【概(gai)要描述(shu)】人腎(shen)實(shi)質細(xi)胞公(gong)司(si)正(zheng)在出售的產(chan)品：ZR-75-1+luc人乳腺癌(ai)細(xi)胞熒(ying)光酶標記(ji)人皮(pi)膚(fu)基底(di)細胞(bao)癌TE354.T(STR鑒定正確)小(xiao)鼠肺(fei)癌細(xi)胞(bao)帶熒(ying)光酶 LLC+LUC人惡性(xing)黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)A375 (STR鑒定正確)人腦(nao)膠(jiao)質瘤(liu)細胞(bao)Hs 683(STR鑒定正確大鼠肝(gan)癌(ai)細胞(bao)CBRH7919（種屬(shu)鑒定）人胚腎(shen)細(xi)胞2V6.11(STR鑒定正確)SV40T轉(zhuan)化人臍(qi)靜(jing)脈內(nei)皮(pi)細胞PUMC-HUVEC-T1(STR鑒定正確)

人腎(shen)實(shi)質分(fen)離自(zi)腎組(zu)織(zhi)；腎(shen)臟(zang)是(shi)機體的重(zhong)要器官，它的基(ji)本功(gong)能(neng)是生(sheng)成(cheng)尿液，借(jie)以清(qing)除(chu)體內(nei)代謝產(chan)物(wu)及某(mou)些廢(fei)物(wu)、毒物(wu)，同時經(jing)重(zhong)吸收(shou)功(gong)能(neng)保留(liu)水(shui)份及其(qi)他有(you)用(yong)物(wu)質，如葡(pu)萄(tao)糖(tang)、蛋(dan)白(bai)質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳(tan)suan氫鈉(na)等(deng)，以調(tiao)節水、電解(jie)質平(ping)衡及維(wei)護(hu)酸堿平衡。腎臟(zang)同時還(hai)有(you)內(nei)分(fen)泌功(gong)能(neng)，生(sheng)成(cheng)腎素、促(cu)紅細胞生(sheng)成(cheng)素、活(huo)性(xing)維(wei)生(sheng)D3、前(qian)列腺素(su)、激(ji)肽(tai)等(deng)，又為機體部(bu)分(fen)內(nei)分(fen)泌激素的(de)降(jiang)解(jie)場所和腎外激素(su)的靶(ba)器官。腎臟(zang)的這(zhe)些功(gong)能(neng)，保證(zheng)了(le)機(ji)體內(nei)環境(jing)的(de)穩定，使(shi)新(xin)陳代謝得(de)以正(zheng)常(chang)進行。腎臟移植(zhi)是臨(lin)床(chuang)上(shang)治(zhi)療慢性(xing)腎(shen)功(gong)能(neng)衰竭的有(you)效方(fang)法(fa)，然而(er)這(zhe)種方(fang)法(fa)受到供體腎短缺(que)的(de)限制。腎細胞移植(zhi)可部(bu)分(fen)解(jie)決供(gong)體腎短缺(que)的(de)問題(ti)，是(shi)未(wei)來可以替代腎臟(zang)移植(zhi)的有(you)效(xiao)方(fang)法(fa)。因此，體外腎(shen)細(xi)胞(bao)的(de)培(pei)養(yang)受到國(guo)內(nei)外(wai)有關專家(jia)的(de)密(mi)切關(guan)註(zhu)。原(yuan)代腎細(xi)胞作為壹(yi)種常(chang)用(yong)的(de)腎(shen)臟毒理學研(yan)究(jiu)對象(xiang)，其(qi)分(fen)離方(fang)法(fa)主要有機(ji)械(xie)研(yan)磨(mo)分(fen)離法(fa)和酶消化(hua)法(fa)，酶消化(hua)法(fa)因對細胞損(sun)傷小(xiao)、分(fen)離效果(guo)好而(er)優(you)於機(ji)械(xie)研(yan)磨(mo)分(fen)離法(fa)；目前(qian)常(chang)用(yong)的(de)酶消化(hua)法(fa)主要是yi蛋(dan)白酶消化(hua)法(fa)和膠原酶消化(hua)法(fa)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離的人腎(shen)實(shi)質采(cai)用膠(jiao)原酶-yi蛋白(bai)酶混合消(xiao)化(hua)法(fa)結合差速(su)貼壁(bi)法(fa)制備(bei)而(er)來(lai)，細胞(bao)總量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢測(ce)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離的人腎(shen)實(shi)質經(jing)檢(jian)測，純(chun)度可達90%以上(shang)，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細菌(jun)、酵(jiao)母和真菌等(deng)。

