【概要描(miao)述】人(ren)腹膜毛細(xi)血管內(nei)皮細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：C1498白(bai)血病RL95-2 (人(ren)子宮內膜癌(ai)細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定正(zheng)確)RWPE-1 (人(ren)正常前列腺上(shang)皮細(xi)胞(bao))Saos-2 (人(ren)成骨(gu)肉(rou)瘤細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定正(zheng)確)SCaBER (人(ren)膀胱(guang)鱗(lin)癌(ai)細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定正(zheng)確)SGC-7901 (人(ren)胃癌(ai)細(xi)胞(bao))SHG-44 (人(ren)膠(jiao)質瘤細(xi)胞(bao))SH-SY5Y [SHSY-5Y] (人(ren)神經母細(xi)胞(bao)瘤細(xi)胞(bao)) (STR鑒(jian)定正(zheng)確)SiH

本(ben)公(gong)司(si)所有(you)產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的(de)使(shi)用！

人(ren)腹膜毛細(xi)血管內(nei)皮分(fen)離自腹膜組(zu)織(zhi)；腹膜是存(cun)在(zai)於(yu)高等脊椎動物(wu)腹腔(qiang)中(zhong)的(de)壹層(ceng)黏(nian)膜，主要(yao)由(you)間(jian)皮細(xi)胞(bao)和間(jian)質（結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)、纖維(wei)、毛細(xi)血管、淋巴管(guan)）構成，藉(ji)由結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)的(de)支(zhi)持所形成的(de)壹層(ceng)膜狀(zhuang)組(zu)織(zhi)。腹膜包覆大部分(fen)腹(fu)腔(qiang)內(nei)的(de)器官(guan)，能分(fen)泌(mi)黏(nian)液潤(run)濕(shi)臟(zang)器的(de)表(biao)面(mian)，減輕(qing)臟(zang)器間(jian)的(de)摩擦。腹(fu)腔(qiang)臟(zang)器的(de)血液、淋巴和(he)神經(jing)組(zu)織(zhi)經由腹膜(mo)與(yu)外界(jie)相(xiang)連(lian)；腹膜(mo)也具有(you)吸收(shou)撞(zhuang)擊保護(hu)內(nei)臟(zang)的(de)效果(guo)。腹(fu)膜(mo)（peritoneum）為全身面(mian)積最大、配布(bu)最復雜(za)的(de)漿膜(mo)，由(you)皮及(ji)少量結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)構成，薄(bo)而(er)光(guang)滑(hua)，呈(cheng)半透(tou)明狀。襯(chen)於(yu)腹(fu)、盆(pen)腔(qiang)壁內表(biao)面(mian)的(de)腹膜(mo)稱為(wei)壁腹膜(mo)（parietal-peritoneum）或(huo)腹(fu)壁薄(bo)層(ceng)；覆蓋腹(fu)、盆(pen)腔(qiang)器表(biao)面(mian)的(de)部分(fen)稱為(wei)臟(zang)腹(fu)膜(mo)（visceral-peritoneum）腹(fu)膜或(huo)腹(fu)膜(mo)臟(zang)層(ceng)。臟(zang)腹(fu)膜(mo)與(yu)壁腹膜(mo)互相(xiang)延(yan)續(xu)、移(yi)行，共同(tong)圍成不規(gui)則(ze)的(de)潛在(zai)性(xing)腔(qiang)隙(xi)，稱為(wei)腹(fu)膜(mo)腔(qiang)（peritoneal-cavity）。腹(fu)膜腔(qiang)是臟(zang)、壁兩層(ceng)腹膜(mo)之(zhi)間(jian)相互移(yi)行圍成的(de)潛在(zai)性(xing)間(jian)隙(xi)。腹膜腔(qiang)內(nei)有(you)少量漿液，在(zai)臟(zang)器活(huo)動(dong)時可(ke)減(jian)少摩擦。腹(fu)膜(mo)的(de)主要(yao)生(sheng)理功能：①分(fen)泌(mi)功能；②吸收(shou)功能；③再生(sheng)能力(li)；④防禦功能；⑤調理功能。臟(zang)、壁腹膜(mo)都(dou)有(you)豐(feng)富(fu)的(de)毛細(xi)血管，毛細(xi)血管上(shang)有(you)不(bu)同(tong)的(de)孔(kong)徑(jing)；腹膜(mo)的(de)毛細(xi)血管和(he)毛細(xi)血管後(hou)靜(jing)脈是進(jin)行溶(rong)質(zhi)交換(huan)的(de)主要(yao)場所。
方法簡(jian)介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)人(ren)腹膜毛細(xi)血管內(nei)皮采用(yong)膠(jiao)原酶-中性dan白(bai)酶聯(lian)合消化法(fa)結(jie)合化學(xue)試劑抑制(zhi)法、並(bing)通過(guo)內皮細(xi)胞(bao)專用培養基培養(yang)篩(shai)選制(zhi)備而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)人(ren)腹膜毛細(xi)血管內(nei)皮經CD31免疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵(jiao)母和真菌等。

