【概(gai)要描(miao)述(shu)】人小腦顆粒細胞(bao)公司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：5-8F (STR)鼻咽(yan)癌細胞(bao)HT22 (小鼠(shu)海(hai)馬(ma)神經元細胞(bao))(新引進，STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))EL-4-B5（小鼠(shu)淋(lin)巴瘤細胞(bao)）(種屬鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que)）細胞(bao)系(xi) >> 倉鼠(shu)BHK-21 [C-13] (倉鼠(shu)腎(shen)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao))CHL (倉鼠(shu)肺細胞(bao))CHO (倉鼠(shu)卵巢細胞(bao))CHO-K1 (倉鼠(shu)卵巢細胞(bao)亞株)Lec1 [Pro-5WgaRI3C] (倉鼠(shu)卵巢細胞(bao))V79 (倉鼠(shu)肺細胞(bao))

人小腦顆粒分離自小腦皮層組(zu)織(zhi)；神(shen)經元是神經系(xi)統(tong)最(zui)基本的結(jie)構與(yu)功能(neng)單(dan)位(wei)，小腦顆粒神經元是體(ti)積(ji)較(jiao)小的(de)神(shen)經元，直(zhi)徑(jing)約10μm，在(zai)中(zhong)樞(shu)神經系(xi)統(tong)中含(han)量(liang)非常豐富，近(jin)乎神經元數(shu)量(liang)的(de)壹(yi)半。由於(yu)小腦神經元的生(sheng)長、分化和大(da)腦皮層神(shen)經元相似(si)，而且數(shu)量(liang)多、便(bian)於(yu)取(qu)材(cai)，因此小腦顆粒神經元是研究神(shen)經元生(sheng)長發育、神經軸突再生(sheng)及神(shen)經疾(ji)病(bing)發生(sheng)機制和(he)臨(lin)床神經藥理(li)的重要手段。小腦顆粒神經元是小腦主(zhu)要的中間(jian)神經元，在哺(bu)乳動(dong)物的(de)小腦內數(shu)量(liang)最(zui)為(wei)豐富。顆(ke)粒神經元的軸突與(yu)苔(tai)狀(zhuang)纖(xian)維和爬行(xing)纖(xian)維相聯系(xi)，形成(cheng)小腦皮層內(nei)的神(shen)經元環(huan)路，在(zai)小腦的神經活動中起(qi)著非常重要的作用(yong)。在動(dong)物(wu)傳染性海(hai)綿(mian)狀腦病中，病(bing)變可波(bo)及(ji)小腦顆粒神經元，導(dao)致小腦皮層的(de)神經元環(huan)路受損(sun)，從(cong)而呈現(xian)神經性行(xing)為(wei)失(shi)調。研(yan)究小腦顆粒神經元在動(dong)物(wu)傳染性海(hai)綿(mian)狀腦病病理(li)學變化(hua)中(zhong)的(de)反應、病(bing)理(li)發生(sheng)的機理特(te)別是分子(zi)機理，有賴(lai)於(yu)小腦顆粒神經元細胞(bao)模型的(de)建(jian)立(li)。小腦顆粒細胞(bao)的軸突是沿冠(guan)狀軸分(fen)布(bu)的(de)平(ping)行(xing)纖(xian)維，正是這種排(pai)列(lie)保(bao)證(zheng)了(le)興(xing)奮的(de)單(dan)向傳導(dao)，這是小腦功能(neng)理(li)論中的(de)關(guan)鍵(jian)假設，小腦顆粒細胞(bao)通過g-氨基丁(ding)酸(suan)接(jie)受戈爾(er)吉(ji)細胞(bao)的抑(yi)制性(xing)突觸(chu)的(de)信(xin)息傳入。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離的人小腦顆粒采用(yong)yi蛋(dan)白酶(mei)消化法(fa)結(jie)合神(shen)經元專用(yong)培養基、化學試(shi)劑(ji)抑(yi)制(zhi)法(fa)篩(shai)選制備而來，細胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測：

