【概(gai)要(yao)描(miao)述】人(ren)肝(gan)實質細(xi)胞公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品：TU-138人(ren)喉(hou)癌細(xi)胞大(da)鼠(shu)膠質肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞(bao)9L/lacZ（種屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人(ren)非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺癌(ai)細(xi)胞NCI-H1299(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)肝(gan)癌細(xi)胞(bao)SNU-398(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))小鼠(shu)單核(he)巨(ju)噬(shi)細(xi)胞白血(xue)病細胞(bao)帶紅(hong)色熒(ying)光RAW264.7+RFP（種屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人(ren)乳(ru)腺癌(ai)細(xi)胞MDA-MB-231(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)卵巢(chao)癌(ai)細(xi)胞(bao)HEY A8(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)結(jie)直腸癌(ai)細(xi)胞胞P53R(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)

本公司(si)所(suo)有產(chan)品僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他(ta)科學(xue)實驗(yan)外(wai)的使用！

人(ren)肝(gan)實質分(fen)離自(zi)肝(gan)臟組(zu)織；肝(gan)臟是(shi)身(shen)體內以(yi)代謝功能(neng)為主(zhu)的壹(yi)個器(qi)官(guan)，並在身體(ti)裏(li)面起著去氧化、儲存肝(gan)糖、分泌性(xing)蛋白質的合(he)成(cheng)等作(zuo)用；肝(gan)臟也制(zhi)造消(xiao)化(hua)系(xi)統中(zhong)之(zhi)膽(dan)汁(zhi)。肝(gan)臟是(shi)機(ji)體內臟裏(li)最大(da)的器(qi)官(guan)，位於機體中(zhong)的腹部位置，在右側(ce)橫(heng)隔(ge)膜(mo)之下(xia)，位於膽囊之前端(duan)且於右邊腎臟的前方，胃(wei)的上(shang)方。肝(gan)臟是(shi)機(ji)體消(xiao)化(hua)系(xi)統中(zhong)最大(da)的消(xiao)化(hua)腺(xian)，為壹紅(hong)棕(zong)色(se)的V字(zi)形(xing)器(qi)官(guan)。肝(gan)臟是(shi)尿(niao)素(su)合(he)成(cheng)的主(zhu)要(yao)器(qi)官(guan)，又(you)是(shi)新(xin)陳代謝的重(zhong)要器(qi)官(guan)。肝(gan)臟在機體(ti)位置和形態(tai)結(jie)構(gou)：肝(gan)臟位於右上腹，隱(yin)藏在右側(ce)膈(ge)下和(he)肋骨(gu)深(shen)面，大(da)部分肝(gan)為肋弓所(suo)復蓋，僅(jin)在腹上(shang)區(qu)、右肋弓間露(lu)出(chu)並直接接觸腹前壁(bi)，肝(gan)上面則與(yu)膈(ge)及腹前壁(bi)相接。肝(gan)實質細(xi)胞是(shi)指(zhi)具有肝(gan)功能(neng)的單(dan)位，是(shi)肝(gan)臟的基(ji)本組(zu)成單(dan)位之(zhi)壹。肝(gan)實質細(xi)胞與(yu)主(zhu)要(yao)病生理變化(hua)：急(ji)性肝(gan)炎(yan)、肝(gan)硬化、肝(gan)膿腫。肝(gan)實質細(xi)胞屬(shu)於中(zhong)高(gao)度(du)分(fen)化(hua)細胞，生長(chang)營養(yang)需(xu)求高，在體外(wai)存(cun)活時(shi)間(jian)短(duan)；細(xi)胞呈圓(yuan)形(xing)或多角形，核大(da)而(er)圓(yuan)，居中(zhong)，常(chang)染(ran)色(se)質豐(feng)富，部分有雙(shuang)核或(huo)多倍體核。肝(gan)臟作(zuo)為體(ti)內重(zhong)要的器(qi)官(guan)，在整個物(wu)質代(dai)謝過(guo)程中(zhong)具有廣(guang)泛(fan)而(er)多樣的作(zuo)用。
方法簡介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分離的人(ren)肝(gan)實質采(cai)用混合(he)酶(mei)灌(guan)流消(xiao)化(hua)、反復低速離(li)心制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分離的人(ren)肝(gan)實質經(jing)Cytokeratin-18免疫(yi)熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌(jun)、酵母(mu)和真(zhen)菌等。

包(bao)被條(tiao)件 鼠(shu)尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻率 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特性 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態(tai) 上(shang)皮(pi)細胞樣

傳(chuan)代(dai)特性 可(ke)傳(chuan)1-2代(dai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液管、離心管、手術(shu)器(qi)械等，並進行高壓滅菌(jun)或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的消(xiao)毒(du)處理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或購(gou)買合(he)適(shi)的培養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如、膠原酶等）、胎牛(niu)血(xue)清、雙抗等試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在有效(xiao)期內。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或組(zu)織來(lai)源準(zhun)備：根據(ju)實驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動(dong)物(wu)並進行相應(ying)的麻(ma)醉或(huo)處死，獲取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或從(cong)已(yi)有的組(zu)織樣本庫中(zhong)獲取(qu)組(zu)織。

取(qu)材與(yu)處理

1. 取(qu)材：在無菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標(biao)組(zu)織，盡(jin)量減(jian)少對(dui)組(zu)織的損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締組(zu)織等非目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取出(chu)的組(zu)織用預冷的無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎的組(zu)織塊(kuai)放入(ru)含有適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的離(li)心管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床或培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時(shi)間(jian)。期間(jian)可(ke)輕輕搖晃離(li)心管，使消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大(da)部分被消(xiao)化(hua)成(cheng)單細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入(ru)含血(xue)清的培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與(yu)離心：用細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未消(xiao)化(hua)的組(zu)織碎片(pian)，然後(hou)將濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離心，收集細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察與(yu)檢測

1. 日(ri)常(chang)觀察：每(mei)天用倒(dao)置顯微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的形(xing)態(tai)、生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等，記錄(lu)細胞的變(bian)化(hua)情況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細(xi)胞汙染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數與(yu)活力檢測：在需要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用臺盼藍染色(se)等方法對細胞(bao)進(jin)行計數和活力檢測，以(yi)了(le)解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情況(kuang)和(he)健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快速操作(zuo)

- 組(zu)織取材後(hou)需立(li)即處理，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴露(lu)於室溫或非營養(yang)環境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或生理鹽水(shui)沖(chong)洗組(zu)織，去除血(xue)液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根據(ju)組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致細(xi)胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件優(you)化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用含血(xue)清或特(te)定生(sheng)長因子的培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需(xu)添加胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更(geng)換培養(yang)基(ji)品牌(pai)或批次(ci)，減(jian)少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需要(yao)包(bao)被培養(yang)皿(min)（如膠原蛋白、多(duo)聚賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度(du)建議控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會(hui)導致接觸抑制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全(quan)程在超(chao)凈臺操作(zuo)，使用壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免交叉汙染。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加雙(shuang)抗，但(dan)長期使用可(ke)能(neng)影響(xiang)細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體檢測

- 定(ding)期檢測支原體汙染（如(ru) PCR 法），汙染後(hou)需及(ji)時(shi)丟棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每(mei)天檢查細(xi)胞(bao)形態(tai)、密度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏色，及(ji)時(shi)更(geng)換培養(yang)基(ji)（通常每(mei) 2-3 天換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增多）可能(neng)提(ti)示汙染或(huo)營養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分裂(lie)次(ci)數有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議使用 DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍(dong)存(cun)培養(yang)基(ji)），梯度降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮保(bao)存(cun)。