包被條件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠(jiao)（0.1%）

培養基 含FBS、生長(chang)添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率(lv) 每2-3天換液壹次

生長(chang)特性(xing) 貼壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 內皮細(xi)胞(bao)樣

傳代特性(xing) 可傳2-3代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養條件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備(bei)無(wu)菌的(de)培養(yang)皿(min)、培(pei)養瓶、移液管、離心管、手術器械等，並(bing)進(jin)行高壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他合適的(de)消毒(du)處理。

2. 試劑準備(bei)：配制(zhi)或(huo)購買(mai)合適的(de)培養(yang)基、消化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗等試劑，確保其(qi)無(wu)菌且(qie)在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來源準備(bei)：根據(ju)實驗(yan)需求，選擇(ze)合適的(de)動物(wu)並進(jin)行相應(ying)的(de)麻醉(zui)或(huo)處死(si)，獲(huo)取所需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫(ku)中獲取組(zu)織(zhi)。

取材與(yu)處理

1. 取材：在(zai)無(wu)菌條件(jian)下(xia)，迅速(su)取出目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡量減少對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損傷(shang)，並(bing)去(qu)除多余(yu)的(de)脂肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等非(fei)目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出的(de)組(zu)織(zhi)用預冷的(de)無(wu)菌PBS沖洗(xi)數(shu)次，以(yi)去除血液和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離

1. 消化：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊放入含有(you)適量(liang)消(xiao)化酶的(de)離心管中，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化壹(yi)段時間(jian)。期間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管，使(shi)消化更(geng)均勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大部分(fen)被(bei)消化成單細(xi)胞(bao)懸液或(huo)小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入(ru)含血清的(de)培養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過濾與離心：用細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸液，去除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液以適當(dang)的(de)轉速(su)離心，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形態(tai)、生長(chang)狀態、密度等，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的(de)變化情況，如(ru)發現(xian)細(xi)胞(bao)汙染或(huo)異常，及(ji)時采(cai)取相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與活力(li)檢測(ce)：在(zai)需要時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計數(shu)和活力(li)檢測(ce)，以了(le)解細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)情況和健(jian)康狀態(tai)。

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壹、取材與(yu)分(fen)離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材後(hou)需立(li)即處理，避(bi)免長(chang)時間(jian)暴(bao)露(lu)於室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽水沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除血液、雜質(zhi)。

2. 消化酶選擇(ze)

- 根據(ju)組(zu)織(zhi)類型選擇(ze)消(xiao)化酶，避(bi)免過度消化導(dao)致細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化時間(jian)需嚴格控制(zhi)（通常 10-30 分(fen)鐘），可通過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解離狀態。

二、培養(yang)條件(jian)優(you)化

1. 培養基選擇(ze)

- 使(shi)用含血清或(huo)特定生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需添加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻繁更換培養基品牌(pai)或(huo)批(pi)次，減(jian)少細(xi)胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁能力(li)較弱(ruo)，可(ke)能需要包被培養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白、多聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代時密度建(jian)議控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和分(fen)化。

三、汙染控制(zhi)

1. 無(wu)菌操(cao)作(zuo)

- 全程在(zai)超凈(jing)臺操(cao)作(zuo)，使(shi)用壹次性(xing)耗材，避(bi)免交叉(cha)汙染。

- 培養基中可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗，但(dan)長(chang)期使(shi)用可能影響細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定期(qi)檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙染（如(ru) PCR 法），汙染後(hou)需及(ji)時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監控

1. 日常觀察(cha)

- 每天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形態(tai)、密度及(ji)培(pei)養基顏色(se)，及(ji)時更(geng)換(huan)培養(yang)基（通常每 2-3 天換液壹次）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可(ke)能提示(shi)汙染或(huo)營(ying)養(yang)不足。

2. 傳代與(yu)凍存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有(you)限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液建(jian)議使(shi)用 DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培(pei)養(yang)基），梯度降溫(wen)後(hou)液氮保存(cun)。