【概(gai)要(yao)描述(shu)】大鼠(shu)神經幹細胞公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的產(chan)品：VEROC1008(E6)非洲綠猴腎細胞人(ren)胰(yi)腺癌細胞永(yong)生(sheng)化GFP人(ren)膽囊(nang)上(shang)皮細胞永(yong)生(sheng)化+GFP豬(zhu)扁桃(tao)體上(shang)皮細胞永(yong)生(sheng)化人(ren)風濕性(xing)關節滑膜成(cheng)纖維(wei)細胞永(yong)生(sheng)化豬(zhu)脂肪(fang)幹細胞永(yong)生(sheng)化鴨(ya)胚(pei)肝間(jian)質(zhi)細胞永(yong)生(sheng)化羊(yang)睪(gao)丸間(jian)質(zhi)細胞永(yong)生(sheng)化兔(tu)肝間(jian)質(zhi)細胞永(yong)生(sheng)化人(ren)頸靜(jing)脈(mai)球瘤細胞永(yong)生(sheng)化

大鼠(shu)神經幹分(fen)離(li)自(zi)腦(nao)皮層(ceng)組織(zhi)；大腦(nao)分左(zuo)右(you)兩個(ge)半球，大腦(nao)皮質(zhi)（灰(hui)質）覆蓋著每(mei)個(ge)大腦(nao)半球的大部分，它是神經元(yuan)胞體(ti)集中的地(di)方。內(nei)部則是由(you)神(shen)經纖維(wei)或(huo)髓鞘(qiao)構(gou)成(cheng)的白(bai)質。每(mei)壹(yi)個(ge)半球都(dou)有三(san)個(ge)面(mian)，即(ji)外(wai)側(ce)面(mian)（約(yue)占整(zheng)個皮質(zhi)面(mian)積的1/3）、內(nei)側(ce)面(mian)和底(di)面(mian)（占2/3的面(mian)積）；半球表(biao)面(mian)有很(hen)多(duo)深淺(qian)不等的溝(gou)或(huo)裂，溝(gou)或(huo)裂之間(jian)的隆(long)起叫回，它們(men)大大增(zeng)加了(le)大腦(nao)的表(biao)面(mian)積；大腦(nao)外(wai)側(ce)面(mian)重(zhong)要的溝(gou)、裂有大腦(nao)外(wai)側(ce)裂、頂枕裂(lie)和中央溝(gou)。由(you)於三(san)溝(gou)裂(lie)之界隔(ge)，使大腦(nao)皮質(zhi)組(zu)分為(wei)額(e)葉(ye)、頂葉、顳(nie)葉、枕(zhen)葉(ye)四(si)大部分。神經幹細胞具(ju)有(you)分化(hua)為(wei)神經神經元(yuan)、星形膠(jiao)質(zhi)細胞和少突(tu)膠(jiao)質(zhi)細胞的能(neng)力(li)，能自我更新，並(bing)足以(yi)提(ti)供(gong)大量(liang)腦組(zu)織(zhi)細胞的細胞群(qun)。神經幹細胞是壹(yi)類具(ju)有(you)分裂潛(qian)能和自更新能(neng)力(li)的母細胞，它(ta)可(ke)以通(tong)過(guo)不(bu)對等的分(fen)裂方式(shi)產生(sheng)神(shen)經組織(zhi)的各類細胞。需要(yao)強(qiang)調(tiao)的是，在腦脊(ji)髓等(deng)所(suo)有(you)神經組織(zhi)中(zhong)，不(bu)同(tong)的神(shen)經幹細胞類型產(chan)生的子(zi)代(dai)細胞種(zhong)類不(bu)同(tong)，分布也(ye)不同(tong)。神(shen)經幹細胞作(zuo)為(wei)幹細胞的壹(yi)種(zhong)，它具(ju)有其(qi)它所(suo)有(you)幹細胞的基(ji)本(ben)特(te)征(zheng)：具(ju)有(you)自我維(wei)持和自我(wo)更新能(neng)力(li)，具有多(duo)種(zhong)分化(hua)潛(qian)能，具有(you)分化為(wei)本(ben)系統(tong)大部分類型細胞的能(neng)力(li)，這(zhe)種(zhong)自我(wo)更新和分化(hua)潛(qian)能可以(yi)維(wei)持相(xiang)當(dang)長的時(shi)間(jian)甚至(zhi)終(zhong)生(sheng)，對損(sun)傷(shang)和疾病(bing)具(ju)有(you)反(fan)應(ying)能力(li)。神經幹細胞在(zai)疾(ji)病、損(sun)傷(shang)狀(zhuang)態(tai)下具(ju)有增(zeng)殖、遷移(yi)，並(bing)向(xiang)神經細胞、星形膠(jiao)質(zhi)細胞和少突(tu)膠(jiao)質(zhi)細胞分(fen)化(hua)的能(neng)力(li)，已成(cheng)為(wei)神經系統(tong)損(sun)傷(shang)修復(fu)和再生(sheng)研究的熱(re)點，體外(wai)建(jian)立穩定的神(shen)經幹細胞培(pei)養(yang)模型是其基礎和臨(lin)床(chuang)應(ying)用(yong)的前提(ti)。神經幹細胞在(zai)培(pei)養(yang)3-4d後，可形成(cheng)神經球，神(shen)經球在(zai)培(pei)養(yang)基中呈懸(xuan)浮生長，予(yu)以(yi)更換(huan)半量培(pei)基(ji)，1周(zhou)後(hou)用(yong)吸(xi)管(guan)輕柔(rou)吹打(da)球形克(ke)隆(long)成(cheng)為(wei)小的神(shen)經球和單細胞懸(xuan)液，將部分細胞接(jie)種(zhong)到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，2×105個(ge)細胞/瓶(ping)，每(mei)7-10d傳(chuan)代(dai)1次(ci)，每(mei)隔(ge)3d離心更換(huan)半量培(pei)養(yang)基1次(ci)，培(pei)養(yang)條件(jian)不變。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實驗室分(fen)離(li)的大鼠(shu)神經幹采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶消化後(hou)差速(su)貼壁(bi)，結(jie)合(he)神經幹細胞專(zhuan)用(yong)培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)篩選(xuan)制備(bei)而(er)來，總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測：

