【概要(yao)描述(shu)】大鼠神(shen)經(jing)星形膠(jiao)質細胞公司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的產品：VMRC-LCD非(fei)小細胞肺癌(ai)大鼠NK細胞小鼠B淋巴(ba)細胞小鼠T淋巴(ba)細胞小鼠單核(he)細胞小鼠DC細胞小鼠NK細胞兔B淋巴(ba)細胞兔T淋巴(ba)細胞兔單核(he)細胞

大鼠神(shen)經(jing)星形膠(jiao)質分離(li)自(zi)腦組織；大腦分左右(you)兩(liang)個半球(qiu)，大腦皮(pi)質（灰(hui)質(zhi)）覆(fu)蓋(gai)著(zhe)每(mei)個(ge)大腦半(ban)球(qiu)的(de)大部分，它是(shi)神(shen)經(jing)元胞體(ti)集中(zhong)的(de)地(di)方。內(nei)部則(ze)是(shi)由(you)神(shen)經(jing)纖維或髓鞘(qiao)構(gou)成(cheng)的白(bai)質(zhi)。每(mei)壹(yi)個半球(qiu)都有(you)三(san)個(ge)面(mian)，即外(wai)側(ce)面（約占整個(ge)皮(pi)質面(mian)積(ji)的(de)1/3）、內(nei)側(ce)面和底面(mian)（占2/3的(de)面(mian)積）；半(ban)球(qiu)表(biao)面(mian)有(you)很(hen)多深淺不等的溝或裂(lie)，溝或裂(lie)之(zhi)間(jian)的隆起(qi)叫(jiao)回，它(ta)們大大增加(jia)了大腦的(de)表面(mian)積(ji)；大腦外(wai)側(ce)面重要(yao)的(de)溝、裂(lie)有(you)大腦外(wai)側(ce)裂(lie)、頂(ding)枕(zhen)裂(lie)和中央(yang)溝。由(you)於三(san)溝裂(lie)之(zhi)界隔，使大腦皮(pi)質組(zu)分為(wei)額(e)葉(ye)、頂(ding)葉(ye)、顳葉(ye)、枕(zhen)葉(ye)四(si)大部分。神(shen)經(jing)星形膠(jiao)質細胞，是(shi)哺(bu)乳動(dong)物腦(nao)內(nei)分布廣泛(fan)的壹(yi)類細胞，也是(shi)膠質(zhi)細胞中體(ti)積(ji)最(zui)大的壹(yi)種。用經(jing)典的金(jin)屬浸鍍技術（銀(yin)染(ran)色）顯示(shi)此類膠(jiao)質細胞呈星(xing)形(xing)，從胞(bao)體發(fa)出(chu)許(xu)多長(chang)而分支的(de)突起(qi)，伸(shen)展充(chong)填在神(shen)經(jing)細胞的胞(bao)體(ti)及其突起(qi)之(zhi)間(jian)，起(qi)支持(chi)和分隔神(shen)經(jing)細胞的作(zuo)用(yong)。細胞突起(qi)的(de)末(mo)端(duan)常(chang)膨(peng)大形成(cheng)腳(jiao)板(ban)或稱終(zhong)足(zu)，有些(xie)腳(jiao)板(ban)貼附(fu)在(zai)鄰(lin)近(jin)的毛細血管壁(bi)上(shang)，因(yin)此這(zhe)些(xie)腳(jiao)板(ban)又被稱為(wei)血管足或血管周足，靠(kao)近(jin)腦脊(ji)髓表(biao)面(mian)的腳(jiao)板(ban)則(ze)附著(zhe)在(zai)軟膜內(nei)表面，彼此連(lian)接構(gou)成(cheng)膠質(zhi)界膜。細胞剛分離(li)時(shi)呈圓形，24h後(hou)大部分細胞貼壁(bi)，均(jun)勻分布於瓶(ping)底，部(bu)分細胞伸出(chu)細小突起(qi)，培(pei)養(yang)4-5d後細胞數量(liang)明(ming)顯增(zeng)多(duo)，呈扁平、多角形，胞(bao)質豐(feng)富(fu)且(qie)核(he)漿(jiang)較(jiao)少，細胞核(he)呈橢圓(yuan)形(xing)，偏於胞(bao)體(ti)壹(yi)側(ce)。神(shen)經(jing)星形膠(jiao)質細胞是(shi)中樞神(shen)經(jing)系(xi)統(tong)的(de)重要(yao)細胞組成(cheng)，不僅具有(you)支持(chi)功能(neng)，還能(neng)夠(gou)合(he)成(cheng)及分泌多種神(shen)經(jing)活性物(wu)質，在(zai)維持神(shen)經(jing)元內(nei)外(wai)環(huan)境、生(sheng)存(cun)、遷移、免疫(yi)調節(jie)、信(xin)號轉(zhuan)導(dao)、軸突生(sheng)長(chang)及功(gong)能(neng)整合(he)等方面(mian)具有(you)重要(yao)作(zuo)用。
方法(fa)簡介：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)大鼠神(shen)經(jing)星形膠(jiao)質采用(yong)酶消化法(fa)結(jie)合(he)差速(su)貼壁(bi)法(fa)制(zhi)備(bei)而來，細胞總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)大鼠神(shen)經(jing)星形膠(jiao)質經(jing)GFAP免(mian)疫熒(ying)光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達90%以(yi)上，且(qie)不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等(deng)。

