【概要描(miao)述】人(ren)肺(fei)大靜脈內皮細胞公(gong)司正在出售的(de)產品(pin)：Snu-1人(ren)胃癌細(xi)胞小鼠胚胎成骨(gu)細(xi)胞前體細(xi)胞MC3T3-E1（種屬鑒定）人(ren)急(ji)性T淋巴(ba)細(xi)胞白血病細胞Jurkat，CloneE6-1 (STR鑒定正(zheng)確)小鼠肺(fei)癌細(xi)胞紅色(se)熒光LLC+RFP（種(zhong)屬鑒定）人(ren)骨(gu)肉(rou)瘤細胞帶熒(ying)光素(su)酶143B+LUC(STR鑒定正(zheng)確)小鼠海馬神經元細胞 HT22（種屬鑒定）小鼠肺(fei)泡(pao)上(shang)皮細胞 MLE-12（種屬鑒定）小鼠腎(shen)小球系膜細胞SV40

人(ren)肺(fei)大靜脈內皮分離(li)自肺(fei)大靜脈組織；肺(fei)大靜脈在用(yong)肺(fei)呼吸(xi)的(de)脊(ji)椎(zhui)動(dong)物中(zhong)，把動(dong)脈血由(you)肺(fei)送回(hui)心臟的(de)靜脈，是(shi)壹個靜脈(mai)裏流(liu)動(dong)脈血的(de)血管(guan)。左(zuo)右(you)1對，共4條(tiao)，兩條(tiao)連接右(you)肺(fei)，兩條(tiao)連接左肺(fei)。肺(fei)靜脈(mai)異(yi)位引流(liu)是(shi)指肺(fei)靜脈(mai)未(wei)能直(zhi)接與左(zuo)心房(fang)連接，而與右(you)心房(fang)或體靜脈(mai)系統連接的(de)先天(tian)性心血管(guan)異(yi)位。肺(fei)靜脈(mai)淤(yu)血性肺(fei)動(dong)脈高(gao)壓，是(shi)由(you)於肺(fei)靜脈(mai)內(nei)血液淤(yu)滯而(er)引起的(de)肺(fei)動(dong)脈高(gao)壓。正(zheng)常(chang)情況(kuang)下，肺(fei)循環具(ju)有血壓低(di)、阻力(li)小和順應(ying)性大的(de)特點，肺(fei)動(dong)脈壓力(li)高低取(qu)決於(yu)單(dan)位時間內肺(fei)動(dong)脈血流(liu)量和肺(fei)血管(guan)的(de)阻力(li)，要維(wei)持(chi)肺(fei)循環的(de)低壓、低(di)阻的(de)狀(zhuang)態，必(bi)須(xu)保(bao)證(zheng)整個肺(fei)循環系統的(de)暢(chang)通(tong)無阻，血液順利(li)地(di)由(you)肺(fei)動(dong)脈經毛(mao)細血管(guan)進入肺(fei)靜脈(mai)，再(zai)入左(zuo)心室，經過左(zuo)心室收(shou)縮(suo)進入體(ti)循環，才能避(bi)免肺(fei)動(dong)脈內(nei)壓力(li)升高。細胞呈(cheng)多(duo)邊(bian)形鵝卵(luan)石(shi)狀(zhuang)排列；該(gai)細胞在維(wei)持(chi)血管(guan)內(nei)外(wai)的(de)動(dong)態平衡(heng)、合(he)成和分泌細胞因子(zi)和介質(zhi)、維(wei)持(chi)凝血和纖溶的(de)動(dong)態平衡(heng)中(zhong)起重要作(zuo)用(yong)。
方(fang)法(fa)簡介：

公(gong)司實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)人(ren)肺(fei)大靜脈內皮采(cai)用(yong)yi蛋白酶(mei)-膠原(yuan)酶聯(lian)合(he)消化(hua)法結(jie)合(he)差(cha)速(su)貼(tie)壁(bi)法(fa)、並(bing)通(tong)過內(nei)皮細胞專用(yong)培養(yang)基(ji)培(pei)養篩選制(zhi)備(bei)而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測：

