【概要描述】人子宮成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞公(gong)司(si)正(zheng)在出售(shou)的產(chan)品：VCAP人前列腺癌細(xi)胞人(ren)肝癌(ai)細(xi)胞Hep3B(STR鑒定正(zheng)確)小鼠神(shen)經細(xi)胞瘤與(yu)大鼠神(shen)經膠(jiao)質(zhi)瘤之(zhi)融(rong)合細胞 NG108-15 [108CC15]（種(zhong)屬(shu)鑒定）人膀胱移(yi)行(xing)細(xi)胞癌(ai)細胞TCCSUP (STR鑒定正(zheng)確)大鼠成骨(gu)細(xi)胞人(ren)胰腺導管(guan)癌細胞MIA PaCa-2(STR鑒定正(zheng)確)人(ren)宮頸癌(ai)細(xi)胞帶紅色(se)熒光(guang)HELA+RFP(STR鑒定正(zheng)確)大鼠小腸隱窩上(shang)皮細(xi)胞IEC-6（種(zhong)屬(shu)鑒定

本(ben)公(gong)司(si)所有產品僅供(gong)科(ke)學實驗(yan)，不做其他(ta)科(ke)學實驗(yan)外的使(shi)用(yong)！

人子宮成(cheng)纖(xian)維分(fen)離自(zi)子宮組(zu)織(zhi)；子宮是孕育胎(tai)兒(er)的器(qi)官(guan)，位(wei)於盆(pen)腔中部，膀胱與(yu)直腸(chang)之(zhi)間，其位(wei)置(zhi)可(ke)隨膀(pang)胱與(yu)直腸(chang)的充(chong)盈程(cheng)度(du)或體(ti)位而有變(bian)化(hua)。子宮的正(zheng)常位置(zhi)主(zhu)要(yao)依靠子宮諸(zhu)韌(ren)帶、盆(pen)膈、尿(niao)生殖(zhi)膈及會(hui)陰(yin)中心腱等(deng)結構維持，這(zhe)些結構受(shou)損或松弛(chi)時，可以引起(qi)子宮脫(tuo)垂。成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞（Fibroblast）是疏(shu)松結締(di)組(zu)織(zhi)的主(zhu)要(yao)細胞成(cheng)分(fen)，由胚(pei)胎(tai)時期的間充(chong)質(zhi)細胞分(fen)化而來(lai)；成(cheng)纖維細(xi)胞較(jiao)大，輪廓(kuo)清(qing)楚，多(duo)為突(tu)起(qi)的紡(fang)錘形(xing)或星(xing)形(xing)的扁平(ping)狀結(jie)構，其細(xi)胞核呈(cheng)規則的卵(luan)圓(yuan)形(xing)，核仁(ren)大而明顯。成纖(xian)維細(xi)胞功能(neng)活(huo)動旺(wang)盛，細胞質(zhi)嗜(shi)弱堿(jian)性(xing)，具明顯的蛋(dan)白(bai)質(zhi)合成和(he)分(fen)泌活(huo)動，在壹(yi)定(ding)條(tiao)件下，它可(ke)以實現跟纖(xian)維細(xi)胞的互(hu)相轉(zhuan)化；成(cheng)纖維細(xi)胞對(dui)不同程度(du)的細(xi)胞變(bian)性(xing)、壞死和(he)組(zu)織(zhi)缺(que)損的修(xiu)復(fu)有著十(shi)分(fen)重要(yao)的作(zuo)用。剛(gang)分(fen)離的子宮成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞呈(cheng)圓(yuan)形(xing)、折光性(xing)良(liang)好，懸浮(fu)於(yu)培(pei)養(yang)基中(zhong)。30min細(xi)胞貼(tie)壁(bi)，其中(zhong)部分(fen)開始(shi)伸出(chu)偽足(zu)，表現為小的突(tu)起(qi)；6h後細(xi)胞基本(ben)貼(tie)壁(bi)wan全，伸展(zhan)成梭(suo)形(xing)，胞核清(qing)晰，分(fen)布(bu)較(jiao)均勻，散在生長，不聚集(ji)成團(tuan)；細胞生(sheng)長迅(xun)速(su)，5-7天即(ji)呈(cheng)融(rong)合狀態(tai)，細胞排(pai)列緊密(mi)，有的交(jiao)叉重疊生長(chang)，平(ping)坦、胞體(ti)較(jiao)大，細胞質(zhi)透明，細胞核較(jiao)大，呈(cheng)橢(tuo)圓(yuan)形(xing)，顏(yan)色(se)淡(dan)。細胞融(rong)合，並彼(bi)此連接成(cheng)網狀；細胞呈(cheng)突(tu)起(qi)的紡(fang)錘形(xing)或星(xing)形(xing)的扁平(ping)分(fen)布(bu)。子宮成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞的主(zhu)要(yao)特征：①是子宮的重(zhong)要細(xi)胞組(zu)成(cheng)，在體(ti)外易(yi)於(yu)培(pei)養(yang)；②在子宮損傷(shang)後(hou)能修(xiu)復(fu)和(he)重塑(su)子宮；③在子宮炎(yan)癥(zheng)時能有效控(kong)制(zhi)炎癥(zheng)擴(kuo)散。
方法簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室分(fen)離的人(ren)子宮成(cheng)纖(xian)維采用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原(yuan)酶(mei)混合消化(hua)法(fa)結合差速貼(tie)壁(bi)法制備(bei)而來(lai)，細(xi)胞總(zong)量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢測：

