【概要(yao)描述】人肺(fei)大動脈(mai)內皮細胞(bao)公(gong)司正(zheng)在(zai)出售的產品：smmc-7721人肝癌(ai)細(xi)胞人肺(fei)鱗(lin)癌(ai)細(xi)胞NCI-H2170(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人腦膜(mo)瘤細(xi)胞IOMM-Lee (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人骨肉瘤細(xi)胞U-2OS(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))牛胚(pei)氣(qi)管(guan)細胞(bao)EBTr (NBL-4)（種(zhong)屬(shu)鑒定(ding)）人前(qian)列腺癌(ai)細(xi)胞VCaP(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))小(xiao)鼠骨(gu)髓瘤細(xi)P3X63Ag8.653（種屬(shu)鑒定(ding)）小(xiao)鼠胚(pei)胎(tai)纖(xian)維細胞(bao)STO（種(zhong)屬鑒定(ding)）人急性非(fei)B非(fei)T淋巴細(xi)胞(bao)性白血(xue)

人肺(fei)大動脈(mai)內皮分離自(zi)肺(fei)大動脈(mai)組織；肺(fei)大動脈(mai)亦稱肺(fei)動脈(mai)幹(gan)。在呼吸空(kong)氣(qi)的脊(ji)椎動物(wu)中，把(ba)靜脈(mai)血(xue)由(you)心(xin)臟(zang)導(dao)向肺(fei)臟(zang)的(de)動脈(mai)。肺(fei)大動脈(mai)起於(yu)右心(xin)室(shi)，在主(zhu)動脈(mai)之前(qian)向左(zuo)上後(hou)方(fang)斜(xie)行，在(zai)主動脈(mai)弓(gong)下方(fang)分為(wei)左(zuo)、右(you)肺(fei)動脈(mai)，經(jing)肺(fei)門(men)入(ru)肺(fei)。肺(fei)動脈(mai)幹(gan)位於(yu)心(xin)包內，為(wei)壹(yi)粗(cu)短(duan)的動脈(mai)幹(gan)。起自(zi)右心(xin)室(shi)，在升(sheng)主(zhu)動脈(mai)前(qian)方(fang)向左(zuo)後(hou)上方(fang)斜(xie)行，至(zhi)主動脈(mai)弓(gong)下方(fang)分為(wei)左(zuo)、右(you)肺(fei)動脈(mai)。左肺(fei)動脈(mai)較短(duan)，在左主(zhu)支(zhi)氣(qi)管(guan)前(qian)方(fang)橫(heng)行，分二支(zhi)進(jin)入(ru)左(zuo)肺(fei)上、下(xia)葉(ye)。右肺(fei)動脈(mai)較長(chang)而(er)粗(cu)，經(jing)升主(zhu)動脈(mai)和(he)上腔(qiang)靜(jing)脈(mai)後(hou)方(fang)向右(you)橫(heng)行，至(zhi)右肺(fei)門(men)處分為(wei)三(san)支(zhi)進(jin)入(ru)右(you)肺(fei)上、中、下葉(ye)。細胞(bao)呈(cheng)單層多角形鋪(pu)路石(shi)狀分布；該細(xi)胞(bao)在維持血(xue)管(guan)內外(wai)的(de)動態(tai)平衡(heng)、合(he)成和(he)分泌細胞因(yin)子和(he)介(jie)質(zhi)、維持凝血(xue)和(he)纖(xian)溶的(de)動態(tai)平衡(heng)中起重(zhong)要作用。肺(fei)大動脈(mai)內皮細胞(bao)呈(cheng)單層多角形鋪(pu)路石(shi)狀分布，該細(xi)胞(bao)在維持血(xue)管(guan)內外(wai)的(de)動態(tai)平衡(heng)、合(he)成和(he)分泌細胞因(yin)子和(he)介(jie)質(zhi)、維持凝血(xue)和(he)纖(xian)溶的(de)動態(tai)平衡(heng)中起重(zhong)要作用。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離的人肺(fei)大動脈(mai)內皮采用(yong)yi蛋白酶(mei)-膠(jiao)原(yuan)酶(mei)聯(lian)合(he)消(xiao)化法結合(he)差(cha)速貼壁法、並(bing)通過內皮細胞(bao)專用(yong)培養基培養篩(shai)選(xuan)制(zhi)備而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離的人肺(fei)大動脈(mai)內皮經(jing)CD31免疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純度可達90%以上，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌(jun)等(deng)。