本(ben)公司(si)所(suo)有產(chan)品僅供(gong)科(ke)學實驗，不做其他(ta)科(ke)學實驗外(wai)的使(shi)用！

培(pei)養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻率 每(mei)2-3天換(huan)液壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性 貼(tie)壁(bi)

細胞形態(tai) 梭(suo)形、多(duo)角形

傳(chuan)代特性 可傳5代左右(you)；3代以內(nei)狀(zhuang)態(tai)

消化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養(yang)條件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實(shi)驗器材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液管、離(li)心(xin)管、手(shou)術器械等(deng)，並(bing)進行高壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其他(ta)合(he)適(shi)的消毒(du)處理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或(huo)購買合(he)適(shi)的培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確保(bao)其無菌(jun)且(qie)在有(you)效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動物(wu)或組織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備(bei)：根據實驗需求(qiu)，選擇合(he)適(shi)的動物(wu)並(bing)進行相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉或處死，獲(huo)取(qu)所(suo)需組(zu)織；或從(cong)已有的(de)組(zu)織樣本(ben)庫中獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處理

1. 取(qu)材：在無菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅(xun)速取(qu)出(chu)目(mu)標組織，盡(jin)量(liang)減(jian)少對組織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去除(chu)多余(yu)的(de)脂(zhi)肪、結(jie)締組織等非(fei)目的組織。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出(chu)的(de)組織用預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以去除(chu)血液和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小塊，以(yi)便後續消化。

細胞分離(li)

1. 消化：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊放入(ru)含有(you)適(shi)量(liang)消化酶的(de)離(li)心(xin)管中，在37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化壹(yi)段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可輕輕搖晃(huang)離(li)心(xin)管，使消化更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組(zu)織塊大部分被消化成(cheng)單細胞懸(xuan)液或小細胞團(tuan)時，加(jia)入(ru)含血清(qing)的培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心(xin)：用細胞篩過(guo)濾細胞懸(xuan)液，去除(chu)未消化的(de)組(zu)織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將濾液以適(shi)當的轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收集細胞沈澱(dian)。

細胞觀(guan)察與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每(mei)天用(yong)倒置顯微鏡(jing)觀(guan)察細胞的形(xing)態(tai)、生長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度等，記(ji)錄(lu)細胞的變化情況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細胞汙染(ran)或(huo)異常(chang)，及時(shi)采取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細胞計數(shu)與(yu)活力(li)檢測(ce)：在(zai)需(xu)要時，可采用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色等方法(fa)對細胞進行計數(shu)和活力(li)檢測(ce)，以(yi)了(le)解細胞的生(sheng)長(chang)情況(kuang)和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速操作

- 組(zu)織取(qu)材後需立即(ji)處理，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)暴(bao)露於室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營養環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水沖洗組(zu)織(zhi)，去除(chu)血液、雜質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇

- 根據組織類(lei)型選(xuan)擇消化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度(du)消化導(dao)致(zhi)細胞損傷(shang)。

- 消化時(shi)間(jian)需嚴格控(kong)制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可通過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察細胞解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培(pei)養(yang)條件優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用含血清(qing)或特定(ding)生長(chang)因(yin)子(zi)的培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞需添(tian)加胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次，減少(shao)細胞適(shi)應壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代

- 原(yuan)代細胞貼壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要包(bao)被培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度建議(yi)控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺(tai)操作，使(shi)用壹(yi)次性耗(hao)材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可添(tian)加雙抗，但長(chang)期(qi)使用可能(neng)影響(xiang)細胞活性。

2. 支原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測支原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後需及時丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞形態(tai)、密(mi)度及培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色，及時更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如細胞變圓、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可能(neng)提(ti)示(shi)汙染或(huo)營養不足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代細胞分裂(lie)次數有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早期(qi)代次細胞。

- 凍(dong)存(cun)液建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專(zhuan)用凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降溫後(hou)液氮保(bao)存(cun)。