【概(gai)要描述(shu)】人(ren)脈(mai)絡(luo)膜微(wei)血管(guan)內皮細(xi)胞(bao)公司正在出售(shou)的產品(pin)：L8824草魚(yu)肝臟(zang)細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠氣(qi)管平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)豬(zhu)心臟(zang)瓣(ban)膜(mo)內皮細(xi)胞(bao)大鼠氣(qi)管平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)兔(tu)肌腱(jian)幹細(xi)胞(bao)雞前脂肪(fang)細(xi)胞(bao)人肺(fei)動(dong)脈成纖維細胞小(xiao)鼠肺(fei)成纖維細胞豬(zhu)成骨(gu)細(xi)胞(bao)大(da)鼠肺(fei)成纖維細胞

本(ben)公司所(suo)有(you)產品(pin)僅供(gong)科學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做其他科(ke)學實(shi)驗(yan)外(wai)的使用(yong)！

人(ren)脈(mai)絡(luo)膜(mo)微(wei)血管(guan)內皮分(fen)離(li)自眼球(qiu)脈(mai)絡(luo)膜(mo)組(zu)織(zhi)；脈(mai)絡(luo)膜在視網(wang)膜(mo)和(he)鞏膜之(zhi)間，含(han)有(you)豐富(fu)血管(guan)和(he)色(se)素(su)細(xi)胞(bao)，對外力(li)沖(chong)擊的耐(nai)受性(xing)較(jiao)視(shi)網(wang)膜(mo)差，當眼球(qiu)受到(dao)從前面來(lai)的外力(li)的沖(chong)擊作(zuo)用通(tong)過玻璃(li)體(ti)傳到後極部(bu)時(shi)，堅(jian)硬的鞏膜在其外(wai)面又(you)有(you)抵抗作用，使(shi)脈絡膜(mo)在內外(wai)兩種(zhong)作用(yong)夾攻(gong)下(xia)而(er)發(fa)生破裂(lie)和(he)出血。脈(mai)絡(luo)膜呈(cheng)暗(an)褐(he)色(se)，圍繞視神(shen)經(jing)乳(ru)頭部有(you)照膜，為(wei)青(qing)綠(lv)色(se)帶(dai)金(jin)屬(shu)光(guang)澤的三角(jiao)形區(qu)。脈(mai)絡(luo)膜(mo)是眼球(qiu)中(zhong)膜(mo)的後2/3處的薄膜(mo)，由纖維組(zu)織(zhi)、小(xiao)血(xue)管和(he)毛細(xi)血管(guan)組(zu)成，軟而(er)薄，棕(zong)紅(hong)色(se)，在(zai)鞏膜和(he)視網(wang)膜(mo)之(zhi)間，續(xu)連(lian)於睫(jie)狀(zhuang)體(ti)後(hou)方(fang)。脈絡(luo)膜的血循(xun)環(huan)營(ying)養(yang)視網(wang)膜(mo)外層，其(qi)含(han)有(you)的豐富(fu)色(se)素(su)起(qi)遮(zhe)光暗房(fang)作用(yong)。主(zhu)要功能是營養視(shi)網(wang)膜(mo)外層及玻璃(li)體(ti)，並有(you)遮光(guang)作用(yong)，使反射(she)的物象(xiang)清楚。同時(shi)對(dui)視覺(jiao)系統起(qi)保(bao)護作用，對(dui)整(zheng)個(ge)視(shi)覺(jiao)神(shen)經(jing)有(you)調(tiao)節作用。續(xu)連(lian)於睫(jie)狀(zhuang)體(ti)後(hou)方(fang)，含(han)豐富的血管(guan)和(he)色(se)素(su)細(xi)胞(bao)，有(you)營養(yang)和(he)遮光(guang)作用(yong)。
方(fang)法(fa)簡介：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分離的人脈(mai)絡膜微(wei)血管(guan)內皮采用膠(jiao)原酶(mei)-中(zhong)性(xing)dan白(bai)酶混合(he)消化(hua)法(fa)結合(he)密(mi)度梯(ti)度離(li)心法(fa)、最(zui)後(hou)通過內皮細(xi)胞(bao)專用(yong)培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)篩選制備(bei)而(er)來(lai)，細胞(bao)總量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分離的人脈(mai)絡膜微(wei)血管(guan)內皮經(jing)CD31免(mian)疫(yi)熒光鑒定，純(chun)度可(ke)達(da)90%以上，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌、酵母和(he)真(zhen)菌等。