公司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離的人小腦顆粒經β-Tubulin免(mian)疫(yi)熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可達90%以上，且不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

本(ben)公司(si)所有產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科學實(shi)驗(yan)，不(bu)做其(qi)他科(ke)學實(shi)驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

包被條件(jian) PLL（0.1mg/ml）

培養基 含(han)B-27、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻率 每(mei)2-3天(tian)換液壹次

生(sheng)長特(te)性 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形態(tai) 神(shen)經元細胞(bao)樣

傳代特(te)性 屬於(yu)終末(mo)分(fen)化(hua)細胞(bao)；屬於(yu)不(bu)增殖(zhi)細胞(bao)群

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養條件(jian) 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備(bei)：準備無菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離心管(guan)、手術器(qi)械等(deng)，並進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的(de)消毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養基、消化酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙(shuang)抗等試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無菌(jun)且在有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來源準(zhun)備：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求，選擇合適的(de)動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相應的(de)麻醉(zui)或處(chu)死(si)，獲取(qu)所(suo)需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條件(jian)下(xia)，迅速(su)取(qu)出(chu)目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷，並去(qu)除多余(yu)的脂(zhi)肪、結(jie)締組(zu)織(zhi)等(deng)非目的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預冷(leng)的無菌(jun)PBS沖洗數(shu)次，以去(qu)除血液(ye)和(he)雜質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便(bian)後續消化。

細胞(bao)分離

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消化酶(mei)的(de)離心管(guan)中，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床或培養箱(xiang)中(zhong)消化壹(yi)段時間(jian)。期間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心管(guan)，使(shi)消化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被(bei)消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸液(ye)或(huo)小細胞(bao)團時，加入(ru)含(han)血清的(de)培養基終止消化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過濾(lv)細胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消化的(de)組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收集(ji)細胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每天(tian)用(yong)倒置顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長狀態、密度(du)等，記錄細胞(bao)的變(bian)化情(qing)況，如發(fa)現(xian)細胞(bao)汙染或異(yi)常(chang)，及時采取(qu)相應措施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力(li)檢(jian)測：在需要時，可采用(yong)臺盼(pan)藍染色等(deng)方法(fa)對細胞(bao)進行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力(li)檢(jian)測，以了解細胞(bao)的生(sheng)長情(qing)況和健康狀(zhuang)態。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴露(lu)於(yu)室(shi)溫或(huo)非營養環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽水(shui)沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血液(ye)、雜質。

2. 消化酶(mei)選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型選擇消化酶(mei)，避(bi)免(mian)過(guo)度(du)消化導(dao)致細胞(bao)損(sun)傷。

- 消化時間(jian)需嚴格(ge)控(kong)制(zhi)（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)解離狀態(tai)。

二、培養條件(jian)優化(hua)

1. 培養基選擇

- 使(shi)用(yong)含血清或(huo)特(te)定生(sheng)長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需添加胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更(geng)換培養基品牌(pai)或(huo)批(pi)次，減少(shao)細胞(bao)適應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代

- 原代細胞(bao)貼壁(bi)能力(li)較弱(ruo)，可能(neng)需要包被培養皿(min)（如膠(jiao)原蛋(dan)白、多聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代時密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會(hui)導(dao)致接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和(he)分化(hua)。

三、汙染控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作，使(shi)用(yong)壹次性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培養基中可添加雙(shuang)抗，但長期使(shi)用(yong)可能(neng)影(ying)響細胞(bao)活性。

2. 支原體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支原體(ti)汙染（如 PCR 法(fa)），汙染後需及時丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細胞(bao)形態(tai)、密度(du)及培養基顏色，及(ji)時更(geng)換培養基（通常每(mei) 2-3 天(tian)換液壹次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如細胞(bao)變圓(yuan)、碎片(pian)增多）可能(neng)提(ti)示汙染或營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳代與凍存(cun)

- 原代細胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期代次細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍存(cun)培養基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫後液氮保(bao)存(cun)。