公(gong)司(si)實驗室分(fen)離(li)的大鼠(shu)神經幹經Nestin免疫(yi)熒光(guang)鑒(jian)定，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌、酵(jiao)母和真菌等(deng)。

本(ben)公司(si)所(suo)有(you)產品僅供(gong)科(ke)學實(shi)驗，不做其他科(ke)學實(shi)驗外(wai)的使用(yong)！

培(pei)養(yang)基 含(han)B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特(te)性(xing) 懸(xuan)浮

細胞形態(tai) 球形

傳(chuan)代特(te)性(xing) 可(ke)傳2-3代(dai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶，Accutase

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心(xin)管、手術器械等(deng)，並(bing)進(jin)行高壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其他合適(shi)的消(xiao)毒處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準備(bei)：配制或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適的培(pei)養(yang)基、消化酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑(ji)，確保其(qi)無菌(jun)且在(zai)有效(xiao)期內(nei)。

3. 實(shi)驗動物或(huo)組織(zhi)來源準備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗需求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的動(dong)物並(bing)進(jin)行相(xiang)應(ying)的麻醉(zui)或(huo)處(chu)死，獲取(qu)所(suo)需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有(you)的組(zu)織樣本(ben)庫中獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條件(jian)下，迅速(su)取(qu)出目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對組織的損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多(duo)余的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組織(zhi)等非目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出的組(zu)織用(yong)預(yu)冷的無菌(jun)PBS沖洗(xi)數次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液和雜質(zhi)。

3. 剪切：將組織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後續(xu)消化。

細胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將剪碎的組(zu)織塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化酶的離(li)心管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱中消化壹(yi)段(duan)時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管，使消化(hua)更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組織塊大部分被消(xiao)化成(cheng)單細胞懸(xuan)液或(huo)小細胞團時，加入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞懸(xuan)液，去(qu)除未(wei)消化的組(zu)織碎片(pian)，然後將濾(lv)液以適(shi)當(dang)的轉速(su)離心(xin)，收(shou)集細胞沈(chen)澱(dian)。

細胞觀察與(yu)檢測

1. 日常觀察：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞的形態(tai)、生長狀(zhuang)態(tai)、密度等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞的變(bian)化情況(kuang)，如(ru)發現細胞汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措施。
2. 細胞計(ji)數(shu)與(yu)活(huo)力(li)檢測：在(zai)需要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等方法對細胞進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活力(li)檢測，以(yi)了解細胞的生(sheng)長情(qing)況(kuang)和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離

1. 快速(su)操作

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後需立即(ji)處(chu)理(li)，避(bi)免長時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或(huo)非營養(yang)環境(jing)。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水(shui)沖洗組(zu)織，去(qu)除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織類型選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶，避(bi)免過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細胞損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需嚴(yan)格控制（通常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞解離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培(pei)養(yang)條件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定生長因子(zi)的培(pei)養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻繁更換(huan)培(pei)養(yang)基品牌或(huo)批次(ci)，減(jian)少(shao)細胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳(chuan)代

- 原(yuan)代細胞貼(tie)壁(bi)能力(li)較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需要(yao)包(bao)被培(pei)養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚(ju)賴氨酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度建(jian)議(yi)控制在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制和分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺(tai)操作，使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗材(cai)，避(bi)免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中可添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長期使用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響細胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體(ti)檢測

- 定期檢測支原體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後(hou)需及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日常觀察

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細胞形態(tai)、密度及(ji)培(pei)養(yang)基顏(yan)色，及(ji)時(shi)更換(huan)培(pei)養(yang)基（通常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常形態(tai)（如(ru)細胞變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示汙(wu)染(ran)或(huo)營養(yang)不(bu)足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存

- 原(yuan)代細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數(shu)有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早(zao)期代次(ci)細胞。

- 凍(dong)存液建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基），梯(ti)度(du)降溫(wen)後(hou)液氮保存(cun)。