【概要(yao)描(miao)述】大(da)鼠(shu)前脂(zhi)肪細胞公(gong)司(si)正(zheng)在出售的產(chan)品：NCI-H2106非小細胞(bao)肺(fei)癌小鼠(shu)肺動脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)小鼠(shu)氣管上皮(pi)細胞(bao)小鼠(shu)氣管平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)小鼠(shu)支氣管上皮(pi)細胞(bao)小鼠(shu)支氣管平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)小鼠(shu)肺成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)小鼠(shu)肺巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)小鼠(shu)肺微(wei)血(xue)管周(zhou)細(xi)胞(bao)小鼠(shu)心肌(ji)細胞(bao)

大(da)鼠(shu)前脂(zhi)肪分(fen)離自(zi)脂(zhi)肪組織；脂(zhi)肪組織主要(yao)由(you)大(da)量(liang)群(qun)集的脂(zhi)肪細胞構成，聚集成團(tuan)的脂(zhi)肪細胞由薄層(ceng)疏松結締(di)組(zu)織(zhi)分(fen)隔(ge)成小葉；貯(zhu)存(cun)的脂(zhi)肪，在需(xu)要(yao)時可(ke)迅速(su)分(fen)解(jie)成甘(gan)油(you)和脂(zhi)肪酸，經血(xue)液(ye)輸送到各(ge)組(zu)織(zhi)以(yi)供(gong)利用(yong)。它(ta)們影響(xiang)胰島(dao)素(su)敏感(gan)性、血(xue)壓水平(ping)、內皮(pi)功能、纖(xian)溶(rong)活(huo)動及炎癥反(fan)應，參(can)與多種(zhong)重(zhong)要(yao)病理生理過程(cheng)；脂(zhi)肪組織已由(you)過去單(dan)純作為能(neng)量(liang)儲存的器官(guan)而成為(wei)壹個(ge)極其(qi)重(zhong)要(yao)的內分(fen)泌系統(tong)。脂(zhi)肪組織在體內含(han)有(you)兩(liang)種(zhong)主要(yao)的細(xi)胞(bao)：壹種(zhong)是(shi)在胞漿(jiang)內積(ji)聚脂(zhi)滴的成熟脂(zhi)肪細胞；另壹種(zhong)是(shi)雖未在胞漿(jiang)內積(ji)聚脂(zhi)滴但(dan)有(you)這種(zhong)潛(qian)能的前脂(zhi)肪細胞。前脂(zhi)肪細胞呈梭(suo)形(xing)，有分(fen)裂(lie)和增殖的能(neng)力(li)；成熟的脂(zhi)肪細胞呈圓形，已經失去了(le)分(fen)裂(lie)及增殖的能(neng)力(li)。由(you)於前脂(zhi)肪細胞是(shi)壹類具(ju)有(you)增殖和(he)向(xiang)脂(zhi)肪細胞分(fen)化(hua)能力(li)的特(te)異化(hua)前體細胞，與(yu)肥(fei)胖(pang)有(you)著(zhe)非常密(mi)切的關(guan)系。前脂(zhi)肪細胞是(shi)壹種(zhong)類成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)，在演變(bian)的過程(cheng)中不斷吸收脂(zhi)質(zhi)，最終成為(wei)成熟的脂(zhi)肪細胞。前脂(zhi)肪細胞對外界(jie)機械(xie)損傷(shang)的抵抗(kang)力(li)較(jiao)強，可(ke)望成為(wei)軟組織缺(que)損的有(you)益填(tian)充(chong)物(wu)。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的大(da)鼠(shu)前脂(zhi)肪采用膠原酶消化(hua)法(fa)制備而(er)來，細胞(bao)總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的大(da)鼠(shu)前脂(zhi)肪經油(you)紅(hong)O染色檢測(ce)，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)、酵(jiao)母和真菌(jun)等(deng)。

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有(you)產(chan)品僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做其他科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的使(shi)用(yong)！

培養基(ji) 含(han)FBS、生長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率 每2-3天換液(ye)壹次

生長特(te)性 貼(tie)壁(bi)

細胞形(xing)態(tai) 成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳代特(te)性 可(ke)傳(chuan)5代左(zuo)右(you)；3代以(yi)內狀(zhuang)態(tai)

消化(hua)液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養條(tiao)件 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實(shi)驗(yan)器材準備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶(ping)、移液(ye)管、離心(xin)管、手術(shu)器械等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓滅菌(jun)或其他合(he)適(shi)的消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備：配(pei)制或購買(mai)合(he)適(shi)的培養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確保其無菌(jun)且(qie)在有效期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動物或組織(zhi)來源準(zhun)備：根據實(shi)驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動物並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應的麻(ma)醉或處死，獲取(qu)所(suo)需(xu)組織(zhi)；或從已有(you)的組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫中獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅速(su)取(qu)出目標組織(zhi)，盡量(liang)減少對組織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並去除(chu)多余的脂(zhi)肪、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非目的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出的組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數次，以去除(chu)血(xue)液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞分(fen)離

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊放入含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶的離(li)心(xin)管中，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培養箱(xiang)中消化(hua)壹段時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心(xin)管，使消(xiao)化(hua)更均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被消化(hua)成單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或小細胞(bao)團(tuan)時，加入含(han)血(xue)清(qing)的培養基(ji)終止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與離心：用細胞(bao)篩(shai)過濾(lv)細胞懸液，去除(chu)未消(xiao)化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收集細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞觀察與(yu)檢測(ce)

1. 日常觀察：每天用倒(dao)置顯(xian)微鏡觀察細(xi)胞(bao)的形(xing)態(tai)、生長狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙染或異常，及(ji)時采取(qu)相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計數與活(huo)力(li)檢測(ce)：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼藍染色等(deng)方法(fa)對細胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活(huo)力(li)檢測(ce)，以了(le)解(jie)細胞(bao)的生長情(qing)況(kuang)和健康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組織取(qu)材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理(li)，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴(bao)露於室(shi)溫(wen)或非營(ying)養環(huan)境。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或生理鹽水沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根據組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶，避(bi)免(mian)過度(du)消化(hua)導致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格控(kong)制（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過顯(xian)微鏡觀察細(xi)胞(bao)解(jie)離狀(zhuang)態(tai)。

二、培養條(tiao)件優化(hua)

1. 培養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血(xue)清(qing)或特(te)定(ding)生長因(yin)子的培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細胞需(xu)添加(jia)胰島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁更(geng)換培養基(ji)品牌或批(pi)次，減少細胞(bao)適(shi)應壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被培養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋白(bai)、多聚賴氨(an)酸）。

- 傳代時密度(du)建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接觸(chu)抑制和(he)分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染控(kong)制

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹次性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培養基(ji)中可(ke)添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使(shi)用可(ke)能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活(huo)性。

2. 支原體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支原體汙染（如 PCR 法(fa)），汙染後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日常觀察

- 每天檢查(zha)細胞形態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培養基(ji)顏(yan)色，及時更換(huan)培養基(ji)（通常每 2-3 天換液(ye)壹次）。

- 異常形(xing)態（如(ru)細胞變(bian)圓、碎(sui)片增多）可(ke)能(neng)提示汙染或營(ying)養不足。

2. 傳代與(yu)凍存

- 原代細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數有限（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍存早(zao)期(qi)代次細胞。

- 凍存液(ye)建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專用(yong)凍存培養基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮保(bao)存(cun)。