【概要(yao)描述(shu)】大鼠腎(shen)動(dong)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞公(gong)司(si)正在(zai)出售的產品(pin)：NCI-H1573非(fei)小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌人(ren)睪(gao)丸白(bai)膜(mo)上(shang)皮(pi)細(xi)胞人(ren)睪丸白(bai)膜(mo)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞人(ren)輸精(jing)管(guan)平滑肌(ji)細(xi)胞人(ren)附(fu)睪平滑肌(ji)細(xi)胞人(ren)附(fu)睪管上(shang)皮(pi)細(xi)胞人(ren)附(fu)睪成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞人(ren)宮頸(jing)癌(ai)細(xi)胞人(ren)睪丸支(zhi)持細(xi)胞人(ren)子宮成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞

大鼠腎(shen)動(dong)脈(mai)內(nei)皮分(fen)離(li)自(zi)腎(shen)組織；腎(shen)臟(zang)是(shi)機(ji)體(ti)的重(zhong)要(yao)器官，它的基本功(gong)能(neng)是(shi)生成(cheng)尿(niao)液，借以(yi)清(qing)除體(ti)內(nei)代(dai)謝產物及某些廢(fei)物、毒物，同(tong)時(shi)經(jing)重(zhong)吸收功(gong)能(neng)保(bao)留(liu)水(shui)份(fen)及其他(ta)有用(yong)物質，如葡萄(tao)糖(tang)、蛋(dan)白(bai)質(zhi)、氨基酸(suan)、鈉(na)離(li)子、鉀(jia)離(li)子、碳(tan)suan氫(qing)鈉(na)等，以(yi)調(tiao)節(jie)水(shui)、電解(jie)質平衡(heng)及(ji)維(wei)護酸(suan)堿(jian)平衡(heng)。腎(shen)臟(zang)同(tong)時(shi)還有內(nei)分(fen)泌功(gong)能(neng)，生(sheng)成(cheng)腎(shen)素(su)、促(cu)紅(hong)細(xi)胞生(sheng)成(cheng)素(su)、活(huo)性維(wei)生D3、前列(lie)腺素(su)、激(ji)肽(tai)等，又為(wei)機(ji)體(ti)部分(fen)內(nei)分(fen)泌激(ji)素(su)的降解場(chang)所和腎(shen)外激(ji)素(su)的靶器官。腎(shen)臟(zang)的這些(xie)功(gong)能(neng)，保(bao)證(zheng)了機(ji)體(ti)內(nei)環(huan)境的穩(wen)定，使(shi)新陳代(dai)謝得(de)以(yi)正常進行。腎(shen)動(dong)脈(mai)的分(fen)支為(wei)葉(ye)間動(dong)脈(mai)，穿(chuan)行於(yu)腎(shen)柱內(nei)，上(shang)行至(zhi)皮質與(yu)髓(sui)質交(jiao)界(jie)處，形(xing)成(cheng)與(yu)腎(shen)表面(mian)平行的弓狀(zhuang)動(dong)脈(mai)。小(xiao)葉(ye)間動(dong)脈(mai)向(xiang)被膜(mo)發出(chu)毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)，並向(xiang)周(zhou)圍的腎(shen)小體(ti)發出(chu)入球(qiu)小動(dong)脈(mai)，進入(ru)腎(shen)小囊後形(xing)成(cheng)球(qiu)形(xing)的毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網，再(zai)匯集(ji)成(cheng)出(chu)球(qiu)小動(dong)脈(mai)，出(chu)腎(shen)小體(ti)。直小動(dong)脈(mai)分(fen)支形(xing)成(cheng)毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網，再(zai)匯合(he)成(cheng)直小靜(jing)脈(mai)，入(ru)弓狀靜(jing)脈(mai)、葉(ye)間靜(jing)脈(mai)，最(zui)後匯合(he)成(cheng)腎(shen)靜脈(mai)經(jing)腎(shen)門出(chu)腎(shen)，註入(ru)下(xia)腔靜(jing)脈(mai)。腎(shen)動(dong)脈(mai)既(ji)是(shi)腎(shen)的營養(yang)血(xue)管(guan)，又是(shi)腎(shen)的機(ji)能(neng)血(xue)管(guan)，與腎(shen)泌尿(niao)機(ji)能(neng)密(mi)切相(xiang)關(guan)。腎(shen)動(dong)脈(mai)在(zai)腎(shen)實質(zhi)內(nei)形(xing)成(cheng)兩個毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網：腎(shen)小球(qiu)毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網，血(xue)壓(ya)較(jiao)高，利(li)於(yu)血(xue)漿(jiang)濾過形(xing)成(cheng)原(yuan)尿；球(qiu)後毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網，血(xue)壓(ya)較(jiao)低(di)，利(li)於(yu)腎(shen)小管(guan)的重(zhong)吸收。腎(shen)動(dong)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞是(shi)腎(shen)動(dong)脈(mai)的重(zhong)要(yao)結構細(xi)胞之(zhi)壹，在(zai)機(ji)體(ti)的正常生理過程中發揮(hui)著重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)。腎(shen)動(dong)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞主要(yao)功(gong)能(neng)有：①在(zai)血(xue)漿(jiang)濾過形(xing)成(cheng)原(yuan)尿的過程中起(qi)重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)，②在(zai)腎(shen)小管(guan)的重(zhong)吸收過程中起(qi)重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)，③保持(chi)凝(ning)血(xue)和纖溶的動(dong)態平衡(heng)。
方(fang)法簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的大鼠腎(shen)動(dong)脈(mai)內(nei)皮采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)聯(lian)合消(xiao)化法結合(he)差(cha)速貼壁法、並通過內(nei)皮細(xi)胞專(zhuan)用(yong)培養(yang)基培養(yang)篩(shai)選制備(bei)而來，細(xi)胞總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的大鼠腎(shen)動(dong)脈(mai)內(nei)皮經(jing)CD31免(mian)疫熒光鑒(jian)定(ding)，純度可達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵母和真(zhen)菌(jun)等。

