【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】人乳腺(xian)上皮細(xi)胞(bao)公(gong)司正(zheng)在(zai)出售的產品：SW48人結(jie)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao)大(da)鼠肝(gan)細胞(bao)瘤(liu)H-4-II-E（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）狗腎惡性組織(zhi)細(xi)胞(bao)增生(sheng)癥細(xi)胞(bao)DH82（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人腦(nao)髓(sui)母細胞(bao)瘤(liu)細胞(bao)D341 Med(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)人非小細胞(bao)肺(fei)癌(ai)細胞(bao)NCI-H2126(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)大鼠皮膚成(cheng)纖(xian)維(wei)樣(yang)細(xi)胞(bao)RS1（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定(ding)）人非小細胞(bao)肺(fei)癌(ai)細胞(bao)NCI-H1650(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)人腎透明細(xi)胞(bao)癌(ai)Caki-1(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)人臍靜(jing)脈(mai)融合細(xi)胞(bao)

人乳腺(xian)上皮分(fen)離(li)自(zi)乳腺(xian)組織(zhi)；乳腺(xian)是(shi)復管(guan)泡(pao)狀(zhuang)皮膚腺(xian)，主(zhu)要(yao)由(you)腺(xian)上皮細(xi)胞(bao)組成(cheng)，並(bing)具有(you)特(te)殊(shu)的泌乳功能(neng)。在(zai)妊(ren)娠期(qi)，導(dao)管(guan)末(mo)梢發(fa)育(yu)成腺(xian)泡(pao)；近(jin)年來的許多(duo)研究都(dou)表(biao)明乳腺(xian)癌(ai)、乳腺(xian)炎(yan)等(deng)的發生都與(yu)乳腺(xian)上皮細(xi)胞(bao)（MEC）有密(mi)切(qie)聯(lian)系(xi)，體(ti)外(wai)分(fen)離(li)培(pei)養MECs即(ji)成為(wei)研究開展的關鍵步(bu)驟(zhou)。乳腺(xian)是(shi)乳房(fang)的腺(xian)體(ti)組織(zhi)，乳腺(xian)由(you)導(dao)管(guan)和(he)腺(xian)泡(pao)組成(cheng)，腺(xian)泡(pao)是(shi)分(fen)泌(mi)乳汁(zhi)的重(zhong)要(yao)部(bu)分(fen)。乳腺(xian)的正(zheng)常(chang)發(fa)育(yu)是(shi)由體(ti)內激(ji)素(su)和(he)局(ju)部(bu)合成(cheng)的生長因(yin)子(zi)共同調控，其中乳腺(xian)表(biao)達(da)的生長因(yin)子(zi)對乳腺(xian)上皮細(xi)胞(bao)的增殖、分(fen)化、雕(diao)亡(wang)產生極(ji)大的影(ying)響。乳腺(xian)上皮分(fen)離(li)自(zi)分(fen)娩(mian)後3-5天(tian)的乳腺(xian)組織(zhi)，為(wei)貼(tie)壁生(sheng)長(chang)型細胞(bao)，呈(cheng)多(duo)角(jiao)形(xing)、圓(yuan)形以及短梭形(xing)；乳腺(xian)上皮細(xi)胞(bao)主(zhu)要(yao)功能(neng)即生(sheng)乳功能(neng)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司實驗室分(fen)離(li)的人乳腺(xian)上皮采(cai)用(yong)yi蛋白酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)混(hun)合消化法結(jie)合差(cha)速(su)貼(tie)壁法(fa)，並(bing)通(tong)過(guo)上皮細(xi)胞(bao)專用培(pei)養基培(pei)養篩(shai)選制備(bei)而來，細(xi)胞(bao)總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實驗室分(fen)離(li)的人乳腺(xian)上皮經(jing)Cytokeratin-18免疫熒光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可(ke)達(da)90%以上，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真菌等(deng)。

本公司所有(you)產品僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實驗，不做其(qi)他科(ke)學(xue)實驗外(wai)的使(shi)用！

包被(bei)條件(jian) 鼠尾(wei)膠原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基 含(han)FBS、生長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液壹次

生長(chang)特(te)性 貼(tie)壁

細胞(bao)形(xing)態 上皮細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性 可(ke)傳2-3代

消化液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實驗器材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌(jun)的培(pei)養皿、培(pei)養瓶、移液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術器械等(deng)，並(bing)進行(xing)高壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其他合適(shi)的消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準備(bei)：配制或(huo)購買(mai)合適(shi)的培(pei)養基、消化酶（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試劑，確保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗動物(wu)或(huo)組織(zhi)來源(yuan)準備(bei)：根(gen)據實驗需求，選擇(ze)合適(shi)的動物(wu)並(bing)進行(xing)相應的麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死，獲取(qu)所需組織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的組織(zhi)樣(yang)本庫(ku)中獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無(wu)菌條件下，迅(xun)速(su)取(qu)出目(mu)標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少對(dui)組織(zhi)的損(sun)傷，並(bing)去(qu)除多(duo)余的脂(zhi)肪、結(jie)締組織(zhi)等(deng)非目(mu)的組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷的無菌PBS沖洗(xi)數次，以去(qu)除血(xue)液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小塊，以便後續(xu)消化。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將剪碎的組織(zhi)塊放入含(han)有適(shi)量消化酶的離(li)心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖床或培(pei)養箱(xiang)中消化壹段時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖晃離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消化更均勻。

2. 終止(zhi)消化：當組織(zhi)塊大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化成單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或小細胞(bao)團時，加入含(han)血清的培(pei)養基終(zhong)止消化。

3. 過濾與(yu)離(li)心(xin)：用細胞(bao)篩(shai)過濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除未消化的組織(zhi)碎片，然後將濾液以適(shi)當的轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀察與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀察：每(mei)天(tian)用倒置顯微鏡觀察細(xi)胞(bao)的形態、生長狀(zhuang)態、密(mi)度等(deng)，記錄(lu)細胞(bao)的變(bian)化情況(kuang)，如(ru)發(fa)現細胞(bao)汙染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與活(huo)力檢測(ce)：在(zai)需要(yao)時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)，以了解(jie)細胞(bao)的生長情況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組織(zhi)取(qu)材後需立即處(chu)理(li)，避(bi)免長時間暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或非營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或生理鹽水沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除血(xue)液、雜質。

2. 消化酶選擇(ze)

- 根據組織(zhi)類(lei)型選擇(ze)消化酶，避(bi)免過度消化導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消化時間需嚴(yan)格(ge)控制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯微鏡觀察細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二、培(pei)養條(tiao)件優(you)化

1. 培(pei)養基選擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血清或(huo)特(te)定(ding)生長(chang)因(yin)子(zi)的培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞(bao)需添(tian)加胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻(pin)繁更換培(pei)養基品牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養皿（如(ru)膠原(yuan)蛋白、多(duo)聚賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯合會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制和(he)分(fen)化。

三、汙染控制

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使(shi)用壹(yi)次性耗(hao)材，避(bi)免交叉汙染。

- 培(pei)養基中可(ke)添加雙抗，但長期(qi)使(shi)用可(ke)能影(ying)響細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後需及(ji)時丟棄細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監控

1. 日常(chang)觀察

- 每(mei)天(tian)檢查細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及培(pei)養基顏(yan)色，及(ji)時(shi)更換培(pei)養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片增多(duo)）可(ke)能提示(shi)汙染或(huo)營(ying)養(yang)不足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍(dong)存(cun)早期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或專用凍(dong)存(cun)培(pei)養基），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後液氮(dan)保(bao)存(cun)。