【概(gai)要描(miao)述】人(ren)椎間盤(pan)髓(sui)核細(xi)胞公(gong)司正在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：Kasumi-1白(bai)血(xue)病(bing)Hep B1.2 (人肝癌細(xi)胞(bao))HFF-1 (人(ren)包皮(pi)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞)hFOB 1.19 (人SV40轉(zhuan)染(ran)成(cheng)骨細胞(bao)) (STR鑒定正確)HFSF [HFSF-PI3] (人胚(pei)胎眼鞏膜(mo)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞)HFT-8810 (人胎兒細(xi)胞株)HGF-1 (人牙齦(yin)成(cheng)纖維細胞)HHCC (人(ren)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞(bao))HKC (人(ren)腎(shen)小(xiao)管(guan)上皮(pi)細(xi)胞)HLF-a (人(ren)肺細胞)

本(ben)公(gong)司所(suo)有產品僅供(gong)科(ke)學(xue)實驗，不做其他科學(xue)實驗外的(de)使用(yong)！

人椎間盤(pan)髓(sui)核分離(li)椎間盤(pan)組織(zhi)；椎間盤(pan)是位(wei)於(yu)脊(ji)柱兩(liang)椎體之(zhi)間(jian)，分為中(zhong)央(yang)部的(de)髓(sui)核，富(fu)於(yu)彈(dan)性的(de)膠(jiao)狀(zhuang)物質；周圍部的(de)纖(xian)維(wei)環(huan)，由(you)多層(ceng)纖維(wei)軟骨環按(an)同心圓(yuan)排列(lie)。上下(xia)有軟骨板，是(shi)透明(ming)軟骨復蓋於(yu)椎體上，下(xia)面(mian)骺(hou)環中(zhong)間(jian)的(de)骨面(mian)。上下(xia)的(de)軟骨板與(yu)纖維(wei)環(huan)壹(yi)起(qi)將(jiang)髓(sui)核密(mi)封起(qi)來(lai)。纖(xian)維環由膠(jiao)原(yuan)纖(xian)維(wei)束(shu)的(de)纖(xian)維(wei)軟骨構成(cheng)，位於(yu)髓(sui)核的(de)四周(zhou)。纖維(wei)環的(de)纖(xian)維(wei)束(shu)相互(hu)斜(xie)行交叉(cha)重疊(die)，使纖(xian)維環成(cheng)為堅實的(de)組(zu)織(zhi)，能承(cheng)受(shou)較大(da)的(de)彎曲(qu)和扭轉(zhuan)負荷(he)。髓(sui)核，是(shi)乳(ru)白(bai)色半(ban)透明(ming)膠狀(zhuang)體，富於(yu)彈(dan)性，為椎間盤(pan)結構(gou)的(de)壹(yi)部分，位(wei)於(yu)兩(liang)軟骨板與(yu)纖維(wei)環(huan)之(zhi)間(jian)。由(you)縱(zong)橫交錯(cuo)的(de)纖(xian)維(wei)網(wang)狀(zhuang)結構(gou)即(ji)軟骨細胞(bao)和蛋白(bai)多(duo)糖黏(nian)液(ye)樣(yang)基(ji)質構成(cheng)的(de)彈(dan)性(xing)膠(jiao)凍物質。嬰(ying)幼兒(er)時(shi)期(qi)的(de)髓(sui)核含(han)水(shui)量(liang)為80%-90%，即使到了老(lao)年(nian)，其(qi)含(han)水(shui)量(liang)也在70%上下(xia)。髓(sui)核在出(chu)生(sheng)時(shi)體積大(da)而松(song)散，位於(yu)椎間盤(pan)的(de)中(zhong)央(yang)，至(zhi)成年時(shi)位置(zhi)移至(zhi)椎間盤(pan)的(de)中(zhong)後(hou)部；在成年以(yi)前(qian)構成(cheng)髓(sui)核的(de)主(zhu)要物質是大(da)量(liang)蛋白(bai)多(duo)糖復合體、膠原(yuan)纖(xian)維(wei)和纖維(wei)軟骨，隨著年齡的(de)增(zeng)長(chang)，髓(sui)核中(zhong)的(de)蛋白(bai)多(duo)糖解聚(ju)增(zeng)多(duo)，水(shui)分逐漸(jian)減(jian)少，膠原(yuan)增(zeng)粗並逐漸(jian)被纖維軟骨所(suo)替(ti)代(dai)。
方(fang)法簡介(jie)：

