【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】大(da)鼠子宮(gong)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)公司正(zheng)在(zai)出售(shou)的產(chan)品：NCI-H1299非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)癌人(ren)小腸(chang)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)人(ren)小腸(chang)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)人(ren)結(jie)腸(chang)粘膜上皮細(xi)胞(bao)人(ren)結(jie)腸(chang)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)人(ren)結(jie)腸(chang)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)人(ren)膽(dan)囊上皮細(xi)胞(bao)人(ren)肝內(nei)膽(dan)管(guan)上皮細(xi)胞(bao)人(ren)肝外(wai)膽(dan)管(guan)上皮細(xi)胞(bao)人(ren)肝實(shi)質(zhi)細(xi)胞(bao)

大(da)鼠子宮(gong)成(cheng)纖(xian)維(wei)分離(li)自(zi)子(zi)宮(gong)組織(zhi)；子(zi)宮(gong)是(shi)孕(yun)育(yu)胎兒(er)的(de)器(qi)官(guan)，位(wei)於(yu)盆(pen)腔中(zhong)部(bu)，膀胱與直(zhi)腸(chang)之間，其位置(zhi)可(ke)隨(sui)膀胱與直(zhi)腸(chang)的(de)充(chong)盈(ying)程(cheng)度或體(ti)位而有變化。子宮(gong)的(de)正(zheng)常(chang)位置(zhi)主要依(yi)靠子(zi)宮(gong)諸韌帶、盆(pen)膈(ge)、尿(niao)生殖(zhi)膈(ge)及會(hui)陰中心腱(jian)等結(jie)構(gou)維(wei)持，這(zhe)些結(jie)構(gou)受(shou)損(sun)或松弛(chi)時(shi)，可(ke)以引起子宮(gong)脫(tuo)垂。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松結(jie)締(di)組織(zhi)的(de)主要細(xi)胞(bao)成(cheng)分，由胚胎時(shi)期(qi)的(de)間充質細(xi)胞(bao)分(fen)化而來(lai)；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)較大(da)，輪(lun)廓清(qing)楚，多為(wei)突起的(de)紡(fang)錘(chui)形或星(xing)形的扁(bian)平狀結(jie)構(gou)，其(qi)細(xi)胞(bao)核(he)呈(cheng)規則(ze)的卵圓形，核(he)仁大(da)而(er)明顯。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)功能(neng)活動旺盛，細(xi)胞(bao)質(zhi)嗜弱(ruo)堿性(xing)，具明顯的蛋(dan)白質合成(cheng)和分(fen)泌(mi)活(huo)動，在壹(yi)定條(tiao)件(jian)下，它可以實現(xian)跟纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)的(de)互(hu)相(xiang)轉化；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)對(dui)不同(tong)程(cheng)度的細(xi)胞(bao)變(bian)性(xing)、壞死(si)和組織(zhi)缺(que)損(sun)的(de)修(xiu)復(fu)有(you)著(zhe)十(shi)分重要的(de)作用(yong)。剛(gang)分(fen)離(li)的(de)子(zi)宮(gong)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)呈(cheng)圓形、折光(guang)性(xing)良好(hao)，懸(xuan)浮(fu)於(yu)培(pei)養(yang)基中。30min細(xi)胞(bao)貼壁(bi)，其(qi)中部(bu)分開(kai)始伸出(chu)偽(wei)足(zu)，表(biao)現(xian)為(wei)小(xiao)的(de)突起；6h後細(xi)胞(bao)基本(ben)貼壁(bi)wan全(quan)，伸展(zhan)成(cheng)梭(suo)形，胞核(he)清(qing)晰(xi)，分(fen)布較均勻(yun)，散(san)在生長(chang)，不聚(ju)集(ji)成(cheng)團；細(xi)胞(bao)生長(chang)迅速(su)，5-7天(tian)即(ji)呈(cheng)融合狀態，細(xi)胞(bao)排(pai)列(lie)緊(jin)密，有的(de)交叉(cha)重疊生長(chang)，平坦(tan)、胞體較大(da)，細(xi)胞(bao)質(zhi)透(tou)明，細(xi)胞(bao)核(he)較大(da)，呈(cheng)橢圓形，顏色(se)淡。細(xi)胞(bao)融合，並彼(bi)此(ci)連(lian)接成(cheng)網狀；細(xi)胞(bao)呈(cheng)突起的(de)紡(fang)錘(chui)形或星(xing)形的扁(bian)平分布。子宮(gong)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)的(de)主要特(te)征(zheng)：①是(shi)子(zi)宮(gong)的(de)重(zhong)要(yao)細(xi)胞(bao)組成(cheng)，在體(ti)外(wai)易於培養(yang)；②在子宮(gong)損(sun)傷(shang)後能修(xiu)復(fu)和(he)重(zhong)塑(su)子宮(gong)；③在(zai)子(zi)宮(gong)炎(yan)癥(zheng)時(shi)能(neng)有(you)效控制炎癥(zheng)擴(kuo)散(san)。
方(fang)法簡介：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠子宮(gong)成(cheng)纖(xian)維(wei)采用(yong)yi蛋(dan)白酶-膠(jiao)原酶混合消(xiao)化法結(jie)合差速(su)貼壁(bi)法(fa)制備而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測(ce)：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠子宮(gong)成(cheng)纖(xian)維(wei)經Vimentin免(mian)疫熒光鑒定，純度可(ke)達90%以上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌(jun)、酵母和(he)真菌等。