公司(si)實驗(yan)室分(fen)離的人(ren)子宮成(cheng)纖(xian)維經Vimentin免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒定，純度(du)可達(da)90%以上(shang)，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等。

培(pei)養(yang)基 含FBS、生長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率(lv) 每2-3天換液(ye)壹(yi)次

生長(chang)特(te)性(xing) 貼壁(bi)

細胞形(xing)態(tai) 成纖(xian)維細(xi)胞樣(yang)

傳代(dai)特(te)性(xing) 可傳(chuan)5代左右(you)；3代(dai)以內(nei)狀態(tai)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養(yang)條件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工作(zuo)

1. 實驗(yan)器(qi)材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌(jun)的培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術器(qi)械(xie)等，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌或其他(ta)合適的消毒處(chu)理。

2. 試劑準備(bei)：配制(zhi)或購買(mai)合適的培(pei)養(yang)基、消化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑，確保其無(wu)菌(jun)且(qie)在有效期內(nei)。

3. 實驗(yan)動物(wu)或組(zu)織(zhi)來(lai)源準備(bei)：根(gen)據(ju)實驗(yan)需(xu)求，選擇(ze)合適的動物(wu)並進行(xing)相應(ying)的麻(ma)醉(zui)或處(chu)死，獲取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或從已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材與處(chu)理

1. 取材：在無(wu)菌(jun)條(tiao)件下，迅(xun)速(su)取出(chu)目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的損傷(shang)，並(bing)去除(chu)多(duo)余的脂肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取出的組(zu)織(zhi)用(yong)預冷(leng)的無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數(shu)次，以去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜質。

3. 剪切：將組(zu)織(zhi)剪成約1 - 2mm³的小塊，以便後續(xu)消化(hua)。

細胞分(fen)離

1. 消化(hua)：將剪碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入含有適量(liang)消化(hua)酶(mei)的離(li)心管(guan)中，在37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化(hua)壹(yi)段時間。期間可(ke)輕(qing)輕搖晃離心管(guan)，使(shi)消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終止消化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部分(fen)被消化(hua)成(cheng)單細胞懸(xuan)液或小細胞團(tuan)時，加入(ru)含血(xue)清(qing)的培(pei)養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。

3. 過濾與離心(xin)：用細胞篩過濾細胞懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然後(hou)將濾液以適(shi)當的轉(zhuan)速離(li)心，收(shou)集(ji)細胞沈(chen)澱(dian)。

細胞觀察與(yu)檢測

1. 日常觀察：每天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)觀察細(xi)胞的形(xing)態(tai)、生長(chang)狀態(tai)、密(mi)度(du)等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的變(bian)化(hua)情況(kuang)，如(ru)發(fa)現細胞汙(wu)染(ran)或異常，及時采取(qu)相應(ying)措施。
2. 細(xi)胞計(ji)數(shu)與活(huo)力檢測：在需(xu)要時，可采用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等方法對(dui)細胞進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力檢測，以了(le)解細胞的生(sheng)長情(qing)況(kuang)和(he)健康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與分(fen)離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後需(xu)立即(ji)處(chu)理，避(bi)免(mian)長(chang)時間暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生理(li)鹽水沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度(du)消化(hua)導(dao)致細(xi)胞損傷(shang)。

- 消化(hua)時間需(xu)嚴格(ge)控(kong)制(zhi)（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過顯微鏡(jing)觀察細(xi)胞解離狀態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條件優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血(xue)清(qing)或特定(ding)生長(chang)因(yin)子的培(pei)養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞需(xu)添(tian)加胰島素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換培(pei)養(yang)基品牌或批次，減少(shao)細(xi)胞適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與傳代(dai)

- 原(yuan)代細(xi)胞貼(tie)壁(bi)能力較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需(xu)要包(bao)被培(pei)養(yang)皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳代(dai)時密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度(du)匯合會(hui)導(dao)致接觸(chu)抑(yi)制(zhi)和(he)分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在超凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗材，避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中(zhong)可(ke)添(tian)加雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影響細胞活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢測

- 定期檢測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後需(xu)及時丟(diu)棄(qi)細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日常觀察

- 每天檢查細(xi)胞形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及培(pei)養(yang)基顏(yan)色(se)，及時更換培(pei)養(yang)基（通(tong)常每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形(xing)態(tai)（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多(duo)）可能(neng)提(ti)示汙(wu)染(ran)或營養(yang)不足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代細(xi)胞分(fen)裂次數(shu)有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍(dong)存早(zao)期代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專用(yong)凍(dong)存培(pei)養(yang)基），梯(ti)度(du)降溫(wen)後液(ye)氮(dan)保存。