【概要(yao)描(miao)述(shu)】人(ren)皮層(ceng)神經(jing)元細(xi)胞(bao)公司正在出售(shou)的(de)產品：P31/FUJ白(bai)血(xue)病(bing)RAW 264.7 (小(xiao)鼠單(dan)核(he)巨噬(shi)細胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)) (STR鑒定正(zheng)確(que))RM-1 (小(xiao)鼠前(qian)列(lie)腺(xian)癌細胞(bao)) (種(zhong)屬鑒(jian)定正(zheng)確(que))S-180 (小(xiao)鼠腹水(shui)瘤細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬鑒(jian)定正(zheng)確(que))SP2/0（小(xiao)鼠骨髓(sui)瘤細(xi)胞(bao)）STO (小(xiao)鼠胚成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)) (種(zhong)屬鑒(jian)定正(zheng)確(que))SVEC4-10 (小(xiao)鼠淋(lin)巴(ba)結內皮細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬鑒(jian)定正(zheng)確(que))TM3 (小(xiao)鼠睪丸間(jian)質細(xi)胞(bao)) (種(zhong)屬鑒(jian)定正(zheng)確(que))

本(ben)公司所(suo)有(you)產品僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實驗(yan)，不做其他科(ke)學(xue)實驗(yan)外(wai)的(de)使用(yong)！

人(ren)皮層(ceng)神經(jing)元分離自(zi)腦皮(pi)層(ceng)組(zu)織(zhi)；皮層(ceng)神經(jing)元細(xi)胞(bao)是(shi)構(gou)成中樞神經(jing)系統(tong)結構(gou)和(he)功能的(de)基本(ben)單(dan)位(wei)。神經(jing)元是(shi)具有(you)長突觸(軸突)的細(xi)胞(bao)，它由細(xi)胞(bao)體和細(xi)胞(bao)突起構(gou)成(cheng)。在長的軸突上套(tao)有(you)壹(yi)層(ceng)鞘，組(zu)成(cheng)神經(jing)纖(xian)維，它的末(mo)端的細小(xiao)分支(zhi)叫做神經(jing)末(mo)梢(shao)。細(xi)胞(bao)體位於腦(nao)、脊(ji)髓和(he)神經(jing)節中，細胞(bao)突起可(ke)延伸至全身各(ge)器(qi)官和(he)組(zu)織(zhi)中。細(xi)胞(bao)體是(shi)細(xi)胞(bao)含核的(de)部分，其形狀大(da)小(xiao)有(you)很(hen)大(da)差別(bie)，直徑約(yue)4-120微(wei)米。核大(da)而(er)圓，位(wei)於細(xi)胞(bao)中央(yang)，染(ran)色(se)質少(shao)，核仁(ren)明(ming)顯(xian)。細胞(bao)質內有斑(ban)塊狀的核外(wai)染(ran)色(se)質，還(hai)有許(xu)多神經(jing)元纖(xian)維。細胞(bao)突起是(shi)由(you)細胞(bao)體延伸出來(lai)的(de)細長部分，又可分為樹(shu)突和軸(zhou)突。每個(ge)神經(jing)元可(ke)以(yi)有壹(yi)或多個(ge)樹(shu)突，可以(yi)接受刺(ci)激並將興(xing)奮傳(chuan)入(ru)細(xi)胞(bao)體。每個(ge)神經(jing)元只(zhi)有(you)壹個(ge)軸突，可以(yi)把興(xing)奮從(cong)胞(bao)體傳送到(dao)另(ling)壹個(ge)神經(jing)元或其他組(zu)織(zhi)，如肌肉或腺體(ti)。皮(pi)質神經(jing)元是(shi)大(da)腦(nao)皮質的(de)主(zhu)要(yao)組(zu)成(cheng)細胞(bao)之壹，是(shi)大(da)腦(nao)進行功能活動調(tiao)節的基本(ben)單(dan)位(wei)，參與(yu)動物(wu)多種(zhong)中(zhong)樞(shu)神經(jing)系統(tong)疾(ji)病(bing)的(de)病(bing)理過程(cheng)。通(tong)過形(xing)態學觀察(cha)顯(xian)示神經(jing)元從(cong)貼(tie)壁(bi)、伸(shen)出突起開(kai)始(shi)；突起逐(zhu)漸增(zeng)多(duo)，而(er)後突起進(jin)壹(yi)步(bu)增(zeng)多(duo)並逐(zhu)漸成(cheng)網(wang)，同時細(xi)胞(bao)胞(bao)體增(zeng)大(da)，周(zhou)邊(bian)光暈明顯(xian)。10-12d細胞(bao)最(zui)為豐滿，隨(sui)後神經(jing)元開(kai)始(shi)裂解，突起逐(zhu)漸減(jian)少(shao)，細胞(bao)已(yi)退化(hua)變(bian)性，輪廓(kuo)模(mo)糊，光暈消失(shi)，細胞(bao)變形。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公司實驗(yan)室(shi)分離的人(ren)皮層(ceng)神經(jing)元采(cai)用(yong)yi蛋白(bai)酶(mei)消化(hua)法(fa)、神經(jing)元專(zhuan)用(yong)培養(yang)基培(pei)養(yang)篩(shai)選結合(he)化(hua)學(xue)試劑(ji)抑制(zhi)法(fa)制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分離的人(ren)皮層(ceng)神經(jing)元經(jing)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純(chun)度可達(da)90%以上，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真菌(jun)等。

