【概(gai)要描述】大鼠(shu)軟骨(gu)細胞(bao)公司正在(zai)出售(shou)的產品：NCI-H2085非(fei)小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌(ai)大鼠(shu)視(shi)網膜(mo)微血(xue)管內皮細胞(bao)大鼠(shu)牙周(zhou)膜(mo)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)大鼠(shu)牙周(zhou)膜(mo)幹細胞(bao)大鼠(shu)牙髓(sui)幹細胞(bao)大鼠(shu)口腔(qiang)黏(nian)膜(mo)上(shang)皮細胞(bao)大鼠(shu)舌(she)表皮(pi)細胞(bao)大鼠(shu)鼓膜(mo)上(shang)皮幹細胞(bao)大鼠(shu)角膜(mo)內皮細胞(bao)大鼠(shu)鞏(gong)膜(mo)上(shang)皮細胞(bao)

本公司所(suo)有(you)產品僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他科學(xue)實驗外(wai)的使(shi)用(yong)！

大鼠(shu)軟骨(gu)分離自(zi)軟骨(gu)組織(zhi)；軟骨(gu)組織(zhi)由(you)軟骨(gu)細胞(bao)、基(ji)質及(ji)纖(xian)維(wei)構(gou)成(cheng)。軟骨(gu)組織(zhi)再生能(neng)力(li)強，這(zhe)些(xie)增(zeng)生的幼稚細胞(bao)形(xing)似纖(xian)維(wei)母(mu)細胞(bao)，以(yi)後(hou)逐(zhu)漸(jian)變(bian)為(wei)軟骨(gu)母(mu)細胞(bao)，並(bing)形成(cheng)軟骨(gu)基質，細胞(bao)被(bei)埋(mai)在(zai)軟(ruan)骨(gu)陷窩(wo)內而變(bian)為(wei)靜止(zhi)的軟(ruan)骨(gu)細胞(bao)。根(gen)據(ju)軟(ruan)骨(gu)組織(zhi)內所(suo)含(han)纖(xian)維(wei)成(cheng)分的不(bu)同(tong)，可將(jiang)軟骨(gu)分為(wei)透(tou)明(ming)軟(ruan)骨(gu)、彈性軟骨(gu)和纖(xian)維(wei)軟骨(gu)三(san)種，其(qi)中(zhong)以(yi)透(tou)明(ming)軟(ruan)骨(gu)的分(fen)布較廣，結構(gou)也(ye)較典(dian)型。軟(ruan)骨(gu)細胞(bao)（chondrocyte）位(wei)於(yu)軟(ruan)骨(gu)陷窩(wo)內。幼稚的軟(ruan)骨(gu)細胞(bao)位(wei)於(yu)軟(ruan)骨(gu)組織(zhi)的表(biao)層，單(dan)個(ge)分布，體(ti)積(ji)較小(xiao)，呈(cheng)橢圓(yuan)形，長(chang)軸(zhou)與軟(ruan)骨(gu)表面平(ping)行，越向深(shen)層的軟(ruan)骨(gu)細胞(bao)體(ti)積(ji)之(zhi)間(jian)增大呈(cheng)圓(yuan)形，細胞(bao)核(he)圓(yuan)形或卵圓(yuan)形，染(ran)色(se)淺，細胞(bao)質弱嗜(shi)堿(jian)性，常見數(shu)量(liang)不(bu)壹的脂滴。成(cheng)熟的軟(ruan)骨(gu)細胞(bao)多(duo)2-8個(ge)成(cheng)群(qun)分布於(yu)軟(ruan)骨(gu)陷窩(wo)內，這些(xie)軟(ruan)骨(gu)細胞(bao)由(you)同壹個(ge)母(mu)細胞(bao)分(fen)裂(lie)增殖而(er)成(cheng)，稱(cheng)為(wei)同源(yuan)細胞(bao)群(qun)。電鏡下，軟骨(gu)細胞(bao)有(you)突(tu)起(qi)和(he)皺褶，細胞(bao)質內有大量(liang)的粗(cu)面(mian)內質網和發達(da)的高(gao)爾(er)基復(fu)合體(ti)及(ji)少量(liang)的線粒(li)體(ti)。在(zai)組織(zhi)切片(pian)中(zhong)，軟骨(gu)細胞(bao)收縮為(wei)不(bu)規則形(xing)，在(zai)軟骨(gu)囊和細胞(bao)之(zhi)間(jian)出現較(jiao)大的腔(qiang)隙。體(ti)外(wai)培(pei)養的軟(ruan)骨(gu)細胞(bao)對於(yu)研究(jiu)其(qi)生(sheng)理功(gong)能(neng)、藥物(wu)作(zuo)用(yong)以(yi)及(ji)各(ge)種致病因素作(zuo)用(yong)下的病理(li)生(sheng)理(li)改變(bian)具重要(yao)意(yi)義。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公司實驗室(shi)分(fen)離(li)的大鼠(shu)軟骨(gu)采用(yong)膠原酶(mei)-中(zhong)性dan白(bai)酶(mei)聯(lian)合消(xiao)化(hua)制備而來，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公司實驗室(shi)分(fen)離(li)的大鼠(shu)軟骨(gu)經Ⅱ型(xing)膠原蛋(dan)白免疫(yi)熒(ying)光鑒定(ding)，純度(du)可達(da)90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細菌、酵母(mu)和(he)真(zhen)菌等。