本(ben)公(gong)司所(suo)有(you)產品(pin)僅供科學實驗，不做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實驗外的(de)使(shi)用！

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠(jiao)（0.1%）

培養基 含FBS、生長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率 每(mei)2-3天換液(ye)壹次(ci)

生長(chang)特(te)性(xing) 貼壁

細胞(bao)形態(tai) 內皮細胞(bao)樣

傳代(dai)特性(xing) 可傳2-3代(dai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養條件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實驗器材(cai)準備：準備無菌(jun)的(de)培養皿(min)、培養瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械等，並進(jin)行(xing)高(gao)壓滅菌(jun)或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的消毒處理。

2. 試劑準備：配制(zhi)或購買(mai)合(he)適(shi)的培養基、消化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙抗等試(shi)劑，確(que)保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有(you)效(xiao)期內。

3. 實驗動物(wu)或組織來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗需求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動物(wu)並進(jin)行(xing)相(xiang)應的(de)麻醉或處死，獲(huo)取(qu)所需組織(zhi)；或從(cong)已有的(de)組(zu)織樣本(ben)庫(ku)中獲取(qu)組織(zhi)。

取材(cai)與處理

1. 取材(cai)：在無菌(jun)條件下，迅速(su)取(qu)出(chu)目標組(zu)織，盡(jin)量(liang)減少對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除(chu)多余的脂肪(fang)、結(jie)締組織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌(jun)PBS沖洗數(shu)次(ci)，以去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織剪成約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便(bian)後(hou)續消化。

細胞(bao)分離

1. 消化：將(jiang)剪碎的組織塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有適量(liang)消(xiao)化酶的離心(xin)管(guan)中，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床或培養箱(xiang)中消化壹段時間(jian)。期間可輕輕搖(yao)晃離(li)心(xin)管(guan)，使消(xiao)化更均勻。

2. 終止消(xiao)化：當組織塊(kuai)大部(bu)分被消化成單細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時，加入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培養基終止消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除(chu)未消化的組織碎片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液(ye)以適當(dang)的(de)轉速離(li)心(xin)，收集(ji)細(xi)胞沈澱。

細胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每(mei)天用倒置(zhi)顯微鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)的形態(tai)、生長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄細(xi)胞(bao)的變(bian)化情況，如發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或異(yi)常(chang)，及時采取(qu)相(xiang)應(ying)措施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需要時，可采用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力(li)檢(jian)測(ce)，以了解細胞(bao)的生長(chang)情(qing)況和(he)健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材(cai)與分離

1. 快速操(cao)作

- 組織(zhi)取材(cai)後(hou)需立即處理，避免長(chang)時間(jian)暴露於(yu)室(shi)溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或生理鹽水(shui)沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化酶，避免過度(du)消化導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時間(jian)需嚴格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘），可通過顯微鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)解離狀(zhuang)態。

二、培養條件優化

1. 培養基選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含血(xue)清(qing)或特定(ding)生長(chang)因(yin)子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞需添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避免頻繁(fan)更(geng)換培養基品牌或批次(ci)，減少細(xi)胞(bao)適應壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較弱，可能(neng)需要包被培養皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋白、多聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建(jian)議控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和(he)分化。

三、汙(wu)染(ran)控制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免交叉汙(wu)染(ran)。

- 培養基中可添加雙抗，但長(chang)期使用(yong)可能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及時丟棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞(bao)形態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培養基顏(yan)色，及(ji)時更(geng)換培養基（通常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如細胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多）可能(neng)提(ti)示(shi)汙(wu)染(ran)或營(ying)養(yang)不足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂次(ci)數(shu)有(you)限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或專用(yong)凍存(cun)培養基），梯度降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮保存(cun)。