公(gong)司實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)人(ren)肺(fei)大靜脈內皮經CD31免(mian)疫(yi)熒(ying)光鑒定，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以上，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等(deng)。

本公(gong)司所(suo)有產(chan)品(pin)僅供科學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

包(bao)被條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻率(lv) 每2-3天(tian)換(huan)液壹次(ci)

生(sheng)長特性 貼(tie)壁(bi)

細胞形態 內(nei)皮細胞樣

傳(chuan)代特性 可(ke)傳(chuan)2-3代

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的(de)培養皿(min)、培養瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或其他(ta)合(he)適的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或購買(mai)合(he)適的(de)培養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如、膠原(yuan)酶等）、胎牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試劑(ji)，確保(bao)其無菌(jun)且(qie)在有效(xiao)期內。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組織來源準(zhun)備(bei)：根(gen)據實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物並(bing)進行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或處死，獲取(qu)所(suo)需(xu)組織；或從(cong)已(yi)有的(de)組織樣(yang)本庫中(zhong)獲取(qu)組織。

取(qu)材與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅(xun)速(su)取(qu)出目(mu)標(biao)組織，盡(jin)量減(jian)少對組織的(de)損傷，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組織等(deng)非目(mu)的(de)組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的(de)組織用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以去除血液和雜質(zhi)。

3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便後續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消化(hua)：將剪碎的(de)組織塊(kuai)放(fang)入含(han)有適(shi)量消化(hua)酶的(de)離(li)心管(guan)中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床或培養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹段時間。期間可(ke)輕輕(qing)搖晃離(li)心管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組織塊(kuai)大部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成單(dan)細(xi)胞懸液(ye)或小細胞團時，加入含(han)血清(qing)的(de)培養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與離(li)心：用細(xi)胞篩過(guo)濾細胞懸液(ye)，去除未(wei)消化(hua)的(de)組織碎片，然(ran)後將濾液以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察與檢測

1. 日常(chang)觀(guan)察：每天(tian)用(yong)倒置顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察細胞的(de)形態、生(sheng)長狀(zhuang)態、密度(du)等，記錄細胞的(de)變化(hua)情況(kuang)，如發(fa)現(xian)細(xi)胞汙染或異常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相應(ying)措施(shi)。
2. 細胞計數(shu)與活力(li)檢測：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色(se)等方法對細胞進行(xing)計(ji)數(shu)和活力(li)檢測，以了解細(xi)胞的(de)生(sheng)長情況(kuang)和健康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組織取(qu)材後需(xu)立(li)即(ji)處理(li)，避(bi)免長(chang)時間暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或非營(ying)養(yang)環境。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)組織，去(qu)除血液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇(ze)

- 根(gen)據組織類型選擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免過(guo)度(du)消化(hua)導致(zhi)細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化(hua)時間需(xu)嚴格控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察細胞解離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培養條(tiao)件優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清(qing)或特定生(sheng)長因子(zi)的(de)培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞需(xu)添(tian)加胰島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培養基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減(jian)少細(xi)胞適應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳(chuan)代

- 原(yuan)代細胞貼(tie)壁(bi)能力(li)較弱，可(ke)能需(xu)要(yao)包被培養皿（如膠原(yuan)蛋白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時密度(du)建議控(kong)制在 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會(hui)導(dao)致接(jie)觸抑制和分化(hua)。

三(san)、汙染控(kong)制

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次(ci)性耗材(cai)，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙抗(kang)，但長期使(shi)用(yong)可(ke)能影響細(xi)胞活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定期檢測支(zhi)原(yuan)體汙染（如 PCR 法），汙染後需(xu)及(ji)時丟(diu)棄細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每天(tian)檢查細胞形態、密度(du)及培(pei)養基(ji)顏色(se)，及時更(geng)換(huan)培養基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態（如細胞變圓(yuan)、碎片增(zeng)多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙染或營(ying)養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與凍(dong)存

- 原(yuan)代細胞分裂(lie)次(ci)數(shu)有限(xian)（壹般 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍(dong)存早(zao)期代次(ci)細胞。

- 凍(dong)存液建議使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專用凍(dong)存培養基(ji)），梯(ti)度(du)降溫後液(ye)氮保(bao)存。