本(ben)公(gong)司(si)所有產品(pin)僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實驗(yan)外的使(shi)用(yong)！

包被條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠(jiao)（0.1%）

培養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率 每2-3天(tian)換液(ye)壹次

生(sheng)長特(te)性 貼壁

細(xi)胞形(xing)態 內(nei)皮細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特(te)性 可傳(chuan)2-3代(dai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實驗(yan)器材準備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移(yi)液管(guan)、離(li)心管、手(shou)術(shu)器械(xie)等，並進行高壓(ya)滅菌(jun)或(huo)其他(ta)合(he)適(shi)的消(xiao)毒(du)處理。

2. 試劑準備(bei)：配(pei)制或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的培養(yang)基、消(xiao)化酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗等試劑，確保其無菌(jun)且在(zai)有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或(huo)組(zu)織來源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇(ze)合(he)適(shi)的動(dong)物並進行相(xiang)應(ying)的麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所需組織；或(huo)從(cong)已(yi)有的組織樣本(ben)庫(ku)中獲(huo)取(qu)組織。

取材與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速取出(chu)目標(biao)組(zu)織，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織的損(sun)傷，並去(qu)除多余(yu)的脂肪(fang)、結締(di)組織等非(fei)目(mu)的組織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的組織用(yong)預冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便後續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎的組織塊(kuai)放(fang)入(ru)含有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶(mei)的離(li)心管中，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床或(huo)培養(yang)箱中消(xiao)化壹段(duan)時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕搖(yao)晃(huang)離(li)心管，使(shi)消(xiao)化更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化：當組(zu)織塊(kuai)大(da)部分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加入含(han)血(xue)清(qing)的培養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化。

3. 過濾與離(li)心：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過濾細(xi)胞懸(xuan)液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的組織碎片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液以(yi)適(shi)當(dang)的轉速離(li)心，收集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱。

細(xi)胞觀察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞的形(xing)態、生長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等，記錄(lu)細(xi)胞的變(bian)化情況，如(ru)發現(xian)細(xi)胞汙(wu)染(ran)或(huo)異(yi)常(chang)，及時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計(ji)數與活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需要時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍染(ran)色(se)等方(fang)法對細(xi)胞進行計(ji)數和活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解細(xi)胞的生長(chang)情況和健康狀態。

壹、取(qu)材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作(zuo)

- 組織取材後需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免長(chang)時(shi)間暴(bao)露於室(shi)溫或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去除血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織類(lei)型(xing)選擇(ze)消(xiao)化酶(mei)，避(bi)免過度消(xiao)化導致(zhi)細(xi)胞損(sun)傷。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控制（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過顯(xian)微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞解(jie)離(li)狀態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培養(yang)基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定(ding)生長(chang)因子的培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞需(xu)添加胰島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換培養(yang)基品(pin)牌(pai)或(huo)批次，減少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞貼壁能力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被培養(yang)皿(min)（如膠原蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度建議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度匯合(he)會導致(zhi)接(jie)觸抑制和分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程在(zai)超(chao)凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性耗材，避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基中可(ke)添加雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使(shi)用(yong)可能(neng)影響細(xi)胞活(huo)性。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞。

四、狀態監控

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞形(xing)態、密(mi)度及培養(yang)基顏(yan)色(se)，及時(shi)更(geng)換培養(yang)基（通常每(mei) 2-3 天(tian)換液(ye)壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多）可(ke)能(neng)提(ti)示汙(wu)染(ran)或(huo)營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞分(fen)裂次數有限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培養(yang)基），梯度降溫後液(ye)氮(dan)保存(cun)。