【概(gai)要描述(shu)】人(ren)肺(fei)成纖維(wei)細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：sv-huc-1人膀胱上皮(pi)永(yong)生化(hua)細胞(bao)人腎上腺(xian)皮(pi)質腺癌(ai)細胞(bao)NCI-H295R(STR鑒定(ding)正(zheng)確)35.1雜(za)交(jiao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)抗(kang)CD2（種(zhong)屬(shu)鑒定(ding)）大(da)鼠(shu)脂肪(fang)微(wei)血管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)小鼠肝癌(ai)細胞(bao)帶熒(ying)光(guang)素酶(mei)Hepa 1-6+LUC(種屬(shu)鑒定(ding))人非(fei)小細胞(bao)肺(fei)腺癌(ai)細胞(bao)NCI-H157(STR鑒定(ding)正(zheng)確)人(ren)包(bao)皮(pi)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)HFF-1(STR鑒定(ding)正(zheng)確)人(ren)宮(gong)頸(jing)癌(ai)細胞(bao)Hela-s3 (STR鑒定(ding)正(zheng)確)人(ren)甲(jia)狀腺癌(ai)細

本公(gong)司(si)所有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其他科學(xue)實驗(yan)外(wai)的(de)使用！

人(ren)肺(fei)成纖維(wei)分(fen)離(li)自肺(fei)組織(zhi)；肺(fei)是(shi)機(ji)體的(de)呼吸(xi)器(qi)官，位(wei)於胸(xiong)腔，左(zuo)右各壹，覆蓋於心(xin)之上(shang)。肺(fei)有(you)分葉(ye)，左(zuo)二(er)右三，共五(wu)葉(ye)。肺(fei)經(jing)肺(fei)系(xi)（指(zhi)氣管(guan)、支(zhi)氣(qi)管(guan)等(deng)）與(yu)喉、鼻相連(lian)，故(gu)稱喉(hou)為肺(fei)之門(men)戶(hu)，鼻(bi)為(wei)肺(fei)之外(wai)竅(qiao)。成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)的(de)主(zhu)要細胞(bao)成分，由(you)胚(pei)胎時(shi)期(qi)的(de)間充(chong)質細胞(bao)分化(hua)而來；成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)較大(da)，輪(lun)廓(kuo)清楚，多(duo)為(wei)突起(qi)的(de)紡(fang)錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的(de)扁平狀結(jie)構，其細(xi)胞(bao)核呈(cheng)規(gui)則(ze)的(de)卵(luan)圓形，核(he)仁(ren)大(da)而明顯(xian)。成纖維(wei)細(xi)胞(bao)功能(neng)活動旺盛(sheng)，細胞(bao)質嗜(shi)弱堿性(xing)，具明顯(xian)的(de)蛋白(bai)質合(he)成和(he)分泌(mi)活動，在壹定(ding)條件(jian)下(xia)，它可(ke)以(yi)實現跟(gen)纖維(wei)細(xi)胞(bao)的(de)互(hu)相轉化(hua)；成纖維(wei)細(xi)胞(bao)對不同(tong)程度(du)的(de)細(xi)胞(bao)變(bian)性(xing)、壞死(si)和(he)組織(zhi)缺損(sun)的(de)修(xiu)復有(you)著(zhe)十(shi)分重(zhong)要的(de)作(zuo)用。剛(gang)分(fen)離(li)的(de)肺(fei)成纖維(wei)細(xi)胞(bao)呈(cheng)圓(yuan)形(xing)、折光性(xing)良好(hao)，懸(xuan)浮於培養基中(zhong)。30min細胞(bao)貼壁，其中(zhong)部分開始(shi)伸出偽足(zu)，表(biao)現(xian)為(wei)小的(de)突起(qi)；6h後(hou)細胞(bao)基本貼壁wan全，伸展(zhan)成(cheng)梭形，胞(bao)核清晰，分布較均(jun)勻，散在生長，不聚集成(cheng)團(tuan)；細胞(bao)生長迅速(su)，5-7天(tian)即(ji)呈(cheng)融(rong)合(he)狀態，細胞(bao)排(pai)列緊密，有(you)的(de)交(jiao)叉(cha)重(zhong)疊(die)生(sheng)長，平坦、胞(bao)體較大(da)，細(xi)胞(bao)質透明，細(xi)胞(bao)核較大(da)，呈(cheng)橢(tuo)圓(yuan)形(xing)，顏色淡。細(xi)胞(bao)融合(he)，並彼此連(lian)接(jie)成網狀；細胞(bao)呈(cheng)突起(qi)的(de)紡(fang)錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的(de)扁平分(fen)布。肺(fei)成纖維(wei)細(xi)胞(bao)在生理條件(jian)下(xia)的(de)主(zhu)要功能(neng)包(bao)括：構造和(he)維(wei)持(chi)肺(fei)器官的(de)正(zheng)常(chang)形態，合(he)成和(he)釋(shi)放細胞(bao)外(wai)基(ji)質以(yi)及(ji)組織(zhi)損傷後(hou)及(ji)時大(da)量(liang)聚集修(xiu)復損傷組織(zhi)。
方法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分離(li)的(de)人(ren)肺(fei)成纖維(wei)采(cai)用yi蛋白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)混合(he)消化(hua)法(fa)結(jie)合(he)差速(su)貼(tie)壁法(fa)制備(bei)而來，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分離(li)的(de)人(ren)肺(fei)成纖維(wei)經(jing)Vimentin免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒定(ding)，純度(du)可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌(jun)等(deng)。

