【概要(yao)描(miao)述(shu)】人乳腺成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：SW480人(ren)結腸腺癌細(xi)胞高轉(zhuan)移(yi)人(ren)肝(gan)癌細(xi)胞帶(dai)熒(ying)光素(su)酶MHCC97-H+LUC（STR鑒(jian)定）人食管(guan)上皮(pi)細(xi)胞HEEC(STR鑒(jian)定正確(que))人結直腸(chang)癌細(xi)胞綠色(se)標記(ji)+熒光素(su)酶標記(ji) LOVO+LUC+GFP (STR鑒(jian)定正確(que))人腺癌細(xi)胞系(xi)F56 (STR鑒(jian)定正確(que))人神(shen)經膠(jiao)質細(xi)胞瘤細(xi)胞帶(dai)綠色(se)熒光U251+GFP(STR鑒(jian)定正確(que))人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞 GP293(STR鑒(jian)定正確(que))大(da)鼠(shu)肝(gan)癌細(xi)胞

人乳(ru)腺成(cheng)纖(xian)維分離(li)自(zi)乳(ru)腺組(zu)織(zhi)；乳腺位(wei)於皮(pi)下淺(qian)筋(jin)膜(mo)的(de)淺(qian)層(ceng)與深層(ceng)之間(jian)，淺(qian)筋(jin)膜(mo)伸向乳腺組(zu)織(zhi)內形(xing)成(cheng)條索狀的(de)小葉(ye)間(jian)隔，壹(yi)端(duan)連於胸(xiong)肌筋(jin)膜(mo)，另(ling)壹(yi)端(duan)連於皮(pi)膚，將乳(ru)腺腺體固定(ding)在(zai)胸(xiong)部的(de)皮(pi)下組(zu)織(zhi)之中。乳腺是(shi)哺(bu)乳(ru)動(dong)物少(shao)數可以(yi)重(zhong)復(fu)經歷生(sheng)長、功(gong)能分化和退(tui)化過程(cheng)的(de)器官之壹(yi)。纖(xian)維結締組(zu)織(zhi)伸入(ru)乳(ru)腺組(zu)織(zhi)之間(jian)，形(xing)成(cheng)許(xu)多(duo)間隔，這(zhe)些(xie)纖維結締組(zu)織(zhi)對乳(ru)房(fang)起固(gu)定作用(yong)，而纖維結締組(zu)織(zhi)是由成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞構(gou)成(cheng)的(de)。成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞（Fibroblast）是疏(shu)松(song)結締組(zu)織(zhi)的(de)主要(yao)細(xi)胞成(cheng)分，由胚(pei)胎時期的(de)間充質(zhi)細(xi)胞分化而來(lai)。成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞較大(da)，輪(lun)廓清楚，多(duo)為突(tu)起的(de)紡錘形或(huo)星(xing)形(xing)的(de)扁平狀結構，其(qi)細(xi)胞核(he)呈(cheng)規(gui)則的(de)卵圓(yuan)形(xing)，核(he)仁(ren)大(da)而(er)明(ming)顯。成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞功(gong)能活(huo)動(dong)旺盛(sheng)，細(xi)胞質(zhi)嗜(shi)弱(ruo)堿性(xing)，具明(ming)顯的(de)蛋白質(zhi)合成(cheng)和(he)分泌活動(dong)，在(zai)壹(yi)定(ding)條件(jian)下(xia)，它可以(yi)實現跟纖(xian)維細(xi)胞的(de)互(hu)相(xiang)轉(zhuan)化；成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞對(dui)不(bu)同(tong)程(cheng)度(du)的(de)細(xi)胞變(bian)性(xing)、壞死(si)和(he)組(zu)織(zhi)缺損的(de)修復(fu)有著(zhe)十分重(zhong)要(yao)的(de)作用(yong)。剛分離(li)的(de)乳腺成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞呈(cheng)圓(yuan)形(xing)、折光性(xing)良(liang)好(hao)，懸(xuan)浮(fu)於培養(yang)基(ji)中。30min細(xi)胞貼壁(bi)，其(qi)中部分開始伸出(chu)偽(wei)足(zu)，表現為小(xiao)的(de)突起；6h後細(xi)胞基(ji)本(ben)貼壁(bi)wan全(quan)，伸展(zhan)成(cheng)梭(suo)形(xing)，胞核清晰(xi)，分布(bu)較均(jun)勻，散在(zai)生(sheng)長(chang)，不(bu)聚(ju)集(ji)成(cheng)團；細(xi)胞生(sheng)長(chang)迅(xun)速，5-7天即呈(cheng)融(rong)合狀態，細(xi)胞排列(lie)緊(jin)密，有(you)的(de)交叉重(zhong)疊(die)生(sheng)長，平坦(tan)、胞體較大(da)，細(xi)胞質(zhi)透(tou)明(ming)，細(xi)胞核(he)較大(da)，呈(cheng)橢圓(yuan)形(xing)，顏(yan)色(se)淡。細(xi)胞融(rong)合(he)，並(bing)彼此連接(jie)成(cheng)網狀；細(xi)胞呈(cheng)突(tu)起(qi)的(de)紡錘形或(huo)星(xing)形(xing)的(de)扁平分布(bu)。
方(fang)法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分離(li)的(de)人乳腺成(cheng)纖(xian)維采(cai)用(yong)yi蛋白(bai)酶-膠(jiao)原酶混(hun)合(he)消(xiao)化法結合差(cha)速貼壁(bi)法(fa)制(zhi)備而來，細(xi)胞總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分離(li)的(de)人乳腺成(cheng)纖(xian)維經Vimentin免疫(yi)熒光鑒(jian)定，純度可達90%以(yi)上，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等。

