【概(gai)要描述】人關(guan)節(jie)軟骨(gu)細(xi)胞公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產(chan)品：Jurkat, Clone E6-1白(bai)血(xue)病(bing)CEM/C1 (人(ren)急(ji)性淋(lin)巴(ba)細(xi)胞白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))Chang liver (人(ren)張(zhang)氏(shi)肝細(xi)胞) (Hela汙(wu)染細(xi)胞系)Detroit 562 (人咽(yan)頭癌(ai)胸水轉(zhuan)移(yi)細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))Dami (人(ren)巨(ju)核(he)細(xi)胞白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞) (HEL汙(wu)染細(xi)胞系)EB-3 (人Burkitt's淋(lin)巴(ba)瘤細(xi)胞)(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))FC33 (

人關(guan)節(jie)軟骨(gu)分離(li)自(zi)關節(jie)軟(ruan)骨(gu)組織；關(guan)節(jie)軟骨(gu)屬(shu)於(yu)透明(ming)軟(ruan)骨(gu)，表(biao)面光滑、呈(cheng)淡(dan)藍色(se)、有光澤，它是由(you)壹種(zhong)特(te)殊的叫(jiao)做(zuo)致密(mi)結(jie)締組(zu)織的膠原(yuan)纖維(wei)構(gou)成的基(ji)本(ben)框架，這(zhe)種(zhong)框(kuang)架呈(cheng)半(ban)環形，類似(si)拱(gong)形(xing)球門，其(qi)底(di)端(duan)緊緊附(fu)著在下(xia)面的骨(gu)質上(shang)，上(shang)端(duan)朝向關(guan)節面，這種(zhong)結(jie)構(gou)使(shi)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨(gu)緊緊(jin)與(yu)骨(gu)結合起(qi)來(lai)而不(bu)會(hui)掉下(xia)來(lai)，同(tong)時當(dang)受到壓力時候(hou)，還(hai)可(ke)以有少許的變形(xing)，起(qi)到緩(huan)沖壓力的作(zuo)用。在這(zhe)些(xie)纖維(wei)之(zhi)間，散在分(fen)布(bu)著軟骨(gu)細(xi)胞，軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞由(you)淺(qian)層向深(shen)層逐(zhu)漸(jian)由(you)扁(bian)平樣(yang)至(zhi)橢圓或(huo)圓形的細(xi)胞組(zu)成，這(zhe)些(xie)軟骨(gu)細(xi)胞維(wei)持(chi)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨(gu)的正常(chang)代謝(xie)。關(guan)節(jie)軟(ruan)骨(gu)沒有神經支(zhi)配(pei)，也沒有血(xue)管，其營(ying)養成分(fen)必須從關(guan)節(jie)液(ye)中(zhong)取(qu)得，而(er)其(qi)代謝(xie)廢(fei)物也(ye)必須排至關節(jie)液(ye)中(zhong)，關(guan)節(jie)軟(ruan)骨(gu)的這種(zhong)營(ying)養代謝(xie)必須通過(guo)關節(jie)運動(dong)，使(shi)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨(gu)不斷(duan)的受到壓力刺(ci)激才(cai)行，所(suo)以(yi)關節運動(dong)對於(yu)維(wei)持(chi)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨(gu)的正常(chang)結(jie)構(gou)起(qi)重(zhong)要(yao)的作(zuo)用。關(guan)節軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞位(wei)於(yu)關(guan)節軟(ruan)骨(gu)陷窩內。幼稚(zhi)的關節(jie)軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞位(wei)於(yu)關(guan)節軟(ruan)骨(gu)組織的表(biao)層，單(dan)個分布(bu)、體積較小、呈(cheng)橢圓(yuan)形(xing)，長軸(zhou)與(yu)關節(jie)軟(ruan)骨(gu)表(biao)面平行，越向(xiang)深(shen)層的關節(jie)軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞體(ti)積之(zhi)間增大(da)呈(cheng)圓形(xing)，細(xi)胞核(he)圓(yuan)形(xing)或(huo)卵(luan)圓(yuan)形、染色(se)淺(qian)，細(xi)胞質(zhi)弱(ruo)嗜(shi)堿(jian)性，常(chang)見數量(liang)不(bu)壹的脂滴。成熟(shu)的關節(jie)軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞多(duo)2-8個成群(qun)分(fen)布於(yu)關節軟骨(gu)陷窩內，這些關節軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞由(you)同(tong)壹個母細(xi)胞分(fen)裂增殖而成，稱(cheng)為(wei)同(tong)源(yuan)細(xi)胞群(qun)。電鏡(jing)下(xia)，關節(jie)軟骨(gu)細(xi)胞有突(tu)起(qi)和(he)皺(zhou)褶，細(xi)胞質(zhi)內有大(da)量(liang)的粗面內質網和發達的高爾(er)基(ji)復合體(ti)及(ji)少量(liang)的線粒體。在組(zu)織切(qie)片(pian)中(zhong)，關(guan)節(jie)軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞收(shou)縮為(wei)不(bu)規(gui)則(ze)形，在軟(ruan)骨(gu)囊和(he)細(xi)胞之(zhi)間出現(xian)較大(da)的腔隙(xi)。體外(wai)培養的關節(jie)軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞對於(yu)研(yan)究其生理(li)功(gong)能、藥物作(zuo)用以(yi)及(ji)各(ge)種(zhong)致病(bing)因(yin)素(su)作(zuo)用下(xia)的病理(li)生理(li)改(gai)變(bian)具(ju)重要意義(yi)。
方法簡(jian)介：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的人關(guan)節(jie)軟骨(gu)采(cai)用膠原(yuan)酶(mei)聯合中(zhong)性(xing)dan白(bai)酶(mei)消(xiao)化制備(bei)而來(lai)，細(xi)胞總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的人關(guan)節(jie)軟骨(gu)經Ⅱ型(xing)膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)免(mian)疫(yi)熒光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達90%以上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母和真菌等(deng)。

