【概(gai)要(yao)描述】人肺(fei)大靜(jing)脈平(ping)滑肌細胞公司正在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品：Snu-182人肝(gan)癌細胞人食管(guan)鱗(lin)癌細胞KYSE-150(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人腦膠(jiao)質母細胞瘤(liu)細胞LN-18(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))小鼠(shu)垂體瘤(liu)細胞AtT-20（種屬鑒定(ding)）人(ren)急(ji)性原粒(li)細胞白血病(bing)細胞 KASUMI-1(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人骨肉(rou)瘤(liu)細胞HOS(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人正常(chang)結(jie)腸(chang)上(shang)皮細胞NCM-460(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))小鼠(shu)小腦細胞 C8-D1A（種屬鑒定(ding)）人(ren)淋(lin)巴細胞白血病(bing)細

本(ben)公司所有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科學(xue)實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其他(ta)科學(xue)實(shi)驗外(wai)的使用！

人肺(fei)大靜(jing)脈平(ping)滑肌分(fen)離(li)自肺(fei)大靜(jing)脈組織(zhi)；肺(fei)大靜(jing)脈在用肺(fei)呼吸(xi)的脊(ji)椎(zhui)動物(wu)中，把動脈血由(you)肺(fei)送回(hui)心臟(zang)的(de)靜(jing)脈，是(shi)壹個(ge)靜(jing)脈裏流動脈血的(de)血管(guan)。左(zuo)右(you)1對，共(gong)4條，兩(liang)條連接(jie)右(you)肺(fei)，兩(liang)條連接(jie)左(zuo)肺(fei)。肺(fei)靜(jing)脈異(yi)位引流(liu)是(shi)指肺(fei)靜(jing)脈未(wei)能直接(jie)與左(zuo)心房(fang)連接(jie)，而與(yu)右(you)心房(fang)或(huo)體靜(jing)脈系統連接(jie)的先天(tian)性心血管(guan)異(yi)位。肺(fei)靜(jing)脈淤(yu)血性(xing)肺(fei)動脈高壓，是(shi)由(you)於肺(fei)靜(jing)脈內血液淤(yu)滯(zhi)而引起的(de)肺(fei)動脈高壓。正常(chang)情(qing)況(kuang)下(xia)，肺(fei)循環(huan)具有(you)血壓低、阻(zu)力小和順應(ying)性大的特點(dian)，肺(fei)動脈壓力高低取(qu)決於單(dan)位時(shi)間(jian)內肺(fei)動脈血流(liu)量和肺(fei)血管(guan)的阻(zu)力，要(yao)維持肺(fei)循環(huan)的低(di)壓、低阻(zu)的(de)狀態，必(bi)須(xu)保證(zheng)整個(ge)肺(fei)循環(huan)系統(tong)的暢通(tong)無(wu)阻，血液順利(li)地(di)由(you)肺(fei)動脈經(jing)毛細血管(guan)進(jin)入肺(fei)靜(jing)脈，再入左(zuo)心室，經(jing)過(guo)左(zuo)心室收(shou)縮進(jin)入體循環(huan)，才能(neng)避(bi)免(mian)肺(fei)動脈內壓力升高。肺(fei)大靜(jing)脈平(ping)滑肌細胞原代分(fen)離(li)培養3天(tian)後，可(ke)見細胞貼壁伸(shen)展(zhan)，細胞形(xing)態大小不(bu)壹(yi)，呈(cheng)梭形(xing)、不(bu)規(gui)則(ze)形(xing)、三(san)角(jiao)形(xing)或(huo)扇(shan)形(xing)，核卵(luan)圓形(xing)、居中；2周(zhou)後細胞匯(hui)合(he)，多數細胞伸(shen)展(zhan)呈(cheng)長(chang)梭形(xing)，胞漿豐富(fu)，有(you)分(fen)枝(zhi)狀突起，細胞平(ping)行(xing)排(pai)列(lie)成單層(ceng)或(huo)部分(fen)區域(yu)多層(ceng)重疊生長(chang)，高低(di)起伏(fu)；細胞密度低(di)時(shi)，常(chang)交織(zhi)成(cheng)網(wang)狀；密度(du)高(gao)時(shi)，則(ze)排(pai)列(lie)為(wei)旋渦(wo)狀或(huo)柵(zha)欄狀。傳代(dai)後細胞生長(chang)較快，4-6天(tian)即(ji)可(ke)匯(hui)合(he)，並保持上(shang)述形(xing)態學(xue)特(te)征(zheng)和生長(chang)特點(dian)。該(gai)細胞參與血管(guan)壁炎(yan)癥(zheng)反應(ying)，保持靜(jing)脈管腔(qiang)的(de)通(tong)暢，還是(shi)多數(shu)動脈疾病的(de)靶(ba)細胞。
方(fang)法簡(jian)介：