本(ben)公司所(suo)有(you)產品(pin)僅供(gong)科學實驗(yan)，不(bu)做(zuo)其他(ta)科學實驗(yan)外(wai)的使用(yong)！

培(pei)養(yang)基 含FBS、生長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率 每2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次(ci)

生長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代特性(xing) 可傳5代左右(you)；3代以內狀態

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養(yang)條件 氣相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備：準備無菌的培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或其(qi)他合適的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試(shi)劑準備：配制(zhi)或購(gou)買合適的(de)培(pei)養(yang)基、消(xiao)化酶（如、膠原酶等）、胎牛血(xue)清(qing)、雙抗等(deng)試(shi)劑，確保(bao)其(qi)無菌且(qie)在有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或組織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合適的(de)動(dong)物並進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或處(chu)死，獲(huo)取所(suo)需組織(zhi)；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中獲(huo)取組織(zhi)。

取材(cai)與處(chu)理

1. 取材(cai)：在無菌條件下，迅速(su)取出(chu)目標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少對(dui)組織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多余的脂肪、結(jie)締(di)組織(zhi)等(deng)非目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取出(chu)的組織(zhi)用(yong)預冷(leng)的無菌PBS沖洗數(shu)次(ci)，以去除(chu)血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊，以便(bian)後續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將剪碎(sui)的組織(zhi)塊放入含有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化壹段(duan)時(shi)間。期(qi)間可輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使消(xiao)化更均勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化：當組織(zhi)塊大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時(shi)，加(jia)入含血清(qing)的培養(yang)基終止消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未消(xiao)化的組織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液以適當的轉速(su)離(li)心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀察：每天用倒置(zhi)顯微鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)的(de)形態、生長(chang)狀態、密度等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情況，如發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或異常(chang)，及時(shi)采取相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活(huo)力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色等(deng)方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計數(shu)和(he)活(huo)力檢(jian)測(ce)，以了解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)情況(kuang)和健康(kang)狀態。

壹(yi)、取材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組織(zhi)取材(cai)後需立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免長(chang)時(shi)間暴露於(yu)室(shi)溫(wen)或非營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或生理鹽水(shui)沖(chong)洗組織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇(ze)

- 根據(ju)組織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶，避(bi)免過(guo)度消(xiao)化導致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間需嚴格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯微鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀態。

二、培(pei)養(yang)條件優(you)化

1. 培養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含血清(qing)或特(te)定生長(chang)因子(zi)的培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞(bao)需(xu)添加胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁更換(huan)培(pei)養(yang)基品牌或批(pi)次，減少細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要(yao)包被培(pei)養(yang)皿（如膠原蛋(dan)白、多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代時(shi)密度建議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合會(hui)導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制和(he)分(fen)化。

三(san)、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操(cao)作

- 全(quan)程(cheng)在超凈臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次性(xing)耗材(cai)，避(bi)免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中可添加雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使用(yong)可(ke)能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後需及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀態監(jian)控

1. 日(ri)常觀察

- 每天檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形態、密度及培(pei)養(yang)基顏色，及時(shi)更換(huan)培(pei)養(yang)基（通常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形態（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或營(ying)養(yang)不足。

2. 傳代與凍(dong)存

- 原代細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及時(shi)凍(dong)存早(zao)期(qi)代次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建議使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用凍存培(pei)養(yang)基），梯度降(jiang)溫(wen)後液氮(dan)保(bao)存。