本(ben)公(gong)司所(suo)有產(chan)品僅供(gong)科(ke)學實驗(yan)，不做(zuo)其他(ta)科(ke)學實驗(yan)外的使(shi)用！

培養基(ji) 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率 每3-4天(tian)換液(ye)壹次(ci)

生長特(te)性 貼壁(bi)

細(xi)胞形(xing)態(tai) 梭(suo)形(xing)、多(duo)角形(xing)

傳代特(te)性 可(ke)傳5代左右；3代以(yi)內狀態

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養條(tiao)件 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌的培養皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離心管、手術器械等(deng)，並(bing)進行高壓滅菌或(huo)其他(ta)合適(shi)的消毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配制或(huo)購(gou)買(mai)合適(shi)的培養基(ji)、消化酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血清、雙抗等(deng)試(shi)劑，確(que)保(bao)其無(wu)菌且(qie)在有效期內。

3. 實驗(yan)動(dong)物或(huo)組織來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求，選擇合適(shi)的動(dong)物並(bing)進行相應(ying)的麻(ma)醉或(huo)處死，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組織；或(huo)從已(yi)有的組織樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取材與(yu)處理(li)

1. 取材：在無(wu)菌條件下(xia)，迅速取(qu)出(chu)目(mu)標組(zu)織，盡(jin)量(liang)減(jian)少對組(zu)織的損傷(shang)，並(bing)去除(chu)多(duo)余的脂肪、結締組(zu)織等(deng)非(fei)目(mu)的組織。

2. 清洗：將取出(chu)的組織用預(yu)冷(leng)的無菌PBS沖洗數次(ci)，以(yi)去除(chu)血液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小塊，以(yi)便後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組織塊(kuai)放入含(han)有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶(mei)的離心管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養箱中(zhong)消(xiao)化壹段時間。期間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管，使(shi)消(xiao)化更(geng)均(jun)勻。

2. 終止消化：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大(da)部(bu)分被(bei)消化成單(dan)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小細(xi)胞團(tuan)時，加入含(han)血(xue)清的培養基(ji)終止消化。

3. 過(guo)濾與(yu)離心：用細(xi)胞篩過(guo)濾細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未消(xiao)化的組織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以適當的轉(zhuan)速離(li)心，收(shou)集細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞的形態(tai)、生長狀態、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞的變化情(qing)況，如(ru)發現細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異常，及(ji)時采(cai)取相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計(ji)數(shu)與(yu)活力(li)檢(jian)測(ce)：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍染色(se)等(deng)方法對細(xi)胞進行計數(shu)和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了解細(xi)胞的生長情況和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材與(yu)分離(li)

1. 快速操作(zuo)

- 組織取(qu)材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理(li)，避(bi)免(mian)長(chang)時間暴露於室(shi)溫(wen)或(huo)非營養(yang)環境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水(shui)沖洗組織，去除(chu)血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織類(lei)型(xing)選擇(ze)消(xiao)化酶(mei)，避(bi)免(mian)過(guo)度消(xiao)化導致細(xi)胞損傷(shang)。

- 消化時間需嚴(yan)格控(kong)制（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞解離狀態。

二、培養條(tiao)件優化

1. 培養基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血清或(huo)特(te)定(ding)生長因子的培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞需(xu)添加胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更(geng)換(huan)培養基(ji)品牌(pai)或(huo)批(pi)次(ci)，減(jian)少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代

- 原(yuan)代細(xi)胞貼(tie)壁(bi)能力(li)較弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要包(bao)被(bei)培養皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代時密(mi)度(du)建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過(guo)度匯合會(hui)導致接觸抑制和分化。

三、汙(wu)染控(kong)制

1. 無菌操作(zuo)

- 全(quan)程在超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使(shi)用壹次(ci)性(xing)耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培養基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙抗，但(dan)長期使(shi)用可(ke)能影(ying)響(xiang)細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後(hou)需(xu)及(ji)時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每天(tian)檢查(zha)細(xi)胞形(xing)態(tai)、密(mi)度及(ji)培養基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時更(geng)換(huan)培養基(ji)（通常(chang)每 2-3 天(tian)換液(ye)壹次(ci)）。

- 異常形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙(wu)染或(huo)營養不(bu)足(zu)。

2. 傳代與(yu)凍存

- 原(yuan)代細(xi)胞分(fen)裂次(ci)數(shu)有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍(dong)存早(zao)期代次(ci)細(xi)胞。

- 凍存液(ye)建議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或(huo)專(zhuan)用凍(dong)存培養基(ji)），梯度(du)降溫後(hou)液(ye)氮(dan)保(bao)存。