【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】大(da)鼠(shu)成(cheng)骨(gu)細胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的產(chan)品(pin)：NCI-H2110非(fei)小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌(ai)小鼠(shu)主動(dong)脈(mai)外(wai)膜(mo)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)冠狀(zhuang)動(dong)脈(mai)內皮細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)冠狀(zhuang)動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)頸動(dong)脈(mai)內皮細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)頸動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)腹腔主動(dong)脈(mai)內皮細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)腹腔主動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)腹腔主動(dong)脈(mai)外(wai)膜(mo)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)股動(dong)脈(mai)內皮細胞(bao)

本(ben)公(gong)司所有產品(pin)僅(jin)供(gong)科學實驗，不(bu)做(zuo)其他(ta)科學實驗外的使(shi)用！

大(da)鼠(shu)成(cheng)骨(gu)分離自顱骨(gu)組(zu)織(zhi)；顱(lu)骨位(wei)於脊柱上(shang)方(fang)，由(you)23塊形(xing)狀(zhuang)和(he)大(da)小不(bu)同(tong)的扁(bian)骨(gu)和不(bu)規則骨組(zu)成(cheng)。除(chu)下(xia)頜(he)骨(gu)及(ji)舌骨(gu)外(wai)，其(qi)余(yu)各骨(gu)彼(bi)此借縫(feng)或軟(ruan)骨牢(lao)固連(lian)結，起著保(bao)護和支持(chi)腦(nao)、感覺(jiao)器(qi)官以(yi)及(ji)消化(hua)器(qi)和(he)呼(hu)吸器的起(qi)始部(bu)分的作(zuo)用(yong)。顱分腦顱和面顱(lu)兩部(bu)分。腦顱位(wei)於顱的後(hou)上部，內有顱腔，容(rong)納(na)腦，共8塊。面顱(lu)為顱的前(qian)下部(bu)分，包(bao)含(han)眶(kuang)、鼻(bi)腔、口腔等結構，構成(cheng)面(mian)部(bu)的支架(jia)，共15塊。成(cheng)骨(gu)細胞(bao)是(shi)骨(gu)形(xing)成(cheng)的主要(yao)功能細胞(bao)，負(fu)責(ze)骨基(ji)質的合(he)成(cheng)、分泌和礦化(hua)。骨(gu)不(bu)斷地(di)進(jin)行(xing)著重建，骨重建過程包(bao)括破(po)骨(gu)細胞(bao)貼(tie)附在(zai)舊(jiu)骨區(qu)域，分泌酸性(xing)物(wu)質溶(rong)解(jie)礦物(wu)質，分泌蛋白酶消化(hua)骨(gu)基(ji)質(zhi)，形(xing)成(cheng)骨(gu)吸(xi)收(shou)陷(xian)窩(wo)；其後，成(cheng)骨(gu)細胞(bao)移(yi)行(xing)至被吸(xi)收(shou)部位(wei)，分泌骨基質，骨(gu)基(ji)質(zhi)礦化(hua)而(er)形(xing)成(cheng)新(xin)骨(gu)；破(po)骨(gu)與(yu)成(cheng)骨(gu)過程的平(ping)衡(heng)是維持(chi)正(zheng)常骨量(liang)的關(guan)鍵(jian)。成(cheng)骨(gu)細胞(bao)培養(yang)不(bu)僅(jin)有助(zhu)於了解(jie)骨(gu)形(xing)成(cheng)機制、骨骼系統(tong)疾病(bing)的分子和細胞(bao)學(xue)基(ji)礎，也是藥物(wu)篩選、生物(wu)材料開發和生物(wu)工程(cheng)研究的重要(yao)手(shou)段。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公司(si)實驗室分離的大(da)鼠(shu)成(cheng)骨(gu)采(cai)用(yong)先(xian)用yi蛋白(bai)酶短(duan)時間消化(hua)、後(hou)用(yong)膠(jiao)原酶反(fan)復消化(hua)制備而來(lai)，細胞(bao)總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗室分離的大(da)鼠(shu)成(cheng)骨(gu)經(jing)ALP染色檢測，純度(du)可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌(jun)、酵母(mu)和真菌(jun)等。

