【概要(yao)描(miao)述(shu)】人(ren)氣(qi)管上皮細胞公司(si)正在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：SU-DHL-2人(ren)B細胞淋(lin)巴瘤細胞人(ren)多(duo)發性(xing)骨髓(sui)瘤細胞ARD(STR鑒定(ding)正確(que))大(da)鼠(shu)少突膠(jiao)質(zhi)前體(ti)細胞系(xi)OLN-93（種(zhong)屬鑒定(ding)）人(ren)喉(hou)表(biao)皮樣(yang)癌細胞HEp-2(STR鑒定(ding)正確(que))小(xiao)鼠(shu)急性(xing)骨髓(sui)性(xing)白(bai)血(xue)病(bing)-綠(lv)色(se)+熒光(guang)素酶(mei)標記C1498-GFP+LUC人(ren)食(shi)管鱗癌細胞KYSE-140(STR鑒定(ding)正確(que))犬腎細胞 MDCK-II（種屬鑒定(ding)）正常(chang)小(xiao)鼠(shu)睪(gao)丸Sertoli細胞TM4（種屬鑒定(ding)）人(ren)

本(ben)公司(si)所有產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)學實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實(shi)驗(yan)外的(de)使(shi)用！

人(ren)氣(qi)管上皮分(fen)離自(zi)氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器(qi)官的(de)壹(yi)部(bu)分(fen)；為後(hou)壁(bi)略(lve)平(ping)的(de)圓筒型管狀。上端(duan)平(ping)第(di)六頸(jing)椎(zhui)下(xia)緣，與(yu)環狀軟(ruan)骨相(xiang)連；向(xiang)下(xia)至(zhi)第(di)四、五(wu)胸(xiong)椎(zhui)體(ti)（相(xiang)當(dang)胸骨角(jiao)平(ping)面）交(jiao)界處，分(fen)左、右主支氣管，分(fen)叉(cha)處稱(cheng)為(wei)氣(qi)管杈。氣管主要(yao)由(you)14-16個(ge)半(ban)環狀軟(ruan)骨構(gou)成(cheng)，有(you)彈(dan)性(xing)，軟(ruan)骨為(wei)“C"字形的(de)軟(ruan)骨環，缺口向後(hou)，各軟(ruan)骨環以(yi)韌(ren)帶連接(jie)起來(lai)，環後(hou)方缺(que)口處由平(ping)滑(hua)肌(ji)和(he)致密(mi)結(jie)締(di)組織連接(jie)，保(bao)持了持(chi)續(xu)張(zhang)開(kai)狀(zhuang)態。管腔襯以(yi)粘(zhan)膜，表(biao)面(mian)覆(fu)蓋(gai)纖毛(mao)上皮，粘(zhan)膜分(fen)泌的(de)粘(zhan)液可粘(zhan)附吸入空氣中的(de)灰(hui)塵(chen)顆粒(li)，纖毛(mao)不(bu)斷向(xiang)咽(yan)部(bu)擺動(dong)將(jiang)粘(zhan)液與灰(hui)塵(chen)排出，以(yi)凈(jing)化吸入的(de)氣(qi)體(ti)。氣(qi)管上皮是(shi)氣(qi)道與(yu)外界環境接(jie)觸(chu)的(de)道防線(xian)，不(bu)僅是各種病原(yuan)體(ti)、炎(yan)癥(zheng)介質作(zuo)用的(de)靶(ba)細胞，還作(zuo)為效(xiao)應(ying)細胞合(he)成(cheng)、釋放多種(zhong)炎(yan)性(xing)介質和(he)細胞因(yin)子(zi)從(cong)而(er)參(can)與(yu)氣(qi)道炎(yan)癥(zheng)及(ji)免(mian)疫(yi)反應(ying)。體(ti)外培養的(de)原(yuan)代氣管上皮細胞因(yin)與體(ti)內(nei)組織在形態結(jie)構(gou)和(he)功能活動(dong)上存(cun)在很(hen)大(da)的(de)相(xiang)似性(xing)，因(yin)此，在(zai)基礎(chu)及臨(lin)床研(yan)究中極為(wei)重(zhong)要(yao)。
方法(fa)簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離的(de)人(ren)氣(qi)管上皮采(cai)用混合(he)消化法(fa)結(jie)合(he)差速(su)貼壁法(fa)，並通過上皮細胞專(zhuan)用培養(yang)基培(pei)養篩選(xuan)制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離的(de)人(ren)氣(qi)管上皮經(jing)PCK免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純(chun)度可(ke)達(da)90%以(yi)上，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

包被(bei)條件 鼠(shu)尾膠(jiao)原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特性(xing) 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性(xing) 可(ke)傳2-3代

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養瓶、移液(ye)管、離心(xin)管、手術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或其他(ta)合(he)適的(de)消毒處理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或購買合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等試劑(ji)，確(que)保(bao)其無菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物(wu)或組織來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或處死，獲取(qu)所需組織；或從(cong)已有(you)的(de)組織樣本(ben)庫中獲取(qu)組織。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速(su)取出目標組織，盡量(liang)減少對組織的(de)損(sun)傷，並(bing)去(qu)除多(duo)余的(de)脂肪(fang)、結(jie)締(di)組織等非(fei)目(mu)的(de)組織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組織用預(yu)冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續(xu)消化。

細胞分(fen)離

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組織塊(kuai)放入含有適量(liang)消化酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管中，在37℃恒(heng)溫搖(yao)床或培養箱(xiang)中消化壹(yi)段(duan)時間(jian)。期間(jian)可輕輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管，使消化更均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組織塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化成(cheng)單細胞懸液(ye)或小(xiao)細胞團時，加(jia)入含血(xue)清的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心：用細胞篩過(guo)濾(lv)細胞懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消化的(de)組織碎片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收(shou)集細胞沈澱(dian)。

細胞觀(guan)察與(yu)檢(jian)測

1. 日常(chang)觀(guan)察：每(mei)天用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞的(de)形態、生長(chang)狀態、密度等(deng)，記錄細胞的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發現(xian)細胞汙(wu)染(ran)或異常(chang)，及時采(cai)取(qu)相應(ying)措施。
2. 細胞計數與(yu)活(huo)力檢(jian)測：在需要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染色(se)等(deng)方法(fa)對(dui)細胞進(jin)行(xing)計數和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測，以(yi)了解(jie)細胞的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康狀態。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組織取材後(hou)需立即處理(li)，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴(bao)露於(yu)室溫或非(fei)營養環境。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組織，去除血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織類型選(xuan)擇(ze)消化酶(mei)，避(bi)免(mian)過度消化導(dao)致細胞損(sun)傷。

- 消化時間(jian)需嚴(yan)格控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞解離(li)狀(zhuang)態。

二、培養(yang)條件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含血(xue)清或特定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞需添加(jia)胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更換培(pei)養(yang)基品(pin)牌或批次(ci)，減少細胞適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳代

- 原(yuan)代細胞貼壁能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需要(yao)包被(bei)培養皿(min)（如膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代時密(mi)度建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和(he)分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使用壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基(ji)中可添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長期使用可能(neng)影響細胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及時丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀態監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢查(zha)細胞形態、密度及(ji)培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時更換培(pei)養(yang)基（通常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態（如細胞變圓、碎片(pian)增(zeng)多）可(ke)能(neng)提(ti)示汙(wu)染(ran)或營養不(bu)足。

2. 傳代與凍存(cun)

- 原(yuan)代細胞分(fen)裂次(ci)數有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及時凍存(cun)早(zao)期代次(ci)細胞。

- 凍存(cun)液建議使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍存(cun)培養(yang)基），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。