【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】人肝(gan)動(dong)脈內皮(pi)細胞公(gong)司(si)正(zheng)在出售的(de)產品(pin)：U118MG（U-118MG）人腦星形膠質母(mu)細胞瘤(liu)人膀(pang)胱(guang)移(yi)行(xing)細胞癌SW-780(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))小鼠腦神經(jing)膠(jiao)質母(mu)細胞瘤(liu)株(zhu)帶(dai)熒光(guang)酶G422+LUC（種(zhong)屬鑒定(ding)）小細胞肺(fei)癌NCI-H889(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人膀(pang)胱(guang)移(yi)行(xing)細胞癌J82(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人結(jie)直(zhi)腸(chang)癌細胞氟(fu)耐藥株(zhu)LOVO+5FU(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人骨(gu)髓(sui)增(zeng)生(sheng)異(yi)常(chang)綜合征(zheng)細胞株(zhu) MUTZ-1(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))雞(ji)淋巴瘤(liu)細

人肝(gan)動(dong)脈內皮(pi)分離(li)自肝(gan)動(dong)脈組(zu)織；在胚胎期(qi)，肝臟(zang)有3條(tiao)動(dong)脈供血，分別來(lai)源於(yu)胃左動(dong)脈、腹腔動(dong)脈和(he)腸(chang)系(xi)膜(mo)上(shang)動(dong)脈，這3條動(dong)脈分別肝(gan)臟(zang)的不(bu)同(tong)部位(wei)。出生(sheng)後(hou)，壹般保(bao)留(liu)壹(yi)條(tiao)動(dong)脈，大部分為起源於(yu)腹腔(qiang)動(dong)脈的動(dong)脈，由(you)其(qi)分出左、右肝動(dong)脈供應(ying)左、右半肝(gan)。偶爾也可見起(qi)源於(yu)胃左動(dong)脈的動(dong)脈或起源於(yu)腸(chang)系(xi)膜(mo)上(shang)動(dong)脈的動(dong)脈。但也有2條(tiao)動(dong)脈並存的(de)情況(kuang)，如(ru)起(qi)源於(yu)腹腔(qiang)動(dong)脈和(he)起源於(yu)胃左動(dong)脈（25%），起源於(yu)腹腔(qiang)動(dong)脈和(he)起源於(yu)腸(chang)系(xi)臘(la)上(shang)動(dong)脈（10%），而起源於(yu)胃左動(dong)脈和(he)起源於(yu)腸(chang)系(xi)膜(mo)上(shang)動(dong)脈的2條動(dong)脈同(tong)時存在的情況(kuang)比(bi)較少(shao)見。此(ci)外，還有5%像胚(pei)胎期(qi)壹樣(yang)，3條動(dong)脈同(tong)時存在。這種起源於(yu)腹腔(qiang)動(dong)脈以(yi)外(wai)的肝(gan)動(dong)脈稱為迷(mi)走肝動(dong)脈，如(ru)果(guo)肝(gan)臟沒有起源於(yu)腹腔(qiang)動(dong)脈的動(dong)脈供血時，此(ci)種異位(wei)起源的肝動(dong)脈稱替代動(dong)脈，如(ru)果(guo)在常(chang)見肝(gan)動(dong)脈類型外(wai)，還有(you)壹支(zhi)這種異位(wei)起始(shi)的動(dong)脈肝臟的(de)壹部(bu)分血流(liu)，這種肝動(dong)脈稱副肝動(dong)脈。肝動(dong)脈內皮(pi)細胞是(shi)襯(chen)於(yu)肝動(dong)脈內表面(mian)的單層扁平(ping)上(shang)皮，在炎癥(zheng)時高表達黏(nian)附(fu)分子，與(yu)血(xue)流中白細胞表面(mian)黏附(fu)分子相(xiang)互(hu)作用(yong)，從而介導白細胞穿(chuan)越(yue)血管壁(bi)，亦(yi)屬壹類(lei)非專職(zhi)抗原(yuan)提呈(cheng)細胞。它們吞噬異物、細菌(jun)、壞(huai)死(si)和(he)衰(shuai)老的(de)組(zu)織，還參(can)與(yu)集(ji)體免(mian)疫活動(dong)，包(bao)括(kuo)：①血(xue)管收縮(suo)及血管舒張(zhang)，從而控制血壓(ya)；②凝血（血(xue)栓(shuan)形成及纖維蛋白溶(rong)解(jie)）；③動(dong)脈硬化(hua)；④血(xue)管生(sheng)成；⑤炎癥(zheng)及腫脹(zhang)（浮腫(zhong)）；⑥內皮(pi)細胞亦(yi)控制壹些物質，如(ru)白血(xue)球進(jin)出(chu)血(xue)管。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的人肝(gan)動(dong)脈內皮(pi)采用(yong)混合酶消(xiao)化(hua)法(fa)結(jie)合差(cha)速貼壁(bi)法(fa)，並(bing)通過(guo)內皮(pi)細胞專用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)篩(shai)選(xuan)制備(bei)而來(lai)，細胞總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的人肝(gan)動(dong)脈內皮(pi)經(jing)CD31免(mian)疫熒光(guang)鑒定(ding)，純度(du)可達90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵母(mu)和(he)真(zhen)菌(jun)等。

