【概要(yao)描(miao)述】人(ren)肝內膽(dan)管(guan)上皮細胞公(gong)司正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品(pin)：TU212人(ren)喉(hou)癌(ai)細胞小(xiao)鼠(shu)皮(pi)下結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)細胞L Wnt 3A（種(zhong)屬鑒(jian)定(ding)）人(ren)胰腺癌(ai)細胞HPAF-II(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)大(da)鼠(shu)腸(chang)間質細(xi)胞人(ren)非小(xiao)細(xi)胞肺癌(ai)細胞熒(ying)光(guang)酶標記(ji) HCC827+luc (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)小(xiao)鼠(shu)韌帶成纖維細胞專(zhuan)用(yong)培(pei)養基人(ren)慢性(xing)骨髓(sui)單核細(xi)胞性(xing)白血(xue)病(bing)MV-4-11(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)小(xiao)鼠(shu)胰島瘤胰(yi)島(dao)β細胞Beta-TC-6（種(zhong)屬鑒(jian)定(ding)）人(ren)胃癌(ai)細胞熒(ying)光(guang)酶標記(ji) NCI-

人(ren)肝內膽(dan)管(guan)上皮分離自(zi)肝(gan)臟組(zu)織(zhi)；肝臟是(shi)身(shen)體內以(yi)代(dai)謝功(gong)能為主的壹個器(qi)官，並(bing)在身(shen)體裏面起(qi)著去(qu)氧(yang)化、儲(chu)存(cun)肝糖(tang)、分泌(mi)性(xing)蛋(dan)白質(zhi)的(de)合(he)成等作(zuo)用(yong)；肝臟也制造(zao)消化系(xi)統中之膽(dan)汁(zhi)。肝(gan)臟是(shi)機體內臟裏(li)最(zui)大(da)的(de)器(qi)官，位(wei)於(yu)機體中的腹部位(wei)置，在右(you)側(ce)橫隔(ge)膜(mo)之下，位於(yu)膽囊(nang)之前端且於(yu)右(you)邊(bian)腎臟的(de)前方，胃的(de)上(shang)方。肝臟是(shi)機體消化系(xi)統中最(zui)大(da)的(de)消化腺，為壹紅(hong)棕色(se)的V字(zi)形(xing)器(qi)官。肝(gan)臟是(shi)尿素合(he)成的主要(yao)器(qi)官，又是(shi)新(xin)陳代(dai)謝的(de)重要(yao)器(qi)官。肝(gan)臟在機體位置和形(xing)態結(jie)構(gou)：肝(gan)臟位(wei)於(yu)右(you)上(shang)腹，隱藏在右(you)側(ce)膈下和肋(lei)骨深面，大(da)部分(fen)肝為肋(lei)弓(gong)所(suo)復(fu)蓋(gai)，僅在腹上區(qu)、右(you)肋(lei)弓(gong)間(jian)露(lu)出(chu)並直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)腹前壁(bi)，肝(gan)上(shang)面則與膈(ge)及腹前壁(bi)相(xiang)接(jie)。通(tong)過控制激(ji)素(su)調(tiao)控的分泌(mi)和吸(xi)收，在保(bao)持(chi)、調(tiao)整和擴(kuo)大(da)膽(dan)小(xiao)管(guan)的結(jie)構(gou)中(zhong)發(fa)揮重要(yao)作(zuo)用(yong)，肝內膽(dan)管(guan)上皮細胞在先天(tian)性(xing)和(he)獲(huo)得(de)性(xing)免疫應答方面起(qi)著積(ji)極(ji)作用。肝(gan)內膽(dan)管(guan)上皮細胞約(yue)占肝(gan)細(xi)胞總數的(de)5%，其在肝內膽(dan)道(dao)系(xi)統內形(xing)成復(fu)雜(za)的網(wang)狀(zhuang)管(guan)形(xing)結(jie)構(gou)。肝(gan)內膽(dan)管(guan)上皮細胞具有復(fu)雜(za)的生(sheng)理(li)代(dai)謝功(gong)能，參與肝(gan)臟的(de)代(dai)謝、排(pai)泌(mi)、免疫等生(sheng)理(li)過程(cheng)，在肝臟疾(ji)病(bing)的發(fa)生(sheng)發(fa)展(zhan)過程(cheng)中起(qi)壹定的作用(yong)。研究(jiu)表明(ming)，常見(jian)的肝(gan)內膽(dan)管(guan)病變(bian)例如(ru)原發性(xing)硬(ying)化性(xing)膽(dan)管(guan)炎、膽管(guan)癌(ai)等疾(ji)病(bing)，都是(shi)以肝內膽(dan)管(guan)上皮細胞為(wei)病(bing)變(bian)靶(ba)位，進(jin)而(er)引(yin)起(qi)肝內膽(dan)管(guan)上皮損傷。因此，了解正(zheng)常肝(gan)內膽(dan)管(guan)上皮細胞的(de)生(sheng)物(wu)學(xue)特征和病(bing)變(bian)肝(gan)內膽(dan)管(guan)上皮細胞的(de)病(bing)理(li)特征對(dui)研究(jiu)肝內膽(dan)管(guan)病變(bian)的(de)發(fa)病(bing)機(ji)制、診斷(duan)和治(zhi)療(liao)具有重要(yao)意義(yi)。
方法簡(jian)介(jie)：