公司實驗室分(fen)離(li)的人肺(fei)大靜(jing)脈平(ping)滑肌采(cai)用yi蛋(dan)白(bai)酶-膠(jiao)原酶聯合(he)消(xiao)化法結(jie)合(he)差速(su)貼壁法制(zhi)備(bei)而來，細胞總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測：

公司實驗室分(fen)離(li)的人肺(fei)大靜(jing)脈平(ping)滑肌經(jing)α-SMA免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒定(ding)，純度可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母和真菌(jun)等(deng)。

培養基(ji) 含FBS、生長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻率(lv) 每2-3天換(huan)液壹次

生長(chang)特性(xing) 貼壁

細胞形(xing)態 成纖維細胞樣

傳代(dai)特性(xing) 可(ke)傳5代左(zuo)右(you)；3代(dai)以(yi)內狀態

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養條件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實驗器(qi)材(cai)準(zhun)備(bei)：準備(bei)無(wu)菌(jun)的培養皿、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心管(guan)、手術(shu)器(qi)械等(deng)，並進(jin)行(xing)高壓滅菌(jun)或(huo)其他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處理。

2. 試劑(ji)準備：配制或(huo)購買合(he)適(shi)的(de)培養基(ji)、消(xiao)化酶（如、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試劑(ji)，確(que)保其(qi)無菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效期(qi)內。

3. 實驗動物(wu)或(huo)組織(zhi)來(lai)源準備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需求(qiu)，選(xuan)擇合適(shi)的(de)動物(wu)並進(jin)行(xing)相應(ying)的麻醉或(huo)處死，獲(huo)取(qu)所需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有(you)的組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫中(zhong)獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處理

1. 取(qu)材：在(zai)無菌(jun)條件(jian)下，迅(xun)速(su)取(qu)出目(mu)標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余的脂肪、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的(de)組織(zhi)用預冷的(de)無菌(jun)PBS沖(chong)洗數次，以(yi)去除血液和雜(za)質。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後續消(xiao)化。

細胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化酶的離(li)心管(guan)中，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心管(guan)，使消(xiao)化更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消(xiao)化：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單細胞懸液或(huo)小細胞團時(shi)，加(jia)入(ru)含血清(qing)的(de)培養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與離(li)心：用細胞篩過(guo)濾(lv)細胞懸液，去除未(wei)消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液以(yi)適(shi)當的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收(shou)集(ji)細胞沈澱(dian)。

細胞觀察與(yu)檢(jian)測

1. 日常(chang)觀察(cha)：每(mei)天(tian)用倒(dao)置顯微(wei)鏡觀(guan)察細胞的形(xing)態、生長(chang)狀態、密(mi)度(du)等(deng)，記錄細胞的變化(hua)情(qing)況(kuang)，如發現(xian)細胞汙染或(huo)異(yi)常，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相應(ying)措施。
2. 細胞計數與(yu)活(huo)力檢測：在(zai)需要(yao)時(shi)，可(ke)采用臺盼藍染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法對(dui)細胞進(jin)行(xing)計數和活力檢測，以(yi)了解細胞的生長(chang)情況(kuang)和健康(kang)狀態。

壹、取(qu)材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材後需立(li)即(ji)處理，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或(huo)非(fei)營養環境。

- 使用無菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽水(shui)沖(chong)洗組織(zhi)，去(qu)除血液、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過度(du)消(xiao)化導致(zhi)細胞損傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需嚴格控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡觀(guan)察細胞解離(li)狀態。

二、培養條件(jian)優化(hua)

1. 培養基(ji)選擇

- 使用含血清(qing)或(huo)特定(ding)生長(chang)因子(zi)的(de)培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞需添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更換培養基(ji)品牌或(huo)批次，減少(shao)細胞適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代

- 原代(dai)細胞貼壁能(neng)力較弱(ruo)，可(ke)能需要(yao)包(bao)被培養皿（如膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建議控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會(hui)導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制和分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染控制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使用壹次性耗(hao)材，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養基(ji)中可(ke)添加雙抗，但(dan)長(chang)期(qi)使用可(ke)能影(ying)響細胞活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體汙染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後需及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞。

四、狀態監(jian)控

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每天(tian)檢查(zha)細胞形(xing)態、密度(du)及培養基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更換培養基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天換液壹次）。

- 異(yi)常形(xing)態（如細胞變圓、碎(sui)片(pian)增多）可(ke)能提(ti)示汙染或(huo)營養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細胞分(fen)裂(lie)次數有(you)限(xian)（壹般 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早期(qi)代次細胞。

- 凍(dong)存(cun)液建議使用 DMSO+血清(qing)（或(huo)專用凍(dong)存(cun)培養基(ji)），梯度降(jiang)溫(wen)後液氮保存(cun)。