培養基 含(han)FBS、生(sheng)長添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹次(ci)

生(sheng)長特性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形態 成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳代特(te)性(xing) 可(ke)傳5代(dai)左(zuo)右；3代以(yi)內狀態

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養條件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的(de)培養皿、培養瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術器械(xie)等(deng)，並進(jin)行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或其他合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配制或購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確保(bao)其無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效期(qi)內。

3. 實驗(yan)動物(wu)或組(zu)織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備(bei)：根據實驗(yan)需求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動物(wu)並進(jin)行(xing)相應(ying)的(de)麻(ma)醉或處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需組(zu)織(zhi)；或從已有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣本庫中(zhong)獲取組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速(su)取(qu)出目(mu)標組織(zhi)，盡量(liang)減少(shao)對組織(zhi)的(de)損(sun)傷，並去(qu)除多(duo)余的(de)脂肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出的(de)組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血液(ye)和(he)雜質。

3. 剪切：將(jiang)組織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量(liang)消化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹段時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕輕搖晃離(li)心(xin)管(guan)，使消化(hua)更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被消化(hua)成單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或小細胞(bao)團時，加入(ru)含(han)血清的(de)培養基終(zhong)止消化(hua)。

3. 過濾與(yu)離(li)心(xin)：用細(xi)胞(bao)篩(shai)過濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除未消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每天用倒置顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)的(de)形(xing)態、生長狀態、密度等(deng)，記錄細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情況(kuang)，如發(fa)現(xian)細胞(bao)汙染或異常，及(ji)時采(cai)取相應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與活力(li)檢(jian)測：在(zai)需(xu)要時，可采(cai)用臺(tai)盼藍(lan)染色等(deng)方法(fa)對細胞(bao)進行(xing)計數(shu)和(he)活力(li)檢(jian)測，以(yi)了(le)解細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長情況和(he)健康狀態。

壹、取材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材後(hou)需立(li)即(ji)處(chu)理，避免(mian)長時間暴(bao)露於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養環(huan)境。

- 使用無菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽水沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類型(xing)選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度消(xiao)化(hua)導致(zhi)細胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化(hua)時間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制（通常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通過顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)解離(li)狀態。

二(er)、培養條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養基選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清或特(te)定(ding)生長因子的(de)培養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更(geng)換(huan)培養基品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳代

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較弱，可能(neng)需要包(bao)被培養皿（如(ru)膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳代時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度匯合(he)會導致(zhi)接觸(chu)抑制和(he)分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全程在超凈臺操作(zuo)，使用壹次(ci)性(xing)耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養基中(zhong)可添加雙抗(kang)，但長期(qi)使用可能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需及(ji)時丟(diu)棄細胞(bao)。

四、狀態監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查細胞(bao)形態、密度及(ji)培養基顏色，及(ji)時更(geng)換(huan)培養基（通(tong)常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹次(ci)）。

- 異常形(xing)態（如細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提示(shi)汙(wu)染或營(ying)養不足(zu)。

2. 傳代與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂次(ci)數(shu)有(you)限(xian)（壹般 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍(dong)存早期(qi)代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議(yi)使用 DMSO+血清（或專用凍(dong)存培養基），梯(ti)度(du)降溫(wen)後(hou)液氮(dan)保(bao)存。