本公司(si)所有(you)產(chan)品僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的(de)使(shi)用(yong)！

包被(bei)條件 鼠尾(wei)膠原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態(tai) 成纖維細胞樣(yang)

傳代特性(xing) 可傳3代左(zuo)右

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實(shi)驗(yan)器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管、離心管、手術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進行高壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其他(ta)合適的消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配制或(huo)購(gou)買(mai)合適的培(pei)養(yang)基、消(xiao)化(hua)酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等(deng)）、胎(tai)牛血清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試劑，確保其(qi)無(wu)菌且(qie)在有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適的動(dong)物(wu)並(bing)進行相應的(de)麻醉或(huo)處死(si)，獲取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫中獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在無菌條件下(xia)，迅速(su)取出(chu)目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷，並(bing)去除(chu)多余的(de)脂肪(fang)、結締組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將取(qu)出的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗數次，以去除(chu)血液(ye)和雜質。

3. 剪(jian)切(qie)：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以便後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊放(fang)入含有適量(liang)消化(hua)酶的離心管中，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中消化壹(yi)段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管，使(shi)消(xiao)化更均(jun)勻。

2. 終止消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大部(bu)分(fen)被(bei)消化成單(dan)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)或(huo)小細(xi)胞團(tuan)時，加(jia)入(ru)含血(xue)清(qing)的(de)培養基(ji)終止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與離心：用細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未(wei)消化的組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然後將濾(lv)液以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每天(tian)用(yong)倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細胞的形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態、密(mi)度等(deng)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的(de)變化(hua)情(qing)況，如發現細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相應措施。
2. 細胞計數(shu)與活(huo)力(li)檢(jian)測：在需要時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍染色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對細(xi)胞進行計數和活(huo)力(li)檢(jian)測，以了(le)解(jie)細胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需立(li)即處(chu)理，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或(huo)非營養環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水沖洗組(zu)織(zhi)，去除(chu)血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避免(mian)過(guo)度消化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消化(hua)時間(jian)需嚴(yan)格控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細胞解(jie)離狀態(tai)。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件優(you)化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血清或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因子的(de)培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添加(jia)胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁更換(huan)培(pei)養基(ji)品牌(pai)或(huo)批(pi)次，減(jian)少(shao)細胞(bao)適應壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳代

- 原代細胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力(li)較弱(ruo)，可能(neng)需要包被(bei)培養皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴氨酸）。

- 傳代時密(mi)度建(jian)議(yi)控制在 70%-80%，過(guo)度匯合會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙(wu)染控制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程在超凈臺(tai)操(cao)作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培養(yang)基(ji)中可添加(jia)雙(shuang)抗，但長期(qi)使(shi)用(yong)可能影響(xiang)細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及(ji)時丟(diu)棄細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞形(xing)態(tai)、密(mi)度及培(pei)養(yang)基顏色(se)，及(ji)時更換(huan)培(pei)養基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次）。

- 異常(chang)形(xing)態(tai)（如細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多）可能(neng)提示(shi)汙(wu)染或(huo)營養不足。

2. 傳代與凍(dong)存

- 原代細胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及(ji)時凍(dong)存早期(qi)代次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存培養基(ji)），梯(ti)度降溫(wen)後液氮(dan)保存。