【概(gai)要描述(shu)】人(ren)成骨(gu)細(xi)胞公司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的產(chan)品：MOLM-16白血病RPMI 8226 (人(ren)多(duo)發性(xing)骨(gu)髓(sui)瘤(liu)外周(zhou)血B淋巴(ba)細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)HULEC-5a (人肺(fei)微血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)(暫(zan)不(bu)供應(ying))SCC-25 [SCC 25; SCC25] (人舌(she)磷(lin)癌(ai)細(xi)胞)NCI-H2228 [H2228; H-2228] (人肺癌(ai)細(xi)胞) (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確)MV-4-11 (人髓(sui)性(xing)單核(he)細(xi)胞白血病細(xi)胞) (STR鑒(jian)

人成骨(gu)分離自(zi)顱(lu)骨(gu)組織；顱(lu)骨(gu)位(wei)於脊(ji)柱上方，由23塊形狀(zhuang)和大(da)小(xiao)不(bu)同(tong)的扁骨(gu)和不(bu)規(gui)則骨(gu)組成。除下(xia)頜骨(gu)及(ji)舌(she)骨(gu)外(wai)，其(qi)余各(ge)骨(gu)彼此(ci)借(jie)縫或軟(ruan)骨(gu)牢(lao)固連結，起(qi)著保(bao)護和支(zhi)持腦、感(gan)覺器(qi)官(guan)以及(ji)消化(hua)器(qi)和呼吸器(qi)的起(qi)始(shi)部(bu)分的作用。顱分腦顱(lu)和面顱(lu)兩部(bu)分。腦顱(lu)位(wei)於顱(lu)的後(hou)上(shang)部(bu)，內(nei)有(you)顱(lu)腔，容(rong)納腦(nao)，共8塊(kuai)。面顱(lu)為顱(lu)的前(qian)下(xia)部(bu)分，包含眶、鼻腔、口(kou)腔等結構(gou)，構(gou)成面部(bu)的支架(jia)，共15塊(kuai)。成骨(gu)細(xi)胞是骨(gu)形成的主(zhu)要(yao)功能(neng)細(xi)胞，負(fu)責骨(gu)基(ji)質的合成、分泌和礦(kuang)化(hua)。骨(gu)不(bu)斷地(di)進(jin)行(xing)著重(zhong)建，骨(gu)重(zhong)建過程包括(kuo)破骨(gu)細(xi)胞貼附在舊骨(gu)區(qu)域(yu)，分泌酸(suan)性(xing)物質(zhi)溶(rong)解(jie)礦(kuang)物質，分泌蛋(dan)白酶消化(hua)骨(gu)基(ji)質，形成骨(gu)吸(xi)收陷窩(wo)；其(qi)後(hou)，成骨(gu)細(xi)胞移行(xing)至被(bei)吸收(shou)部(bu)位(wei)，分泌骨(gu)基(ji)質，骨(gu)基(ji)質礦(kuang)化(hua)而(er)形成新(xin)骨(gu)；破骨(gu)與(yu)成骨(gu)過(guo)程的平(ping)衡是(shi)維持正常(chang)骨(gu)量(liang)的關鍵(jian)。成骨(gu)細(xi)胞培養(yang)不(bu)僅(jin)有(you)助(zhu)於了(le)解(jie)骨(gu)形成機(ji)制、骨(gu)骼系(xi)統(tong)疾(ji)病的分子和細(xi)胞學基(ji)礎，也是(shi)藥(yao)物篩選(xuan)、生(sheng)物(wu)材料開發和生(sheng)物(wu)工(gong)程研(yan)究(jiu)的重要(yao)手段(duan)。
方法(fa)簡介：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分離的人成骨(gu)采(cai)用先用yi蛋白酶短時(shi)間消化(hua)、後(hou)用膠(jiao)原酶反復消化(hua)制(zhi)備(bei)而來，細(xi)胞總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分離的人成骨(gu)經(jing)ALP染色檢(jian)測，純度(du)可(ke)達(da)90%以上，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌、酵母和真(zhen)菌等。

