【概(gai)要描(miao)述】人卵(luan)巢(chao)上(shang)皮(pi)細(xi)胞公司正在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：WERI-RB-1人視(shi)網膜(mo)神(shen)經膠質(zhi)瘤細(xi)胞人涎(xian)腺(xian)腺(xian)樣(yang)囊性(xing)癌細(xi)胞SACC-LM(STR鑒(jian)定正確(que))人(ren)結腸(chang)癌細(xi)胞帶(dai)熒(ying)光(guang)酶(mei) HT-29+LUC(STR鑒(jian)定正確(que))人(ren)B細(xi)胞淋(lin)巴瘤SU-DHL-4(STR鑒(jian)定正確(que))小(xiao)鼠(shu)淋(lin)巴瘤細(xi)胞L5178YTK+/-clone(3.7.2C) （種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定）人(ren)B淋(lin)巴母(mu)細(xi)胞HMy2.CIR(STR鑒(jian)定正確(que))人(ren)眼脈(mai)絡(luo)黑色瘤細(xi)胞OCM1(STR鑒(jian)定正確(que))

人(ren)卵巢(chao)上(shang)皮(pi)分(fen)離(li)自卵巢(chao)組(zu)織；卵(luan)巢(chao)是(shi)雌(ci)性(xing)動(dong)物(wu)的(de)生殖器官，卵(luan)巢(chao)的(de)功能(neng)是(shi)產(chan)生(sheng)卵以及(ji)類(lei)固醇(chun)激(ji)素(su)。卵巢(chao)的(de)位(wei)置與(yu)睪(gao)丸(wan)相同(tong)，僅(jin)左側(ce)發育(yu)（右側(ce)已(yi)退化(hua)），呈(cheng)葡(pu)萄狀，均(jun)為處於(yu)不同(tong)發育(yu)時(shi)期的卵(luan)泡，卵泡(pao)呈(cheng)黃色，卵巢(chao)表(biao)面密布(bu)血(xue)管(guan)。卵(luan)巢(chao)的(de)大小(xiao)與(yu)年齡和產(chan)卵(luan)期有(you)關。大多數脊(ji)椎(zhui)動(dong)物(wu)有(you)兩個(ge)卵巢(chao)，但是(shi)部(bu)分(fen)魚類(lei)的兩個(ge)卵巢(chao)融(rong)合(he)為單(dan)個(ge)結構，而(er)所有(you)鳥類(lei)只(zhi)有(you)左(zuo)側卵巢(chao)有(you)機(ji)能(neng)。卵(luan)巢(chao)是(shi)位(wei)於子宮(gong)兩側(ce)的(de)壹(yi)對(dui)卵(luan)圓(yuan)形的(de)生(sheng)殖器官，它(ta)的外(wai)表(biao)有(you)壹(yi)層(ceng)上(shang)皮(pi)組(zu)織，其(qi)下(xia)方有(you)薄(bo)層(ceng)的(de)結締(di)組(zu)織。卵(luan)巢(chao)的(de)內部結構(gou)可(ke)分(fen)為皮質(zhi)和髓質(zhi)。皮(pi)質(zhi)位(wei)於卵(luan)巢(chao)的(de)周(zhou)圍部(bu)分(fen)，主要由(you)卵泡(pao)和結締(di)組(zu)織構(gou)成；髓(sui)質(zhi)位(wei)於中(zhong)央，由疏(shu)松結(jie)締(di)組(zu)織構(gou)成，其(qi)中有(you)許(xu)多(duo)血(xue)管(guan)、淋(lin)巴管(guan)和神經。卵(luan)巢(chao)上(shang)皮(pi)細(xi)胞主要功能(neng)：①上(shang)皮(pi)細(xi)胞能(neng)分(fen)泌激(ji)素(su)，刺(ci)激(ji)卵細(xi)胞分(fen)化(hua)成(cheng)熟；②細(xi)胞能(neng)分(fen)泌炎(yan)癥介(jie)質(zhi)，參(can)與(yu)炎(yan)癥反(fan)應(ying)。
方法簡介(jie)：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)人卵巢(chao)上(shang)皮(pi)采用(yong)yi蛋白酶(mei)-膠原酶(mei)聯(lian)合(he)消(xiao)化(hua)法結合(he)差(cha)速(su)貼(tie)壁(bi)法，並通過(guo)上(shang)皮(pi)細(xi)胞專用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)篩(shai)選(xuan)制(zhi)備而(er)來，細(xi)胞總量約(yue)為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)人卵巢(chao)上(shang)皮(pi)經Cytokeratin-19免疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度(du)可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌(jun)、酵母和真菌(jun)等。