公司實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)人(ren)肝內膽(dan)管(guan)上皮采(cai)用膠(jiao)原酶灌註(zhu)消化法後(hou)，再用膠(jiao)原酶-DNA酶聯合(he)消化，接(jie)種(zhong)至(zhi)預先(xian)包被(bei)鼠尾膠(jiao)原的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，通(tong)過上(shang)皮細胞專(zhuan)用(yong)培(pei)養基培(pei)養篩選(xuan)制備(bei)而來，細胞總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢測：

公司實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)人(ren)肝內膽(dan)管(guan)上皮經(jing)Cytokeratin-19免疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純度(du)可(ke)達90%以(yi)上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)、酵(jiao)母和真(zhen)菌(jun)等。

本公司所(suo)有產品(pin)僅(jin)供科學實驗(yan)，不做其他科學(xue)實驗(yan)外的(de)使(shi)用(yong)！

包被(bei)條(tiao)件(jian) 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基 含FBS、生(sheng)長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞形(xing)態 上皮細胞樣(yang)

傳代(dai)特性(xing) 可(ke)傳2-3代(dai)

消化液 0.25%yi蛋白酶

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工作(zuo)

1. 實驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的(de)培(pei)養皿、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離心管(guan)、手術器(qi)械(xie)等，並(bing)進(jin)行高壓滅菌(jun)或其他合(he)適(shi)的消毒處理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購買合(he)適(shi)的培(pei)養基、消化酶（如(ru)、膠原酶等）、胎牛血清(qing)、雙抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在有效期內。

3. 實驗(yan)動物或組(zu)織(zhi)來源(yuan)準備(bei)：根據實驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇合(he)適(shi)的動(dong)物並進行相應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或處死(si)，獲(huo)取所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或從(cong)已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣本庫(ku)中獲取組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與處理(li)

1. 取材(cai)：在無菌(jun)條(tiao)件(jian)下，迅速(su)取出(chu)目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的損傷，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的(de)脂肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等非目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取出(chu)的組(zu)織(zhi)用預冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖洗數次(ci)，以去(qu)除血液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以便(bian)後(hou)續(xu)消化。

細胞分(fen)離

1. 消化：將剪碎的(de)組(zu)織(zhi)塊放入含(han)有適(shi)量(liang)消化酶的離心管(guan)中，在37℃恒溫搖(yao)床或培(pei)養箱中消化壹段(duan)時間。期間可(ke)輕輕搖晃離心管(guan)，使(shi)消化更(geng)均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消化：當組(zu)織(zhi)塊大(da)部分(fen)被消化成單細胞懸(xuan)液(ye)或小細(xi)胞團(tuan)時，加入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基終止(zhi)消化。

3. 過濾(lv)與離心：用(yong)細胞篩過濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未消化的組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以適(shi)當的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收集細(xi)胞沈澱(dian)。

細胞觀(guan)察(cha)與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞的(de)形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等，記(ji)錄(lu)細胞的(de)變(bian)化情(qing)況，如(ru)發現細胞汙(wu)染(ran)或異常，及時采(cai)取相應(ying)措施。
2. 細(xi)胞計(ji)數與活(huo)力(li)檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍染色等方法對(dui)細胞進(jin)行(xing)計(ji)數和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測，以(yi)了(le)解細(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取材(cai)與分(fen)離

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後(hou)需(xu)立即處理(li)，避(bi)免長(chang)時(shi)間暴(bao)露於室(shi)溫或非營(ying)養環境。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶選(xuan)擇

- 根據組(zu)織(zhi)類型選(xuan)擇消化酶，避(bi)免過度(du)消化導(dao)致細(xi)胞損傷。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞解離狀(zhuang)態。

二、培(pei)養條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養基選(xuan)擇

- 使(shi)用(yong)含血清(qing)或特定(ding)生(sheng)長(chang)因子(zi)的(de)培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細胞需(xu)添加胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換培(pei)養基品(pin)牌(pai)或批次(ci)，減少(shao)細胞適(shi)應壓力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳代(dai)

- 原代(dai)細胞貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養皿（如(ru)膠原蛋白、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建(jian)議(yi)控制在 70%-80%，過度(du)匯合(he)會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程在超凈臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性(xing)耗材(cai)，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基中可(ke)添加雙抗(kang)，但長期使(shi)用(yong)可(ke)能影響(xiang)細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體檢測

- 定期檢測支(zhi)原體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀(zhuang)態監控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞形(xing)態、密(mi)度及培(pei)養基顏色(se)，及時更(geng)換培(pei)養基（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次）。

- 異常形(xing)態（如(ru)細胞變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙(wu)染(ran)或營養不足。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數有限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍(dong)存(cun)早(zao)期代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存(cun)液建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養基），梯度(du)降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮保(bao)存(cun)。