本(ben)公司(si)所(suo)有(you)產(chan)品僅(jin)供科學實驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科學實驗(yan)外的使用！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻率(lv) 每2-3天(tian)換(huan)液壹次(ci)

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼壁

細(xi)胞形態(tai) 梭(suo)形、多(duo)角(jiao)形

傳代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代左(zuo)右(you)；3代(dai)以內狀(zhuang)態(tai)

消化(hua)液 0.25%yi蛋白酶

培養(yang)條件 氣相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備(bei)：準備無菌的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移液管、離心(xin)管、手(shou)術器(qi)械(xie)等，並進行高壓滅(mie)菌(jun)或其(qi)他(ta)合適的消毒處(chu)理。

2. 試劑(ji)準備：配制(zhi)或購買合適的培養(yang)基(ji)、消化(hua)酶（如、膠(jiao)原酶等）、胎牛血清、雙(shuang)抗(kang)等試劑(ji)，確保其(qi)無菌(jun)且在有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動物(wu)或組織來源(yuan)準備(bei)：根(gen)據(ju)實驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適的動物(wu)並(bing)進(jin)行相應的麻醉(zui)或處(chu)死，獲取(qu)所(suo)需(xu)組織；或從(cong)已(yi)有(you)的組織樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在無菌條件下(xia)，迅(xun)速取(qu)出(chu)目(mu)標組織，盡量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組織的損傷，並(bing)去除多余的脂肪(fang)、結(jie)締組織等非目(mu)的組織。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織用預(yu)冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗數(shu)次，以去除血液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞分離

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組織塊(kuai)放入(ru)含有(you)適(shi)量(liang)消化(hua)酶的離心(xin)管中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離心(xin)管，使消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當組織塊(kuai)大(da)部(bu)分被(bei)消化(hua)成單(dan)細(xi)胞懸(xuan)液或小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加(jia)入(ru)含血清的培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離心(xin)：用細(xi)胞篩過濾細(xi)胞懸(xuan)液，去除未消化(hua)的組織碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液以適當的轉速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈澱。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)：每天(tian)用倒置顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞的形態(tai)、生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等，記(ji)錄細(xi)胞的變化(hua)情(qing)況(kuang)，如發現(xian)細(xi)胞汙染或異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采取(qu)相應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計數與(yu)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)：在需要時(shi)，可(ke)采(cai)用臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色等方法對(dui)細(xi)胞進行計(ji)數和活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)，以了(le)解(jie)細(xi)胞的生(sheng)長情(qing)況(kuang)和健康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快速(su)操作

- 組織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理，避免長時(shi)間暴(bao)露(lu)於室(shi)溫(wen)或非營養(yang)環境。

- 使用無菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗組織，去(qu)除血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶，避免過度(du)消化(hua)導(dao)致細(xi)胞損傷。

- 消化(hua)時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞解(jie)離狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條件優化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用含血清或特(te)定生(sheng)長因(yin)子(zi)的培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞需添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避免頻繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品牌或批次(ci)，減(jian)少細(xi)胞適應壓力。

2. 貼壁與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞貼壁能(neng)力較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需要包被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋(dan)白、多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密度(du)建議控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會導(dao)致接觸抑(yi)制和分化(hua)。

三、汙(wu)染控(kong)制

1. 無菌(jun)操作

- 全程在超(chao)凈臺操作，使用壹次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期使用可(ke)能(neng)影響細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體(ti)檢測(ce)

- 定期(qi)檢測(ce)支原體(ti)汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟棄細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每天(tian)檢查細(xi)胞形態(tai)、密度(du)及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏色，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹次(ci)）。

- 異常(chang)形態(tai)（如細(xi)胞變圓、碎(sui)片增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提示汙染或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞分裂次(ci)數有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞。

- 凍存(cun)液建議(yi)使用 DMSO+血清（或專(zhuan)用凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮保存(cun)。