本(ben)公司所有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學實(shi)驗，不做(zuo)其(qi)他科(ke)學(xue)實(shi)驗外(wai)的(de)使用(yong)！

包被條件(jian) 鼠(shu)尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞形態(tai) 上(shang)皮(pi)細(xi)胞樣(yang)

傳代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳2-3代(dai)

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗器材準備(bei)：準(zhun)備無菌(jun)的培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離心管、手(shou)術器械等，並進行高(gao)壓滅菌(jun)或其(qi)他合(he)適(shi)的消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購買(mai)合(he)適(shi)的培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如、膠原酶(mei)等）、胎牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無菌(jun)且(qie)在有(you)效(xiao)期內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織來(lai)源準備(bei)：根據(ju)實(shi)驗需(xu)求，選(xuan)擇合(he)適(shi)的動(dong)物(wu)並進行相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處死(si)，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的(de)組(zu)織樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在無菌(jun)條件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出目標(biao)組(zu)織，盡(jin)量減(jian)少對(dui)組(zu)織的(de)損傷(shang)，並去除(chu)多余(yu)的脂(zhi)肪、結締組(zu)織等非(fei)目的(de)組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的(de)組(zu)織用(yong)預冷(leng)的無菌(jun)PBS沖洗數次(ci)，以(yi)去除(chu)血(xue)液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織剪(jian)成約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的離心管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹段(duan)時(shi)間。期間可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離心管，使消化更(geng)均勻(yun)。

2. 終(zhong)止消化：當組(zu)織塊(kuai)大部分(fen)被(bei)消(xiao)化成單(dan)細(xi)胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加(jia)入含(han)血清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終止消化。

3. 過(guo)濾與(yu)離心：用(yong)細(xi)胞篩過(guo)濾細(xi)胞懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消化(hua)的(de)組(zu)織碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉速離心，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈澱(dian)。

細(xi)胞觀察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞的形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄細(xi)胞的變(bian)化(hua)情(qing)況，如發現(xian)細(xi)胞汙染(ran)或異常(chang)，及(ji)時(shi)采取相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞計數與(yu)活(huo)力檢(jian)測(ce)：在需(xu)要時(shi)，可采用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色等方法對(dui)細(xi)胞進行計(ji)數和活力(li)檢(jian)測(ce)，以了解(jie)細(xi)胞的生(sheng)長(chang)情(qing)況和健康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取材與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作

- 組(zu)織取(qu)材後(hou)需(xu)立即處(chu)理，避免長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或非(fei)營養(yang)環(huan)境。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或生理(li)鹽水(shui)沖洗(xi)組(zu)織，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選(xuan)擇

- 根據(ju)組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇消(xiao)化酶(mei)，避免過(guo)度(du)消化導致(zhi)細(xi)胞損傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞解離(li)狀態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使用(yong)含(han)血清(qing)或(huo)特(te)定生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞需(xu)添加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)品牌(pai)或批(pi)次，減(jian)少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要包被培(pei)養(yang)皿(min)（如膠原蛋白、多聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密度(du)建議控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會(hui)導致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操作

- 全(quan)程在超(chao)凈(jing)臺操(cao)作，使用(yong)壹次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中可添加(jia)雙抗(kang)，但長(chang)期使用(yong)可能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢(jian)測(ce)

- 定期檢測(ce)支原體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟棄細(xi)胞。

四(si)、狀態(tai)監控(kong)

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞形態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏色，及(ji)時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如(ru)細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多）可(ke)能(neng)提示(shi)汙(wu)染(ran)或營養(yang)不足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞分(fen)裂(lie)次(ci)數有(you)限(xian)（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍存早期代(dai)次(ci)細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議使用(yong) DMSO+血清(qing)（或(huo)專用(yong)凍存培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降溫(wen)後(hou)液(ye)氮保(bao)存。