【概(gai)要描(miao)述】人宮(gong)頸(jing)癌(ai)組織(zhi)源細(xi)胞(bao)公司正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品：L2大(da)鼠(shu)肺(fei)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔滑(hua)膜間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)人胎(tai)盤(pan)絨毛膜細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠(shu)子宮(gong)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)大(da)鼠(shu)子宮(gong)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)兔肝(gan)內(nei)膽管(guan)上(shang)皮細(xi)胞(bao)人子(zi)宮(gong)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠(shu)卵巢上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)大(da)鼠(shu)卵巢上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔成骨細(xi)胞(bao)

本(ben)公(gong)司所(suo)有產(chan)品僅(jin)供(gong)科學(xue)實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其他科(ke)學實(shi)驗外的(de)使用！

人宮(gong)頸(jing)癌(ai)組織(zhi)源分(fen)離(li)自(zi)癌(ai)組織(zhi)；癌(ai)（cancer）是(shi)指(zhi)起(qi)源於上皮組織(zhi)的(de)惡(e)性(xing)腫瘤，是(shi)惡性(xing)腫瘤中最(zui)常(chang)見的(de)壹(yi)類。相對(dui)應(ying)的，起(qi)源於間(jian)葉(ye)組織(zhi)的(de)惡(e)性(xing)腫瘤統(tong)稱為(wei)肉(rou)瘤(liu)。有(you)少數(shu)惡(e)性(xing)腫瘤不(bu)按上(shang)述(shu)原則(ze)命(ming)名，如腎(shen)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤、惡(e)性(xing)畸胎(tai)瘤(liu)等(deng)。壹(yi)般(ban)人們(men)所(suo)說(shuo)的(de)“癌癥(zheng)"習(xi)慣(guan)上(shang)泛(fan)指(zhi)所(suo)有惡(e)性(xing)腫瘤。癌(ai)癥(zheng)具(ju)有(you)細(xi)胞(bao)分(fen)化(hua)和(he)增(zeng)殖(zhi)異(yi)常(chang)、生長(chang)失(shi)去(qu)控(kong)制、浸潤(run)性(xing)和轉(zhuan)移(yi)性(xing)等(deng)生物學(xue)特(te)征，其發生是(shi)壹(yi)個多因子(zi)、多步(bu)驟(zhou)的(de)復(fu)雜過程，分(fen)為(wei)致(zhi)癌、促(cu)癌、演(yan)進三(san)個(ge)過(guo)程，與吸煙(yan)、感染、職業(ye)暴(bao)露(lu)、環(huan)境汙染、不(bu)合理(li)膳(shan)食(shi)、遺(yi)傳因(yin)素(su)密切(qie)相(xiang)關(guan)。癌(ai)細(xi)胞(bao)，是壹(yi)種變(bian)異(yi)的(de)細(xi)胞(bao)，是產(chan)生癌(ai)癥(zheng)的(de)病(bing)源。癌細(xi)胞(bao)與正(zheng)常(chang)細(xi)胞(bao)不(bu)同，有(you)無(wu)限(xian)增(zeng)殖(zhi)、可轉(zhuan)化(hua)和(he)易轉(zhuan)移(yi)三(san)大(da)特點(dian)，能夠(gou)無(wu)限(xian)增(zeng)殖(zhi)並(bing)破(po)壞(huai)正常(chang)的細(xi)胞(bao)組織(zhi)。癌(ai)細(xi)胞(bao)除了分(fen)裂(lie)失(shi)控(kong)外（能進行多極分(fen)裂(lie)），還會局部(bu)侵入(ru)周圍(wei)正(zheng)常(chang)組織(zhi)甚(shen)至(zhi)經(jing)由(you)體內(nei)循(xun)環(huan)系(xi)統(tong)或(huo)淋巴(ba)系(xi)統(tong)轉(zhuan)移(yi)到身(shen)體其他部(bu)分(fen)。分(fen)惡(e)性(xing)和良性(xing)兩種。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)癌(ai)組織(zhi)源采(cai)用膠原酶(mei)消化(hua)、經(jing)Percoll離(li)心(xin)純(chun)化(hua)制備而(er)來，細(xi)胞(bao)總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)人宮(gong)頸(jing)癌(ai)組織(zhi)源經檢測(ce)，純(chun)度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌、酵母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

培(pei)養(yang)基(ji) 含FBS、生長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天換(huan)液壹(yi)次

生長(chang)特(te)性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 梭形(xing)、多角形(xing)

傳代(dai)特(te)性(xing) 可傳5代(dai)左(zuo)右；3代以(yi)內(nei)狀態好(hao)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗器材(cai)準備：準備無菌的培(pei)養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或其他合(he)適的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準備：配制或購買合適(shi)的培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑，確保(bao)其無菌且在有(you)效期內。

3. 實(shi)驗動物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源準備：根據實(shi)驗需求，選擇(ze)合(he)適的動物並(bing)進(jin)行相(xiang)應(ying)的麻(ma)醉或(huo)處(chu)死(si)，獲取(qu)所(suo)需組(zu)織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有的組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取出(chu)目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少對(dui)組織(zhi)的(de)損(sun)傷，並去(qu)除多余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締組(zu)織(zhi)等(deng)非目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的(de)無(wu)菌PBS沖(chong)洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除血液和(he)雜質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以便(bian)後續消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組織(zhi)塊放入(ru)含有適(shi)量(liang)消化(hua)酶(mei)的離(li)心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或培養(yang)箱中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時間(jian)。期間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當(dang)組織(zhi)塊大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化(hua)成單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞(bao)團時(shi)，加入(ru)含血清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終(zhong)止消化(hua)。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心(xin)：用細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織(zhi)碎(sui)片，然後(hou)將(jiang)濾液(ye)以適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收集細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用倒置(zhi)顯微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形(xing)態(tai)、生長(chang)狀(zhuang)態、密度等(deng)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)的變(bian)化(hua)情況，如發現細(xi)胞(bao)汙染(ran)或異常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力(li)檢測(ce)：在(zai)需要時(shi)，可采(cai)用臺盼藍染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力(li)檢測(ce)，以(yi)了解(jie)細(xi)胞(bao)的生長(chang)情況和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需立即處(chu)理(li)，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於室(shi)溫(wen)或非營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使用無菌 PBS 或生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗組織(zhi)，去(qu)除血液、雜質。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據組織(zhi)類(lei)型(xing)選擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度消化(hua)導致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需嚴格(ge)控(kong)制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培(pei)養(yang)條件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使用含血清(qing)或(huo)特定(ding)生長(chang)因(yin)子的(de)培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需添(tian)加(jia)胰島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁更換(huan)培養(yang)基(ji)品牌(pai)或批次，減(jian)少細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能力(li)較弱，可能需要包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋(dan)白、多聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密度建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過(guo)度匯合會導致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無(wu)菌操作

- 全程在超凈(jing)臺操(cao)作，使用壹次性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交叉汙染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗，但長期使用可能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支(zhi)原體(ti)汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及(ji)時(shi)丟棄細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態(tai)監控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密度及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更換(huan)培養(yang)基(ji)（通常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多）可能提示汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍存(cun)早期代次細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液建(jian)議使用 DMSO+血清（或(huo)專用凍存(cun)培養(yang)基(ji)），梯(ti)度降溫(wen)後液氮(dan)保(bao)存(cun)。