包(bao)被條件(jian) PLL（0.1mg/ml），明(ming)膠(jiao)（0.1%）

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生長添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次

生長特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 內皮細(xi)胞(bao)樣

傳代特(te)性(xing) 可(ke)傳2-3代(dai)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌的培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管、離心(xin)管、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等，並進(jin)行高壓滅(mie)菌或(huo)其他合(he)適的消毒處理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準備(bei)：配(pei)制或(huo)購買(mai)合(he)適的培(pei)養(yang)基、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙抗等試劑(ji)，確保(bao)其無(wu)菌且在有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源準備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求，選擇(ze)合(he)適的動(dong)物並進(jin)行相應(ying)的麻醉(zui)或(huo)處死，獲取所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有(you)的組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材與處理(li)

1. 取材：在(zai)無(wu)菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取出目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並去除多余(yu)的脂肪(fang)、結締組(zu)織(zhi)等(deng)非目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出的組(zu)織(zhi)用(yong)預冷的無(wu)菌PBS沖(chong)洗數(shu)次，以去(qu)除血(xue)液和(he)雜(za)質。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以便後續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有(you)適量消化(hua)酶(mei)的離心(xin)管中，在37℃恒溫搖(yao)床或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化(hua)壹(yi)段時間。期(qi)間可(ke)輕輕搖(yao)晃離心(xin)管(guan)，使消化(hua)更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被消化(hua)成單細胞懸(xuan)液或(huo)小細(xi)胞(bao)團時(shi)，加入(ru)含(han)血清的培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾與離心(xin)：用(yong)細胞篩(shai)過濾細胞懸液，去(qu)除未(wei)消化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液以(yi)適當的轉速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與檢測(ce)

1. 日常(chang)觀察(cha)：每天用倒置顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形態、生長狀(zhuang)態、密度(du)等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異(yi)常(chang)，及時采取相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與活力(li)檢測(ce)：在需(xu)要時，可(ke)采用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對細(xi)胞進(jin)行計(ji)數(shu)和(he)活力(li)檢測(ce)，以了(le)解細胞的生長情(qing)況(kuang)和(he)健康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材與分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織(zhi)取材後(hou)需(xu)立即處理(li)，避免長(chang)時間暴(bao)露於室溫或(huo)非營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免過度消化(hua)導(dao)致細胞損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培(pei)養(yang)條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或(huo)特(te)定生長因(yin)子(zi)的培(pei)養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需(xu)添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁(fan)更換培(pei)養(yang)基品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力(li)較弱(ruo)，可(ke)能需要包(bao)被培(pei)養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原蛋白(bai)、多聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代時密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度匯合(he)會(hui)導(dao)致接觸抑(yi)制和(he)分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無(wu)菌操作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺(tai)操作，使(shi)用壹(yi)次性耗材(cai)，避免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中可(ke)添加雙抗，但長期(qi)使(shi)用(yong)可(ke)能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需及時丟棄細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每天檢查細胞形(xing)態、密度(du)及培(pei)養(yang)基顏色(se)，及時更換培(pei)養(yang)基（通常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細胞變圓、碎片(pian)增(zeng)多）可(ke)能提(ti)示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營養(yang)不(bu)足。

2. 傳代與凍存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分裂次數(shu)有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍存(cun)早期(qi)代(dai)次細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮保(bao)存(cun)。