【概(gai)要(yao)描述】人(ren)腦(nao)靜脈血管內(nei)皮(pi)細胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：OCI-AML3白血病(bing)SU-DHL-4（人(ren)B淋巴(ba)瘤細胞(bao)） (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))NCI-H146 [H146]（人(ren)小細胞(bao)肺(fei)癌(ai)細胞(bao)） (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))HMY-1（人(ren)黑色(se)瘤細胞(bao)）(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))SW620/GFP(人(ren)結腸癌(ai)細胞(bao)(綠(lv)色(se)熒光蛋(dan)白標記）)（STR鑒定(ding)正確(que)）SW620/LUC(人(ren)結腸癌(ai)細胞(bao)（熒(ying)光酶(mei)標記）)（STR鑒定(ding)正確(que)）NALM-6（人(ren)B淋巴(ba)白血病(bing)細胞(bao)

本公司所(suo)有產品(pin)僅(jin)供(gong)科學實(shi)驗(yan)，不(bu)做其(qi)他科學實(shi)驗(yan)外的(de)使用(yong)！

人(ren)腦(nao)靜脈血管內(nei)皮(pi)分離自(zi)腦(nao)靜脈組織(zhi)；與(yu)腦(nao)動脈(mai)相比(bi)，腦(nao)靜脈管壁較(jiao)薄。與(yu)身體(ti)其(qi)他部位(wei)的(de)靜脈不(bu)同，腦(nao)靜脈管壁中沒有靜脈瓣(ban)，靜脈血的回流依賴(lai)高位(wei)的(de)勢(shi)能(neng)。腦(nao)靜脈血的回流路(lu)徑(jing)可(ke)以歸(gui)納(na)為(wei)：大(da)部(bu)腦(nao)靜脈血經腦(nao)深部(bu)靜脈和腦(nao)血竇(dou)流入頸內(nei)靜脈醫(yi)|學教(jiao)育(yu)網搜集整理；小部腦(nao)靜脈血經眼(yan)部翼(yi)狀靜脈叢，進入(ru)靜脈導血管(guan)再到頭(tou)皮(pi)，最(zui)後流入椎(zhui)管(guan)中的椎(zhui)旁靜脈系(xi)統。腦(nao)靜脈系(xi)統有大量(liang)交(jiao)通枝(zhi)靜脈叢，即(ji)使兩(liang)側(ce)頸內(nei)靜脈都(dou)被(bei)阻(zu)塞(sai)，大(da)腦(nao)靜脈血仍可(ke)經椎(zhui)靜脈和頸外靜脈系(xi)統完(wan)成(cheng)其(qi)回流。腦(nao)靜脈血管內(nei)皮(pi)細胞(bao)的(de)主要(yao)功(gong)能(neng)是(shi)維(wei)持(chi)血管(guan)內外的(de)動態平(ping)衡，合成(cheng)和分泌細胞(bao)因子和介質(zhi)參(can)與(yu)免疫反應，維(wei)持(chi)凝血和(he)纖(xian)溶(rong)的動態平(ping)衡。
方(fang)法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分離的人(ren)腦(nao)靜脈血管內(nei)皮(pi)采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白酶-膠(jiao)原酶聯(lian)合消(xiao)化法結合差速貼壁法(fa)、並通(tong)過內皮細胞(bao)專(zhuan)用(yong)培養(yang)基(ji)培養(yang)篩選制備而(er)來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分離的人(ren)腦(nao)靜脈血管內(nei)皮(pi)經CD31免疫熒光鑒(jian)定，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以上，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌(jun)、酵母(mu)和真菌等。

包(bao)被(bei)條件 PLL（0.1mg/ml），明膠(jiao)（0.1%）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特(te)性(xing) 貼壁

細胞(bao)形態 內(nei)皮(pi)細胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳2-3代(dai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養(yang)條件 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗(yan)器材(cai)準備：準備無菌的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器(qi)械(xie)等，並(bing)進行(xing)高壓滅(mie)菌或其(qi)他合適(shi)的消毒處理。

2. 試(shi)劑準備：配制或購(gou)買合適(shi)的培養(yang)基(ji)、消化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試劑，確保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有效期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動物或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根據實(shi)驗(yan)需求，選擇合適(shi)的動物並進行(xing)相應(ying)的麻(ma)醉或處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組織(zhi)；或從(cong)已(yi)有的組織(zhi)樣(yang)本庫中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌條件下(xia)，迅速取(qu)出(chu)目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少對組織(zhi)的(de)損傷(shang)，並(bing)去除(chu)多(duo)余的脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織(zhi)用(yong)預冷的無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數(shu)次(ci)，以去除(chu)血(xue)液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的小塊，以便(bian)後續消(xiao)化。

細胞(bao)分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入(ru)含(han)有適量(liang)消化酶的離心管(guan)中，在37℃恒溫(wen)搖床或培養(yang)箱中消化壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間可(ke)輕輕搖晃離(li)心管(guan)，使消(xiao)化更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化成單細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入含血清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與離心：用(yong)細胞(bao)篩過濾細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未消化的組織(zhi)碎片(pian)，然後將(jiang)濾液以適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心，收集細胞(bao)沈(chen)澱。

細胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)觀察(cha)細胞(bao)的(de)形態、生(sheng)長(chang)狀態、密(mi)度(du)等(deng)，記錄細胞(bao)的(de)變(bian)化情況，如(ru)發(fa)現細胞(bao)汙(wu)染(ran)或異(yi)常(chang)，及時(shi)采(cai)取(qu)相應(ying)措施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與活力檢測(ce)：在(zai)需要時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等方法對(dui)細胞(bao)進行(xing)計(ji)數和活力檢測(ce)，以了(le)解細胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情況和健(jian)康(kang)狀態。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分離

1. 快速操作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需立(li)即(ji)處(chu)理，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽水(shui)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去除(chu)血(xue)液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選擇消(xiao)化酶，避免過度(du)消(xiao)化導致(zhi)細胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通(tong)常 10-30 分鐘），可通過(guo)顯微鏡(jing)觀察(cha)細胞(bao)解(jie)離(li)狀態。

二(er)、培養(yang)條件優化

1. 培養(yang)基(ji)選擇

- 使用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或特(te)定生(sheng)長(chang)因子的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞(bao)需(xu)添(tian)加胰島素(su)、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁(fan)更(geng)換培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁能(neng)力較弱，可能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋白、多聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會(hui)導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制和(he)分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超凈臺操作，使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗材(cai)，避免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可添(tian)加雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影響細胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後需及時(shi)丟(diu)棄細胞(bao)。

四(si)、狀態監控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢查細胞(bao)形態、密(mi)度(du)及培養(yang)基(ji)顏色(se)，及時(shi)更(geng)換培養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天換液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示汙(wu)染(ran)或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂次(ci)數有限（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍(dong)存早期(qi)代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存培養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後液氮(dan)保(bao)存。