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞分(fen)裂次數有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建議(yi)使用 DMSO+血(xue)清（或(huo)專用凍存(cun)培(pei)養基(ji)），梯度降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮(dan)保存(cun)。