公(gong)司實驗室(shi)分離(li)的(de)人(ren)椎間盤(pan)髓(sui)核采用(yong)膠(jiao)原(yuan)酶(mei)-中(zhong)性(xing)dan白(bai)酶(mei)混(hun)合消化(hua)法並結合軟骨細胞(bao)專用(yong)培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)篩(shai)選制備而來(lai)，細(xi)胞總(zong)量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實驗室(shi)分離(li)的(de)人(ren)椎間盤(pan)髓(sui)核經(jing)Ⅱ型膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒定，純度(du)可(ke)達(da)90%以(yi)上，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yang)基 含(han)FBS、生長(chang)添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率 每3-4天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生長(chang)特(te)性 貼壁(bi)

細胞(bao)形態 梭形、多角(jiao)形

傳代特性 可(ke)傳5代左(zuo)右；3代以(yi)內(nei)狀(zhuang)態

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養(yang)條件(jian) 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實驗器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶、移液(ye)管(guan)、離(li)心管、手術(shu)器械等(deng)，並進行高壓滅菌或(huo)其他合適的(de)消(xiao)毒(du)處理。

2. 試劑(ji)準(zhun)備：配制或(huo)購(gou)買合適的(de)培(pei)養(yang)基、消(xiao)化酶（如、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛血(xue)清、雙抗(kang)等試劑(ji)，確保(bao)其無(wu)菌且在有效期(qi)內(nei)。

3. 實驗動(dong)物或(huo)組織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根據(ju)實驗需求，選擇合適的(de)動(dong)物並進行相應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處死(si)，獲取(qu)所(suo)需組織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的(de)組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫中(zhong)獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與處(chu)理

1. 取材(cai)：在無菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少對組織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的(de)無(wu)菌PBS沖洗數次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和雜質。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消(xiao)化。

細胞(bao)分離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織(zhi)塊放(fang)入含(han)有適量(liang)消(xiao)化酶的(de)離(li)心管中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管，使消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當組(zu)織(zhi)塊大(da)部分被(bei)消化成(cheng)單(dan)細胞懸液(ye)或(huo)小細(xi)胞團(tuan)時(shi)，加(jia)入含(han)血(xue)清的(de)培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與離心：用細胞篩(shai)過濾(lv)細胞懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收集細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢(jian)測

1. 日常(chang)觀察：每(mei)天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)的(de)形態、生長(chang)狀(zhuang)態、密度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況，如發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染(ran)或(huo)異常(chang)，及時(shi)采取(qu)相應(ying)措施(shi)。
2. 細胞(bao)計數與活(huo)力檢(jian)測：在需要時(shi)，可(ke)采用(yong)臺盼藍(lan)染(ran)色等(deng)方(fang)法對細(xi)胞(bao)進行計數和活力檢(jian)測，以(yi)了解細(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況和健康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材(cai)與分離(li)

1. 快(kuai)速操作

- 組織(zhi)取材(cai)後需立(li)即(ji)處(chu)理，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或(huo)生理鹽水(shui)沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇

- 根據(ju)組織(zhi)類(lei)型(xing)選擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度(du)消(xiao)化導(dao)致細胞損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間需嚴格(ge)控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通過顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培(pei)養(yang)條件(jian)優化

1. 培養(yang)基選(xuan)擇

- 使用(yong)含(han)血(xue)清或(huo)特定生長(chang)因(yin)子的(de)培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞需添加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基品牌(pai)或(huo)批(pi)次(ci)，減(jian)少細胞適應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較弱，可(ke)能需要包(bao)被培(pei)養(yang)皿(min)（如膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳代時(shi)密度(du)建(jian)議控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會(hui)導致接(jie)觸抑(yi)制和分化(hua)。

三、汙染(ran)控(kong)制

1. 無菌操作

- 全程在超凈臺操作，使用(yong)壹次(ci)性耗材(cai)，避免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基中(zhong)可(ke)添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長(chang)期(qi)使用(yong)可(ke)能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支原(yuan)體檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測支原(yuan)體汙染(ran)（如 PCR 法），汙染(ran)後(hou)需及時(shi)丟棄細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日常(chang)觀察

- 每天(tian)檢(jian)查細胞形態、密度(du)及(ji)培養(yang)基顏(yan)色，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基（通(tong)常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形態（如細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙染(ran)或(huo)營養(yang)不足(zu)。

2. 傳代與凍存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍存早期(qi)代次(ci)細胞(bao)。

- 凍存液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專用(yong)凍存培養(yang)基），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮(dan)保(bao)存。