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率(lv) 每(mei)3-4天換液壹次

生(sheng)長(chang)特性 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態(tai) 梭(suo)形(xing)、多(duo)角形

傳(chuan)代特性 可傳(chuan)5代左右(you)；3代以(yi)內狀態(tai)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養條件(jian) 氣(qi)相：空氣，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實驗器(qi)材準備：準備無菌的培(pei)養皿、培(pei)養瓶、移(yi)液管、離心(xin)管、手術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進行高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或其(qi)他合適的消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準備：配制或購(gou)買合適的培(pei)養基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無(wu)菌且在有效(xiao)期內。

3. 實驗動(dong)物(wu)或組織(zhi)來源準備：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適的動(dong)物(wu)並進(jin)行相應的麻(ma)醉(zui)或處死(si)，獲(huo)取所(suo)需(xu)組織(zhi)；或從已有的組織(zhi)樣本庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織(zhi)。

取材與(yu)處理

1. 取材：在(zai)無菌條件(jian)下，迅速(su)取出目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少對組織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並去除(chu)多(duo)余的脂肪(fang)、結締組織(zhi)等非(fei)目(mu)的組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取出的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷的無(wu)菌PBS沖洗數次，以(yi)去除(chu)血(xue)液和(he)雜(za)質。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消(xiao)化(hua)：將剪(jian)碎的組織(zhi)塊放入(ru)含(han)有適量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的離(li)心(xin)管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)壹段時間(jian)。期間(jian)可輕輕搖(yao)晃離心(xin)管，使消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當組織(zhi)塊大部(bu)分被消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時，加入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與離(li)心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過濾細胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後(hou)將濾液以(yi)適當的轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收集細胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)：每(mei)天用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細胞(bao)的形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等，記錄(lu)細胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發現細胞(bao)汙(wu)染(ran)或異常，及(ji)時采(cai)取相應措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與活(huo)力(li)檢(jian)測：在(zai)需要(yao)時，可采(cai)用(yong)臺盼藍(lan)染(ran)色(se)等方法(fa)對細胞(bao)進(jin)行計數(shu)和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測，以(yi)了解細胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹、取材與(yu)分離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取材後(hou)需立即(ji)處理，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露於(yu)室(shi)溫或非(fei)營(ying)養環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或生理鹽水(shui)沖(chong)洗組織(zhi)，去除(chu)血(xue)液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度(du)消(xiao)化(hua)導致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分鐘(zhong)），可通過(guo)顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細胞(bao)解(jie)離狀態(tai)。

二(er)、培(pei)養條件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養基選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或特定(ding)生長(chang)因子(zi)的培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細胞(bao)需(xu)添加胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻繁更(geng)換(huan)培(pei)養基品牌(pai)或批(pi)次，減(jian)少細胞(bao)適應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原代細胞(bao)貼(tie)壁能(neng)力(li)較弱(ruo)，可能(neng)需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養皿（如(ru)膠原蛋(dan)白、多(duo)聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度(du)建議控(kong)制在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會(hui)導致(zhi)接觸(chu)抑制和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無(wu)菌操作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹次性(xing)耗材，避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基中(zhong)可添(tian)加雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期使用(yong)可能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期檢(jian)測支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需及(ji)時丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細胞(bao)形(xing)態(tai)、密度(du)及(ji)培(pei)養基顏(yan)色(se)，及(ji)時更(geng)換(huan)培(pei)養基（通常每(mei) 2-3 天換液壹次）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可能(neng)提示(shi)汙(wu)染(ran)或營養不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存

- 原代細胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有限（壹般 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍存早(zao)期代次細胞(bao)。

- 凍存液建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專用(yong)凍存培(pei)養基），梯度(du)降溫後(hou)液氮保(bao)存。