【概要(yao)描述(shu)】人(ren)角(jiao)膜內(nei)皮細胞(bao)公司(si)正在(zai)出(chu)售的(de)產品：BHK倉(cang)鼠(shu)腎(shen)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)雞(ji)肺動脈內(nei)皮細胞(bao)人(ren)肺大動脈平(ping)滑(hua)肌細胞(bao)小鼠(shu)Ⅱ型肺泡上皮(pi)細胞(bao)豬脂(zhi)肪(fang)細胞(bao)大鼠(shu)Ⅱ型肺泡上皮(pi)細胞(bao)兔視(shi)網膜(mo)色上皮(pi)細胞(bao)雞(ji)肺動脈平(ping)滑(hua)肌細胞(bao)人(ren)肺大靜脈內(nei)皮細胞(bao)小鼠(shu)氣管上(shang)皮(pi)細胞(bao)

本公司(si)所有(you)產品僅(jin)供科學(xue)實驗，不(bu)做(zuo)其他科(ke)學(xue)實驗外(wai)的(de)使用(yong)！

人(ren)角(jiao)膜內(nei)皮分離(li)自眼角(jiao)膜組(zu)織；角(jiao)膜位於(yu)眼球(qiu)前(qian)壁(bi)的(de)壹(yi)層(ceng)透明膜，約(yue)占纖(xian)維膜(mo)的(de)前(qian)1/6，從後面(mian)看(kan)角(jiao)膜呈(cheng)正圓形，從前(qian)面(mian)看(kan)為(wei)橫(heng)橢圓(yuan)形(xing)。角(jiao)膜厚度(du)各部分不(bu)盡(jin)相(xiang)同(tong)，中央(yang)部最薄。角(jiao)膜有(you)十(shi)分敏(min)感(gan)的神經末梢，如有(you)外(wai)物接(jie)觸角(jiao)膜，眼瞼便(bian)會不(bu)由(you)自主(zhu)地合(he)上(shang)以(yi)保護(hu)眼睛。為(wei)了保持(chi)透明，角(jiao)膜並沒有(you)血(xue)管(guan)，透過外界(jie)空(kong)氣(qi)、淚(lei)液(ye)及房水(shui)獲(huo)取養(yang)份(fen)及氧氣(qi)。角(jiao)膜分(fen)為(wei)五(wu)層，由(you)前(qian)向(xiang)後(hou)依(yi)次(ci)為(wei)：上(shang)皮細胞(bao)層、前(qian)彈(dan)力層(ceng)、基(ji)質層(ceng)、後(hou)彈(dan)力層(ceng)、內(nei)皮細胞(bao)層。角(jiao)膜的(de)高度(du)透明性和(he)光學(xue)性是正(zheng)常(chang)發揮生理(li)功能(neng)的必要(yao)條(tiao)件(jian)之壹(yi)，而(er)角(jiao)膜內(nei)皮細胞(bao)（CEC）在維持(chi)角(jiao)膜的(de)正常生理(li)功能(neng)方面(mian)起(qi)重要(yao)作(zuo)用(yong)。角(jiao)膜內(nei)皮細胞(bao)是角(jiao)膜內(nei)層的單(dan)層細胞(bao)，構(gou)成(cheng)了後(hou)彈(dan)力層(ceng)和(he)房水(shui)之間(jian)的(de)物(wu)理(li)屏障，通過離(li)子“泵(beng)"功能(neng)調(tiao)節角(jiao)膜中(zhong)離(li)子濃(nong)度(du)和(he)水(shui)分(fen)，維持(chi)角(jiao)膜的(de)半脫(tuo)水(shui)狀態(tai)，保證(zheng)角(jiao)膜的(de)正常厚度(du)和(he)透明度(du)。壹(yi)旦(dan)角(jiao)膜內(nei)皮細胞(bao)功能(neng)出(chu)現紊(wen)亂(luan)，常(chang)導(dao)致(zhi)角(jiao)膜水(shui)腫(zhong)而使角(jiao)膜部分甚(shen)至wan全(quan)失去(qu)透明性。角(jiao)膜內(nei)皮細胞(bao)主要(yao)功能(neng)有(you)：①角(jiao)膜是(shi)的無血(xue)管(guan)的(de)組(zu)織，具(ju)有(you)透明的特性(xing)和(he)合(he)成(cheng)許多(duo)蛋白(bai)的(de)功能(neng)；②角(jiao)膜內(nei)皮細胞(bao)對角(jiao)膜透明性有(you)重要(yao)作(zuo)用(yong)；③角(jiao)膜內(nei)皮細胞(bao)通過Na+-K+-ATP酶(mei)活性，維持(chi)角(jiao)膜和(he)房水(shui)內(nei)Na+梯(ti)度(du)，防止水(shui)分(fen)滲入角(jiao)膜內(nei)，維持(chi)角(jiao)膜實(shi)質層(ceng)相(xiang)對脫(tuo)水(shui)狀態(tai)，維持(chi)透明性。
方法簡介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室分離(li)的人(ren)角(jiao)膜內(nei)皮采用(yong)混(hun)合(he)膠原(yuan)酶(mei)消化結(jie)合(he)內(nei)皮細胞(bao)專用(yong)培養(yang)基(ji)培養(yang)篩選制備而(er)來，細胞(bao)總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測：

