【概(gai)要描(miao)述】人(ren)乳(ru)腺癌血管周(zhou)細(xi)胞公(gong)司正在出(chu)售(shou)的(de)產品：PC12大鼠(shu)腎(shen)上腺嗜(shi)鉻(ge)細(xi)胞小(xiao)鼠(shu)腹(fu)膜間(jian)皮(pi)細(xi)胞大鼠(shu)結(jie)腸(chang)黏(nian)膜(mo)上皮細(xi)胞人(ren)乳(ru)腺癌血管內(nei)皮細(xi)胞小(xiao)鼠(shu)骨(gu)內膜間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞大鼠(shu)精(jing)原幹(gan)細(xi)胞人(ren)乳(ru)腺癌成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞小(xiao)鼠(shu)骨(gu)髓單核細(xi)胞大鼠(shu)淋(lin)巴結(jie)淋(lin)巴細(xi)胞

人(ren)乳(ru)腺癌血管周(zhou)分離自乳(ru)腺癌組織(zhi)；女性(xing)乳(ru)腺是由皮(pi)膚(fu)、纖(xian)維(wei)組織(zhi)、乳(ru)腺腺體和(he)脂肪組成(cheng)的，乳(ru)腺癌是發(fa)生在乳(ru)腺腺上皮組織(zhi)的惡性(xing)腫(zhong)瘤。乳(ru)腺癌中99%發(fa)生在女(nv)性(xing)，男性(xing)僅(jin)占(zhan)1%。乳(ru)腺並(bing)不(bu)是維持機體生命活(huo)動(dong)的重(zhong)要器官，原位(wei)乳(ru)腺癌並不(bu)致(zhi)命；但(dan)由於(yu)乳(ru)腺癌細(xi)胞喪(sang)失(shi)了(le)正常細(xi)胞的(de)特(te)性，細(xi)胞之(zhi)間(jian)連(lian)接松散，容(rong)易脫落(luo)。癌細(xi)胞壹旦脫(tuo)落(luo)，遊離(li)的癌細(xi)胞可(ke)以(yi)隨血液(ye)或(huo)淋(lin)巴液(ye)播散(san)全(quan)身(shen)，形成(cheng)轉移，危(wei)及生命。目(mu)前(qian)，乳(ru)腺癌已成(cheng)為威(wei)脅(xie)女(nv)性(xing)身(shen)心健(jian)康(kang)的(de)常(chang)見(jian)腫(zhong)瘤。周(zhou)細(xi)胞（pericyte）又(you)稱(cheng)Rouget細(xi)胞和(he)壁(bi)細(xi)胞，是壹種(zhong)包(bao)圍(wei)全(quan)身(shen)毛細(xi)血管和(he)靜脈中內皮(pi)細(xi)胞的(de)細(xi)胞，可(ke)以(yi)收(shou)縮。周細(xi)胞嵌(qian)入毛細(xi)血管內(nei)皮細(xi)胞的(de)基(ji)膜(mo)中，通過(guo)物(wu)理(li)接觸和(he)旁分泌(mi)信(xin)號與(yu)內(nei)皮(pi)細(xi)胞進(jin)行(xing)細(xi)胞通訊(xun)，監(jian)視和(he)穩定(ding)內(nei)皮細(xi)胞的(de)成(cheng)熟(shu)過(guo)程(cheng)。此(ci)外(wai)，周細(xi)胞還具(ju)有(you)調控毛細(xi)血管血流(liu)量(liang)、細(xi)胞碎(sui)屑(xie)清除(chu)和(he)吞(tun)噬(shi)以(yi)及血腦(nao)屏(ping)障滲透性(xing)的作用(yong)，其(qi)多(duo)功(gong)能(neng)性是目(mu)前(qian)研究(jiu)的(de)熱點(dian)之壹，所以(yi)對血管周(zhou)細(xi)胞的(de)生(sheng)物(wu)學特(te)征、標(biao)記(ji)物、細(xi)胞功(gong)能(neng)等的(de)研究(jiu)都(dou)為(wei)相關(guan)研究(jiu)提供(gong)基(ji)礎資(zi)料。周(zhou)細(xi)胞產生手指狀的外(wai)延以(yi)調控(kong)毛細(xi)血管的(de)血流(liu)量(liang)。周(zhou)細(xi)胞和(he)內皮細(xi)胞之(zhi)間(jian)共(gong)同擁(yong)有(you)壹個基(ji)膜(mo)，基(ji)膜(mo)上有(you)多種(zhong)細(xi)胞連(lian)接，包(bao)括(kuo)多種(zhong)整(zheng)合(he)素(su)、神經(jing)鈣黏素(su)、纖連(lian)蛋白(bai)以及接合(he)素(su)。它還參與(yu)毛細(xi)血管直(zhi)徑(jing)的雙(shuang)向調(tiao)控(kong)；毛細(xi)血管受(shou)損時(shi)，周(zhou)細(xi)胞還可(ke)增殖，分化為(wei)內(nei)皮(pi)細(xi)胞和(he)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的人(ren)乳(ru)腺癌血管周(zhou)采用(yong)膠原酶(mei)-中性dan白(bai)酶(mei)聯合(he)消(xiao)化法(fa)及不(bu)銹(xiu)鋼(gang)網(wang)篩(shai)過(guo)濾法(fa)結(jie)合(he)密(mi)度(du)梯(ti)度(du)離心(xin)法制(zhi)備(bei)而(er)來，細(xi)胞總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的人(ren)乳(ru)腺癌血管周(zhou)經alpha-SMA免疫熒(ying)光(guang)鑒定(ding)，純度(du)可達90%以(yi)上，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌、酵(jiao)母和(he)真菌等。