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產品(pin)僅供科學(xue)實驗(yan)，不(bu)做其他(ta)科學(xue)實驗(yan)外的使(shi)用(yong)！

包(bao)被條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml），明(ming)膠（0.1%）

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞形態(tai) 內皮(pi)細胞樣(yang)

傳代特性(xing) 可傳2-3代

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣(qi)相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌(jun)的培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離(li)心管、手(shou)術(shu)器械(xie)等，並進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或其(qi)他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配(pei)制或(huo)購(gou)買合(he)適(shi)的培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗等試劑，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且在有效期(qi)內。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組(zu)織來源準備(bei)：根據(ju)實驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合適的(de)動(dong)物並進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或處(chu)死，獲(huo)取所(suo)需(xu)組(zu)織；或從已有的組(zu)織樣(yang)本庫(ku)中獲(huo)取組(zu)織。

取(qu)材與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在無(wu)菌(jun)條件(jian)下，迅(xun)速取出(chu)目標組(zu)織，盡(jin)量(liang)減(jian)少對(dui)組(zu)織的損傷，並去除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪、結締組(zu)織等非目的(de)組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的(de)組(zu)織用(yong)預冷的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數(shu)次，以(yi)去除(chu)血(xue)液和(he)雜質。

3. 剪(jian)切(qie)：將組(zu)織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便(bian)後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將剪(jian)碎的(de)組(zu)織塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶的(de)離(li)心管中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化(hua)壹(yi)段時間。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管，使(shi)消化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大(da)部(bu)分被消(xiao)化(hua)成單(dan)細胞懸液或(huo)小細胞團(tuan)時，加入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心：用(yong)細胞篩(shai)過濾細胞懸液，去除(chu)未(wei)消化(hua)的(de)組(zu)織碎片，然(ran)後將濾(lv)液以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速離(li)心，收集(ji)細胞沈(chen)澱(dian)。

細胞觀察與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀察：每天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微鏡觀察細胞的(de)形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態(tai)、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄細胞的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細胞汙染(ran)或(huo)異常(chang)，及時采取(qu)相(xiang)應(ying)措施。
2. 細胞計(ji)數(shu)與(yu)活力檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時，可采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色等方(fang)法(fa)對(dui)細胞進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力檢(jian)測，以(yi)了(le)解(jie)細胞的(de)生(sheng)長(chang)情況和(he)健康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取材與分離(li)

1. 快速操作

- 組(zu)織取材後需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避(bi)免長(chang)時間暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或(huo)非營養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗組(zu)織，去除(chu)血(xue)液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織類型選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶，避(bi)免過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導致細胞損傷。

- 消(xiao)化(hua)時間需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通常(chang) 10-30 分鐘），可通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞解(jie)離(li)狀態(tai)。

二(er)、培(pei)養(yang)條件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因子的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞需(xu)添加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少細胞適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼壁(bi)與傳代

- 原(yuan)代細胞貼壁(bi)能力較弱(ruo)，可能需(xu)要(yao)包(bao)被培(pei)養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白、多(duo)聚賴氨酸(suan)）。

- 傳代時密(mi)度(du)建(jian)議控制在 70%-80%，過度(du)匯合會導致接觸抑(yi)制(zhi)和(he)分化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控制

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全程在超(chao)凈(jing)臺操作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗材，避(bi)免交叉汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可添加(jia)雙(shuang)抗，但長期使(shi)用(yong)可能影響細胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及時丟棄細胞。

四(si)、狀態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞形態(tai)、密(mi)度(du)及培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色，及時更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如(ru)細胞變(bian)圓(yuan)、碎片增(zeng)多(duo)）可能提示汙染(ran)或(huo)營養(yang)不(bu)足。

2. 傳代與凍存(cun)

- 原(yuan)代細胞分裂次數(shu)有(you)限（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍存(cun)早(zao)期代次細胞。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用(yong)凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫後液氮保存。