公司(si)實驗(yan)室分離(li)的人(ren)角(jiao)膜內(nei)皮經NSE（神經元(yuan)特異性烯醇化(hua)酶(mei)）免疫熒(ying)光鑒定，純度(du)可達(da)90%以(yi)上，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

包被(bei)條件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生長特性(xing) 貼壁

細胞(bao)形態(tai) 內(nei)皮細胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 可傳(chuan)2-3代(dai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養(yang)條件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工(gong)作(zuo)

1. 實驗器(qi)材(cai)準備：準備無(wu)菌(jun)的(de)培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移液(ye)管、離(li)心管(guan)、手(shou)術器械(xie)等(deng)，並進行高壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其他合(he)適(shi)的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準備：配(pei)制或購(gou)買合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確保其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實驗動(dong)物(wu)或組(zu)織來源(yuan)準備：根據(ju)實驗(yan)需(xu)求，選擇合(he)適(shi)的(de)動(dong)物並進行相(xiang)應的麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取所(suo)需(xu)組(zu)織；或(huo)從已有(you)的(de)組(zu)織樣本庫中獲(huo)取組(zu)織。

取材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下，迅速(su)取出(chu)目標(biao)組(zu)織，盡(jin)量減少對組(zu)織的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余的脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組(zu)織等(deng)非(fei)目(mu)的組(zu)織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的組(zu)織用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續消化。

細胞(bao)分離(li)

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎的組(zu)織塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化酶(mei)的離(li)心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖床或培養(yang)箱中消化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間可輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心管(guan)，使消化更(geng)均勻。

2. 終止消化：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大部分被(bei)消化成(cheng)單細胞(bao)懸液(ye)或小細胞(bao)團時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終止消化。

3. 過濾與(yu)離(li)心：用(yong)細胞(bao)篩過濾細胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除未消化的(de)組(zu)織碎片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以適(shi)當(dang)的(de)轉速(su)離(li)心，收(shou)集細胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀察與檢(jian)測

1. 日常觀(guan)察：每天用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡觀察細胞(bao)的形(xing)態(tai)、生長狀態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄細胞(bao)的變(bian)化(hua)情況(kuang)，如(ru)發現(xian)細胞(bao)汙染或異常，及時(shi)采取相(xiang)應措施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與活(huo)力檢(jian)測：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可采(cai)用(yong)臺盼藍(lan)染色等方(fang)法對細胞(bao)進行計(ji)數和(he)活(huo)力檢(jian)測，以(yi)了解(jie)細胞(bao)的生長情況(kuang)和(he)健(jian)康狀態(tai)。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織取材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處(chu)理(li)，避免長時(shi)間暴露(lu)於(yu)室溫或(huo)非(fei)營(ying)養環境。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶(mei)選擇

- 根據(ju)組(zu)織類(lei)型選擇消化酶(mei)，避免過度(du)消化導(dao)致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴格(ge)控(kong)制（通常(chang) 10-30 分鐘），可通(tong)過顯(xian)微鏡觀察細胞(bao)解離(li)狀態(tai)。

二、培養(yang)條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選擇

- 使用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定生長因(yin)子(zi)的培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞(bao)需(xu)添加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁更換(huan)培養(yang)基(ji)品牌或(huo)批次(ci)，減(jian)少細胞(bao)適(shi)應壓力。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿（如膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑制和(he)分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程在超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗材(cai)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染。

- 培養(yang)基(ji)中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用(yong)可能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定期檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染（如 PCR 法），汙(wu)染後需(xu)及時(shi)丟棄(qi)細胞(bao)。

四、狀態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常觀(guan)察

- 每天檢(jian)查細胞(bao)形態(tai)、密(mi)度(du)及培養(yang)基(ji)顏色，及時(shi)更換(huan)培養(yang)基(ji)（通常每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細胞(bao)變圓(yuan)、碎片增(zeng)多(duo)）可能(neng)提(ti)示(shi)汙(wu)染或營(ying)養不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂(lie)次(ci)數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍存(cun)早(zao)期代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降溫後液(ye)氮保存(cun)。