包(bao)被條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml）

培養(yang)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生長特性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態 神經(jing)元細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代特(te)性 屬於終(zhong)末(mo)分化(hua)細(xi)胞(bao)；屬於不增(zeng)殖(zhi)細(xi)胞(bao)群(qun)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器(qi)材準備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的(de)培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移液(ye)管、離心管、手術器(qi)械(xie)等，並進行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或其他合(he)適的消(xiao)毒(du)處理。

2. 試劑(ji)準備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合(he)適的培(pei)養(yang)基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙抗等試(shi)劑(ji)，確保(bao)其無菌(jun)且(qie)在有效期內。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備(bei)：根(gen)據(ju)實驗(yan)需求，選擇合(he)適的動(dong)物(wu)並進行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或處死，獲(huo)取(qu)所(suo)需組(zu)織(zhi)；或從已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫(ku)中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材與處理

1. 取材：在無菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速(su)取出目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組(zu)織(zhi)的損傷，並去除多余的脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組(zu)織(zhi)等非目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出的組(zu)織(zhi)用(yong)預冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以去(qu)除血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以便後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎的組(zu)織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的離心管中，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時間(jian)。期間(jian)可輕輕搖(yao)晃離心管，使消化(hua)更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大(da)部(bu)分被消化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與離心：用(yong)細胞(bao)篩過濾(lv)細胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除(chu)未消化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎片，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉速離(li)心，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡觀察(cha)細胞(bao)的形態(tai)、生長狀態、密(mi)度等，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化(hua)情況(kuang)，如發(fa)現(xian)細胞(bao)汙染(ran)或異常(chang)，及時采(cai)取相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力檢(jian)測(ce)：在需要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼藍(lan)染(ran)色(se)等方(fang)法對(dui)細胞(bao)進行計(ji)數(shu)和(he)活力檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解細(xi)胞(bao)的生長情況(kuang)和健(jian)康狀態。

壹(yi)、取材與(yu)分離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後(hou)需立即處理，避(bi)免長時間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫或非營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或生理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類型(xing)選擇消化(hua)酶(mei)，避免過度消化(hua)導致細胞(bao)損傷。

- 消化(hua)時(shi)間(jian)需嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可通(tong)過顯(xian)微鏡觀察(cha)細胞(bao)解離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)優化(hua)

1. 培養(yang)基選擇

- 使用(yong)含血(xue)清(qing)或特定生長因(yin)子的(de)培(pei)養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞(bao)需添加(jia)胰島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培養(yang)基品牌或批次，減(jian)少(shao)細胞(bao)適應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能力(li)較弱(ruo)，可能需要(yao)包(bao)被培養(yang)皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳代時(shi)密(mi)度建議控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會導致接觸抑制(zhi)和(he)分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在超(chao)凈臺操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹次(ci)性耗(hao)材(cai)，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中(zhong)可(ke)添加雙抗，但長期使用(yong)可能影(ying)響細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需及時(shi)丟棄細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態監控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每天(tian)檢(jian)查細胞(bao)形態、密(mi)度及培養(yang)基顏色，及(ji)時(shi)更換(huan)培養(yang)基（通(tong)常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎片增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示(shi)汙(wu)染(ran)或營養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)分裂次數(shu)有(you)限（壹(yi)般 5-10 代），需及時(shi)凍(dong)存(cun)早期(qi)代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專用(yong)凍(dong)存(cun)培養(yang)基），梯(ti)度降溫後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。