【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】大鼠(shu)破骨細(xi)胞公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產品：NCI-H2087非小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌大鼠(shu)鼻腔(qiang)粘膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞大鼠(shu)眼外(wai)肌(ji)成(cheng)纖維細(xi)胞大鼠(shu)視網(wang)膜神經節(jie)細(xi)胞大鼠(shu)視網(wang)膜小(xiao)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞大鼠(shu)視網(wang)膜前體(ti)細(xi)胞大鼠(shu)胎盤(pan)間(jian)充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞大鼠(shu)胚胎(tai)成(cheng)纖維細(xi)胞大鼠(shu)臍帶(dai)間(jian)充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞大鼠(shu)臍靜(jing)脈(mai)內皮(pi)細(xi)胞

大鼠(shu)破骨分(fen)離(li)自骨組(zu)織和骨髓(sui)；破骨細(xi)胞是(shi)骨組(zu)織中的(de)多核巨(ju)細(xi)胞，位於(yu)骨組(zu)織表(biao)面的(de)淺(qian)凹處(chu)。目前壹般(ban)認(ren)為(wei)破(po)骨細(xi)胞是(shi)分(fen)離(li)自骨骼外的(de)造血(xue)系(xi)統(tong)，其前體(ti)可(ke)能(neng)屬於(yu)造血(xue)幹細(xi)胞的(de)前單(dan)核細(xi)胞。破骨細(xi)胞的(de)主(zhu)要功(gong)能(neng)是(shi)維持(chi)骨吸(xi)收和骨形(xing)成(cheng)的(de)相(xiang)對平衡，若失(shi)去(qu)這(zhe)種(zhong)平(ping)衡則(ze)發生(sheng)病理性(xing)變(bian)化。因(yin)此多數學(xue)者(zhe)從(cong)破(po)骨細(xi)胞著(zhe)手(shou)研究破(po)骨細(xi)胞的(de)結構、功(gong)能(neng)探(tan)討骨吸(xi)收，形(xing)成(cheng)相(xiang)互平(ping)衡的(de)機(ji)制。但破(po)骨細(xi)胞是(shi)壹種(zhong)終(zhong)末分(fen)化(hua)細(xi)胞，屬於(yu)不增殖(zhi)細(xi)胞群，不(bu)能(neng)增(zeng)殖(zhi)和傳代(dai)，只(zhi)能(neng)進(jin)行原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)且(qie)存(cun)活(huo)時(shi)間(jian)較(jiao)短。
方法簡介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)大鼠(shu)破骨采(cai)用機(ji)械(xie)分(fen)離(li)法/密度梯度離(li)心法和骨髓(sui)單核細(xi)胞誘(you)導(dao)法制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)大鼠(shu)破骨經TRAP染(ran)色檢(jian)測，純度可(ke)達30%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵母(mu)和真菌等(deng)。

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產品僅供(gong)科學(xue)實驗，不做(zuo)其他科(ke)學(xue)實驗(yan)外的(de)使用！

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率 每(mei)2-3天換液(ye)壹次

生(sheng)長(chang)特性 貼壁

細(xi)胞形態(tai) 多核、巨(ju)細(xi)胞

傳(chuan)代特性 屬於(yu)終末分(fen)化(hua)細(xi)胞；屬於(yu)不增殖(zhi)細(xi)胞群

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌的(de)培(pei)養(yang)皿、培養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓滅菌(jun)或其他合(he)適(shi)的(de)消毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配制或購買合適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑，確(que)保(bao)其無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗(yan)動物或組織來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根據實驗需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動物並(bing)進(jin)行相(xiang)應的(de)麻醉或處(chu)死，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組(zu)織樣本庫(ku)中獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件下，迅(xun)速取(qu)出目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少對組織的(de)損(sun)傷，並(bing)去(qu)除(chu)多余的(de)脂肪(fang)、結締組織等(deng)非目的(de)組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出的(de)組(zu)織用預冷的(de)無(wu)菌PBS沖洗數次，以(yi)去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織塊放入含(han)有(you)適(shi)量(liang)消化(hua)酶的(de)離(li)心管(guan)中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕搖(yao)晃離(li)心管(guan)，使消化(hua)更均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大部(bu)分(fen)被(bei)消化(hua)成(cheng)單細(xi)胞懸液(ye)或小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加入含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離(li)心：用細(xi)胞篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸液(ye)，去除(chu)未(wei)消化(hua)的(de)組(zu)織碎片，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速離(li)心，收集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的(de)變(bian)化情況，如發(fa)現細(xi)胞汙(wu)染(ran)或異常(chang)，及時采(cai)取(qu)相(xiang)應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計數與(yu)活(huo)力(li)檢(jian)測：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色等(deng)方法對細(xi)胞進(jin)行計(ji)數和活(huo)力(li)檢(jian)測，以(yi)了解細(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)情況和健康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需(xu)立即處(chu)理，避免長時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或非營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽水沖洗組織，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類型選擇(ze)消化(hua)酶，避免過度(du)消化(hua)導(dao)致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消化(hua)時間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條(tiao)件優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血(xue)清(qing)或特定生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞需(xu)添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避免頻繁(fan)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或批次，減少細(xi)胞適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養(yang)皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白、多聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度建(jian)議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度(du)匯合會(hui)導(dao)致接(jie)觸抑制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三、汙(wu)染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超凈臺操(cao)作(zuo)，使用壹次性耗材(cai)，避免交叉汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使用可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後需(xu)及(ji)時丟棄細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細(xi)胞形態(tai)、密度及培養(yang)基(ji)顏(yan)色，及時更換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹次）。

- 異常(chang)形態(tai)（如(ru)細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增多）可(ke)能(neng)提(ti)示汙(wu)染(ran)或營養(yang)不足(zu)。

2. 傳代與凍存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分(fen)裂次數有(you)限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍存早期(qi)代次細(xi)胞。

- 凍存液(ye)建(jian)議使用 DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用凍存培(pei)養(yang)基(ji)），梯(ti)度降溫後液(ye)氮保(bao)存(cun)。