本公(gong)司所有(you)產品僅(jin)供(gong)科(ke)學實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實(shi)驗外(wai)的使用(yong)！

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生長添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹次

生長特(te)性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞形態(tai) 成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞樣

傳(chuan)代特(te)性 可傳(chuan)5代左(zuo)右；3代(dai)以(yi)內狀態(tai)好(hao)

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養條件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實(shi)驗器材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移液(ye)管、離(li)心管、手(shou)術器械等，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的消(xiao)毒處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的培(pei)養基(ji)、消(xiao)化酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等試劑(ji)，確保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有(you)效期內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物或組織(zhi)來源準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求，選擇(ze)合(he)適(shi)的動物(wu)並進(jin)行(xing)相(xiang)應的(de)麻(ma)醉或處(chu)死(si)，獲取所需(xu)組織(zhi)；或從(cong)已(yi)有(you)的組織(zhi)樣本庫(ku)中(zhong)獲取組織(zhi)。

取材與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材：在無菌(jun)條件下(xia)，迅速(su)取出(chu)目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對組織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余的(de)脂肪、結(jie)締(di)組織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷的無菌(jun)PBS沖洗(xi)數次，以去(qu)除(chu)血液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪切：將(jiang)組織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後續消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎(sui)的組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有(you)適量(liang)消(xiao)化酶(mei)的離(li)心管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖(yao)床或培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化壹段時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕搖(yao)晃離心管，使消(xiao)化更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消(xiao)化：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大部(bu)分被(bei)消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小細(xi)胞團(tuan)時，加入含(han)血清的培(pei)養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將濾液(ye)以(yi)適當(dang)的轉速(su)離心(xin)，收集細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日常觀(guan)察(cha)：每天用(yong)倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞的(de)形態(tai)、生長(chang)狀態(tai)、密度(du)等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發(fa)現細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異常，及(ji)時采取(qu)相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞計數與(yu)活(huo)力檢測：在需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼藍染色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞進(jin)行(xing)計數和(he)活力檢測，以了(le)解(jie)細(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)情況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹、取材(cai)與(yu)分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組織(zhi)取材(cai)後需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避免長(chang)時間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫或(huo)非營(ying)養環(huan)境(jing)。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或生理鹽水沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶(mei)選擇(ze)

- 根據(ju)組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶(mei)，避免過(guo)度(du)消(xiao)化導致(zhi)細(xi)胞損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞解(jie)離(li)狀態(tai)。

二、培(pei)養條件優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基(ji)選(xuan)擇

- 使用(yong)含(han)血清或特(te)定生長因子的培(pei)養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞需(xu)添(tian)加胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免頻繁更換培(pei)養基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原代(dai)細(xi)胞貼(tie)壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養皿(min)（如膠原蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度(du)建議(yi)控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會導致(zhi)接觸抑制(zhi)和(he)分化。

三(san)、汙染控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操作

- 全程(cheng)在超凈臺(tai)操作，使用(yong)壹次性(xing)耗材(cai)，避免交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培(pei)養基(ji)中(zhong)可添(tian)加雙抗(kang)，但長(chang)期使用(yong)可能(neng)影響細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢測

- 定期檢(jian)測支(zhi)原體汙染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞。

四、狀態(tai)監控(kong)

1. 日常觀(guan)察(cha)

- 每天檢(jian)查(zha)細(xi)胞形態(tai)、密度(du)及培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更換培(pei)養基(ji)（通常(chang)每 2-3 天換(huan)液(ye)壹次）。

- 異常形態(tai)（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多）可能(neng)提示(shi)汙染或(huo)營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞分(fen)裂(lie)次(ci)數有(you)限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存早(zao)期代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血清（或專用(yong)凍(dong)存培(pei)養基(ji)），梯(ti)度(du)降溫後液(ye)氮(dan)保存。