培養(yang)基 含(han)FBS、生長添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹次(ci)

生長特(te)性 貼壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態 梭形(xing)、多角形(xing)

傳代(dai)特(te)性 可(ke)傳5代左(zuo)右；3代以(yi)內狀(zhuang)態

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條件 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實驗器材準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移液(ye)管、離(li)心管(guan)、手術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓滅菌(jun)或其(qi)他合(he)適(shi)的消毒(du)處(chu)理。

2. 試劑(ji)準(zhun)備：配制或購(gou)買(mai)合適(shi)的培養(yang)基、消化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原酶等）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等(deng)試劑(ji)，確(que)保其(qi)無(wu)菌(jun)且在(zai)有效期(qi)內。

3. 實驗動(dong)物(wu)或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實驗需求，選擇合(he)適(shi)的動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應的麻(ma)醉(zui)或處死(si)，獲(huo)取所需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材：在(zai)無(wu)菌(jun)條件下(xia)，迅(xun)速(su)取出目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少對組(zu)織(zhi)的損(sun)傷，並(bing)去(qu)除多余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結締組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出的組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無(wu)菌(jun)PBS沖洗數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血液(ye)和雜質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後續消化(hua)。

細胞(bao)分離

1. 消化(hua)：將(jiang)剪碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊放入含(han)有適(shi)量(liang)消化(hua)酶(mei)的離(li)心管(guan)中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹段時間。期間可(ke)輕輕搖(yao)晃離(li)心管(guan)，使(shi)消化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大(da)部分被消化(hua)成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小(xiao)細胞(bao)團時，加入含(han)血(xue)清的培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾與(yu)離(li)心：用(yong)細胞(bao)篩過濾細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未消化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離(li)心，收(shou)集細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡觀察(cha)細胞(bao)的形(xing)態、生長狀(zhuang)態、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發現細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異常，及時采取相應措施。
2. 細胞(bao)計數(shu)與(yu)活力檢測(ce)：在(zai)需要時，可(ke)采用臺(tai)盼藍(lan)染色等方(fang)法(fa)對(dui)細胞(bao)進(jin)行(xing)計數(shu)和活力檢測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細胞(bao)的生(sheng)長情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康狀(zhuang)態。

壹、取材與(yu)分離

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材後(hou)需立即處理，避免長時間暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養環境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免過度消化(hua)導(dao)致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷。

- 消化(hua)時間需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過顯(xian)微鏡觀察(cha)細胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二、培養(yang)條件優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基選擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清或特(te)定(ding)生長因(yin)子(zi)的培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞(bao)需添(tian)加胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁(fan)更換(huan)培養(yang)基品(pin)牌或(huo)批(pi)次(ci)，減少細胞(bao)適(shi)應壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原代細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較弱(ruo)，可(ke)能需要包(bao)被培養(yang)皿（如膠(jiao)原蛋白、多聚賴氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時密度建議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合會導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑制和分化(hua)。

三、汙染控(kong)制

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用壹次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培養(yang)基中可(ke)添(tian)加雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使(shi)用可(ke)能影(ying)響細胞(bao)活性。

2. 支原體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支原體(ti)汙染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需及時丟棄細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日常觀察(cha)

- 每天(tian)檢查(zha)細胞(bao)形(xing)態、密度(du)及(ji)培養(yang)基顏(yan)色，及時更換(huan)培養(yang)基（通常每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次(ci)）。

- 異常形(xing)態（如細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增多）可(ke)能提示(shi)汙染或(huo)營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代細胞(bao)分裂(lie)次(ci)數(shu)有限（壹般 5-10 代(dai)），需及時凍存早期代次(ci)細胞(bao)。

- 凍存液(ye)建議使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍(dong)存培養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮保存。