【概(gai)要(yao)描(miao)述】人肺大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌細胞公司正在出售(shou)的(de)產品(pin)：SNB-19人腦(nao)膠質瘤魚鰓細胞系(xi) RTgill-W1 (ATCC CRL-2523)人肝星形(xing)細(xi)胞帶紅(hong)色熒(ying)光LX-2+RFP(STR鑒定(ding)正確)人腎(shen)癌細(xi)胞A-498(STR鑒定(ding)正確)人神(shen)經(jing)內分(fen)泌前(qian)列(lie)腺(xian)癌細(xi)胞NCI-H660人胰(yi)腺(xian)癌細(xi)胞系(xi)SW 1990(STR鑒定(ding)正確)人小膠質細(xi)胞HMC3(STR鑒定(ding)正確)人正常卵(luan)巢上(shang)皮細(xi)胞 IOSE-80(STR鑒定(ding)正確)小鼠(shu)骨(gu)

本公(gong)司所有產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他科(ke)學實(shi)驗外的(de)使用(yong)！

人肺(fei)大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌分離(li)自肺大(da)動(dong)脈組織；肺(fei)大(da)動(dong)脈亦稱肺動(dong)脈幹(gan)。在呼吸(xi)空氣的(de)脊(ji)椎動(dong)物(wu)中(zhong)，把靜脈血由心(xin)臟導向(xiang)肺臟的(de)動(dong)脈。肺大(da)動(dong)脈起於右心(xin)室，在主動(dong)脈之前向(xiang)左上(shang)後(hou)方斜(xie)行，在主動(dong)脈弓下方分(fen)為左、右(you)肺動(dong)脈，經(jing)肺(fei)門(men)入肺。肺(fei)動(dong)脈幹(gan)位於心(xin)包內，為(wei)壹粗短(duan)的(de)動(dong)脈幹(gan)。起(qi)自右心(xin)室，在升主動(dong)脈前方向(xiang)左後(hou)上(shang)方斜(xie)行，至(zhi)主動(dong)脈弓下方分(fen)為左、右(you)肺動(dong)脈。左肺(fei)動(dong)脈較短(duan)，在左主支(zhi)氣管(guan)前(qian)方(fang)橫(heng)行，分(fen)二(er)支(zhi)進入左肺(fei)上(shang)、下葉。右(you)肺動(dong)脈較長(chang)而(er)粗，經(jing)升主動(dong)脈和(he)上(shang)腔靜脈後(hou)方向(xiang)右橫(heng)行，至(zhi)右肺(fei)門(men)處(chu)分(fen)為(wei)三(san)支(zhi)進入右肺(fei)上(shang)、中(zhong)、下葉。肺(fei)大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌細胞是肺(fei)血管(guan)的(de)重(zhong)要(yao)結(jie)構(gou)細(xi)胞之壹，在調控(kong)肺血管(guan)的(de)收縮和(he)舒張功(gong)能中(zhong)有重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)。肺大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌細胞原代分離(li)培養(yang)3天後(hou)，可見(jian)細胞貼壁(bi)伸(shen)展(zhan)，細(xi)胞形(xing)態(tai)大(da)小不(bu)壹，呈(cheng)梭形(xing)、不(bu)規(gui)則(ze)形(xing)、三(san)角(jiao)形(xing)或(huo)扇(shan)形(xing)，核(he)卵(luan)圓形(xing)、居(ju)中(zhong)；2周後(hou)細胞匯(hui)合(he)，多(duo)數細(xi)胞伸(shen)展(zhan)呈(cheng)長(chang)梭(suo)形(xing)，胞漿豐(feng)富(fu)，有分(fen)枝(zhi)狀突(tu)起，細胞平行排(pai)列成(cheng)單(dan)層(ceng)或(huo)部分(fen)區(qu)域(yu)多層(ceng)重(zhong)疊(die)生長(chang)，高低起伏；細胞密度低時(shi)，常交織成(cheng)網(wang)狀(zhuang)；密度高時(shi)，則(ze)排(pai)列為(wei)旋(xuan)渦狀或(huo)柵(zha)欄(lan)狀(zhuang)。傳代後(hou)細胞生長(chang)較(jiao)快，4-6天即(ji)可匯(hui)合(he)，並(bing)保(bao)持(chi)上(shang)述形(xing)態(tai)學(xue)特(te)征和(he)生長(chang)特(te)點。肺(fei)大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌細胞的(de)異常是肺動(dong)脈高壓(ya)發(fa)生發(fa)展(zhan)的(de)重(zhong)要(yao)病理(li)學特(te)征，其(qi)雕亡(wang)和(he)增殖失衡是(shi)肺(fei)血管(guan)重(zhong)塑(su)的(de)關鍵。研(yan)究(jiu)表(biao)明(ming)，急性(xing)和(he)慢(man)性(xing)缺(que)氧均可導致(zhi)肺動(dong)脈高壓(ya)，即(ji)缺氧性肺動(dong)脈高壓(ya)，推(tui)斷(duan)缺(que)氧可能是通(tong)過促進肺大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌細胞的(de)增殖而參(can)與缺(que)氧性肺動(dong)脈高壓(ya)的(de)發生發(fa)展(zhan)。肺(fei)大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌細胞主要(yao)功(gong)能：①細(xi)胞表面(mian)表(biao)達(da)介(jie)質（ICAM-1和(he)VCAM-1）參(can)與血(xue)管(guan)壁(bi)炎癥(zheng)反應(ying)；②是(shi)多數重(zhong)要(yao)動(dong)脈疾病的(de)靶細(xi)胞。肺大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌細胞與主要(yao)病生理(li)變(bian)化：①平滑(hua)肌增生易(yi)致(zhi)肺動(dong)脈高壓(ya)；②先(xian)天性(xing)肺動(dong)脈狹窄；③肺動(dong)脈栓(shuan)塞。
方法簡(jian)介(jie)：