本公(gong)司所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)學實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實(shi)驗(yan)外的(de)使用！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次

生長(chang)特(te)性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞形(xing)態 成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞樣(yang)

傳代特(te)性(xing) 可傳5代左(zuo)右；3代以(yi)內狀態最(zui)佳

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器材準(zhun)備：準(zhun)備(bei)無菌的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管、離(li)心(xin)管(guan)、手術(shu)器(qi)械(xie)等，並(bing)進行(xing)高壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配制或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶（如、膠(jiao)原酶等）、胎(tai)牛血清、雙抗(kang)等(deng)試劑，確(que)保其(qi)無菌且在(zai)有(you)效(xiao)期內。

3. 實驗(yan)動(dong)物或(huo)組(zu)織(zhi)來源準(zhun)備：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求，選擇(ze)合適(shi)的(de)動(dong)物並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取所(suo)需組(zu)織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有的(de)組織(zhi)樣本(ben)庫中獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材與處(chu)理(li)

1. 取材：在(zai)無菌條件(jian)下(xia)，迅速取出目標組織(zhi)，盡量減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損傷，並去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪、結締組(zu)織(zhi)等非(fei)目的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出的(de)組織(zhi)用預冷的(de)無菌PBS沖洗數次，以(yi)去(qu)除(chu)血液和雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便(bian)後續消(xiao)化。

細(xi)胞分離(li)

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎的(de)組織(zhi)塊放(fang)入(ru)含有(you)適量消(xiao)化酶的(de)離(li)心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖床或(huo)培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化壹(yi)段時(shi)間(jian)。期(qi)間可輕輕搖晃離(li)心(xin)管(guan)，使消(xiao)化更均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時，加(jia)入(ru)含血清的(de)培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察：每天用(yong)倒置(zhi)顯微鏡觀(guan)察細(xi)胞的(de)形態、生(sheng)長狀態、密(mi)度等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的(de)變化情況，如發(fa)現細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措施。
2. 細(xi)胞計數與活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需要(yao)時(shi)，可采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞進(jin)行(xing)計數和活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了解(jie)細(xi)胞的(de)生長情況和(he)健康(kang)狀態。

壹(yi)、取(qu)材與分離(li)

1. 快速操作

- 組織(zhi)取材後需立即(ji)處(chu)理(li)，避(bi)免長(chang)時(shi)間(jian)暴露於(yu)室溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根據(ju)組(zu)織(zhi)類型選擇(ze)消(xiao)化酶，避(bi)免過度消(xiao)化導(dao)致(zhi)細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化時間(jian)需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可通(tong)過顯微鏡觀(guan)察細(xi)胞解(jie)離(li)狀態。

二、培養(yang)條件(jian)優(you)化

1. 培養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使用含血清或(huo)特(te)定生(sheng)長因子(zi)的(de)培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞需添加胰島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻繁(fan)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞貼壁(bi)能力(li)較弱，可能需要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴氨酸(suan)）。

- 傳代時(shi)密度建議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分化。

三、汙(wu)染控(kong)制

1. 無菌操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超凈(jing)臺(tai)操作，使用壹(yi)次性(xing)耗材，避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培養(yang)基(ji)中可添加雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可能影(ying)響(xiang)細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及(ji)時(shi)丟棄(qi)細(xi)胞。

四、狀態監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每天檢(jian)查(zha)細(xi)胞形(xing)態、密(mi)度及培養(yang)基(ji)顏色(se)，及時(shi)更換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可能提示(shi)汙染或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代與凍存

- 原代細(xi)胞分裂次數有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍存早期代次細(xi)胞。

- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或(huo)專用凍存培養(yang)基(ji)），梯(ti)度降溫(wen)後液氮(dan)保存。