公司實(shi)驗室分離(li)的(de)人肺大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌采用(yong)yi蛋白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶聯(lian)合(he)消化法結(jie)合(he)差速貼壁(bi)法制(zhi)備(bei)而(er)來，細胞總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測：

公司實(shi)驗室分離(li)的(de)人肺大(da)動(dong)脈平滑(hua)肌經(jing)α-SMA免疫(yi)熒(ying)光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌等(deng)。

培養(yang)基 含FBS、生長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天換液(ye)壹次

生長(chang)特(te)性 貼壁(bi)

細胞形(xing)態(tai) 成纖(xian)維(wei)細胞樣

傳代特(te)性 可傳5代左右(you)；3代以(yi)內狀(zhuang)態(tai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條件 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材準備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術(shu)器(qi)械(xie)等，並(bing)進行高壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的(de)消毒處理(li)。

2. 試劑準備(bei)：配(pei)制(zhi)或(huo)購買合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基、消化酶（如、膠原(yuan)酶等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試劑，確保(bao)其(qi)無菌且(qie)在有效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織來源準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求，選擇合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或(huo)處(chu)死，獲取(qu)所需(xu)組織；或(huo)從(cong)已(yi)有的(de)組織樣本庫(ku)中(zhong)獲取組織。

取材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在無菌條(tiao)件(jian)下，迅速取出目(mu)標組織，盡(jin)量減(jian)少(shao)對(dui)組織的(de)損傷，並(bing)去除(chu)多余(yu)的(de)脂肪、結(jie)締組織等(deng)非目(mu)的(de)組織。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組織用(yong)預冷(leng)的(de)無菌PBS沖(chong)洗數次，以(yi)去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消化。

細胞分離(li)

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組織塊放(fang)入含有適(shi)量消化酶的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間可輕輕搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消化更均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消化：當(dang)組織塊大(da)部分(fen)被(bei)消化成單細胞懸液(ye)或(huo)小細胞團(tuan)時(shi)，加入含血清(qing)的(de)培養(yang)基終止(zhi)消化。

3. 過濾與離(li)心(xin)：用(yong)細胞篩(shai)過濾細胞懸液(ye)，去(qu)除(chu)未消化的(de)組織碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉速離(li)心(xin)，收集(ji)細胞沈澱(dian)。

細胞觀察與檢測

1. 日(ri)常觀察：每天用(yong)倒置(zhi)顯微(wei)鏡觀察細胞的(de)形(xing)態(tai)、生長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度等(deng)，記(ji)錄細胞的(de)變(bian)化情況，如發現(xian)細胞汙染(ran)或(huo)異常，及時(shi)采(cai)取(qu)相應措(cuo)施。
2. 細胞計數與活(huo)力(li)檢測：在需(xu)要(yao)時(shi)，可采用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色等方(fang)法對(dui)細(xi)胞進行計數和(he)活(huo)力(li)檢測，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞的(de)生長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹、取材與分(fen)離(li)

1. 快速操作

- 組織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處(chu)理(li)，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於室溫或(huo)非營養(yang)環境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水沖洗組織，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶選擇

- 根據(ju)組織類(lei)型選擇消化酶，避免過(guo)度消化導致(zhi)細胞損傷(shang)。

- 消化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分鐘(zhong)），可通過顯微(wei)鏡觀察細胞解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二、培養(yang)條件優化

1. 培養(yang)基選擇

- 使用(yong)含血清(qing)或(huo)特(te)定生長(chang)因(yin)子的(de)培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞需(xu)添(tian)加胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁更換培養(yang)基品(pin)牌或(huo)批(pi)次，減少(shao)細胞適應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳代

- 原代細胞貼壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能需(xu)要(yao)包被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠原(yuan)蛋白(bai)、多聚(ju)賴氨酸）。

- 傳代時(shi)密度建(jian)議控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會導致(zhi)接觸(chu)抑制(zhi)和(he)分(fen)化。

三(san)、汙染(ran)控(kong)制

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在超(chao)凈臺操(cao)作，使用(yong)壹次性耗材，避免交叉汙染(ran)。

- 培養(yang)基中(zhong)可添加雙抗(kang)，但長(chang)期(qi)使用(yong)可能影響細胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原體汙染(ran)（如 PCR 法），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常觀察

- 每天檢查細(xi)胞形(xing)態(tai)、密度及(ji)培養(yang)基顏色，及時(shi)更(geng)換培養(yang)基（通常每 2-3 天換液(ye)壹次）。

- 異常形(xing)態(tai)（如細胞變(bian)圓、碎(sui)片增多(duo)）可能提示(shi)汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳代與凍存

- 原代細胞分裂次數有限(xian)（壹般 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍存早(zao)期(qi)代次細胞。

- 凍存液(ye)建(jian)議使用(yong) DMSO+血清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存培養(yang)基），梯度(du)降溫後(hou)液(ye)氮保(bao)存。