【概要描述】人肺動(dong)脈(mai)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)公(gong)司正(zheng)在出售的(de)產品：Snu-387人(ren)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞(bao)人(ren)胃癌細(xi)胞(bao)Hs-746T (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)乳(ru)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)帶(dai)紅色(se)熒光(guang)MDA-MB-231+RFP(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)乳(ru)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)MDA-MB-453(STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))雞(ji)胚胎成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)UMNSAH/DF-1（種(zhong)屬鑒(jian)定(ding)）小(xiao)鼠巨噬(shi)細(xi)胞(bao)Ana-1（種(zhong)屬鑒(jian)定(ding)）人(ren)卵(luan)巢癌細(xi)胞(bao)熒光(guang)素(su)酶(mei)標(biao)記 SKOV3+luc  (STR鑒(jian)定(ding)正(zheng)確(que))小(xiao)鼠主動(dong)脈(mai)平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)人(ren)高(gao)

人肺動(dong)脈(mai)成(cheng)纖(xian)維(wei)分離自(zi)肺(fei)動(dong)脈(mai)組(zu)織；肺動(dong)脈(mai)亦(yi)稱肺(fei)動(dong)脈(mai)幹(gan)。在呼(hu)吸(xi)空(kong)氣的(de)脊椎(zhui)動(dong)物中(zhong)，把靜脈(mai)血(xue)由心臟導(dao)向肺(fei)臟的(de)動(dong)脈(mai)。肺(fei)大動(dong)脈(mai)起(qi)於右(you)心室，在主(zhu)動(dong)脈(mai)之(zhi)前(qian)向(xiang)左(zuo)上後(hou)方斜行，在主(zhu)動(dong)脈(mai)弓(gong)下(xia)方(fang)分為(wei)左、右(you)肺(fei)動(dong)脈(mai)，經(jing)肺門(men)入(ru)肺(fei)。肺(fei)動(dong)脈(mai)幹(gan)位於(yu)心包(bao)內，為(wei)壹(yi)粗短(duan)的(de)動(dong)脈(mai)幹(gan)。起自(zi)右(you)心室，在升(sheng)主(zhu)動(dong)脈(mai)前(qian)方向(xiang)左後(hou)上方(fang)斜行，至(zhi)主(zhu)動(dong)脈(mai)弓(gong)下(xia)方(fang)分為(wei)左、右(you)肺(fei)動(dong)脈(mai)。左(zuo)肺動(dong)脈(mai)較短(duan)，在(zai)左主支氣管前(qian)方橫(heng)行，分二支進入(ru)左(zuo)肺(fei)上(shang)、下葉。右(you)肺(fei)動(dong)脈(mai)較長(chang)而粗，經(jing)升(sheng)主(zhu)動(dong)脈(mai)和上腔靜脈(mai)後(hou)方向(xiang)右(you)橫(heng)行，至(zhi)右(you)肺(fei)門處分為(wei)三支進(jin)入(ru)右(you)肺(fei)上、中(zhong)、下(xia)葉。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)（Fibroblast）是疏松結締(di)組(zu)織的(de)主要細(xi)胞(bao)成(cheng)分，由(you)胚胎時(shi)期(qi)的(de)間充(chong)質(zhi)細(xi)胞(bao)分化(hua)而來；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)較大(da)，輪(lun)廓(kuo)清楚，多(duo)為(wei)突(tu)起的(de)紡錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的(de)扁(bian)平(ping)狀結構，其(qi)細(xi)胞(bao)核(he)呈(cheng)規則(ze)的(de)卵(luan)圓形(xing)，核(he)仁(ren)大(da)而明顯(xian)。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)功(gong)能活動(dong)旺盛(sheng)，細(xi)胞(bao)質(zhi)嗜(shi)弱堿性，具明顯(xian)的(de)蛋白(bai)質(zhi)合成(cheng)和分泌(mi)活動(dong)，在壹(yi)定(ding)條(tiao)件(jian)下(xia)，它可(ke)以(yi)實(shi)現跟(gen)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)的(de)互相(xiang)轉化(hua)；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)對(dui)不同程(cheng)度的(de)細(xi)胞(bao)變(bian)性、壞(huai)死和組織缺損的(de)修復(fu)有(you)著十(shi)分重(zhong)要的(de)作用(yong)。剛(gang)分離的(de)肺動(dong)脈(mai)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)呈(cheng)圓形(xing)、折光(guang)性良(liang)好，懸(xuan)浮(fu)於(yu)培(pei)養基(ji)中(zhong)。30min細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)，其中(zhong)部分開始伸出偽足，表(biao)現為(wei)小的(de)突(tu)起；6h後(hou)細(xi)胞(bao)基(ji)本(ben)貼(tie)壁(bi)wan全，伸展成(cheng)梭形(xing)，胞核(he)清晰(xi)，分布(bu)較均(jun)勻(yun)，散在(zai)生長(chang)，不聚(ju)集(ji)成(cheng)團；細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)迅速(su)，5-7天(tian)即呈(cheng)融合(he)狀態(tai)，細(xi)胞(bao)排(pai)列(lie)緊密(mi)，有(you)的(de)交叉重(zhong)疊(die)生長(chang)，平(ping)坦(tan)、胞(bao)體較大(da)，細(xi)胞(bao)質(zhi)透(tou)明(ming)，細(xi)胞(bao)核(he)較大(da)，呈(cheng)橢(tuo)圓形(xing)，顏色(se)淡。細(xi)胞(bao)融合(he)，並彼(bi)此連(lian)接成(cheng)網狀；細(xi)胞(bao)呈(cheng)突(tu)起的(de)紡錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的(de)扁(bian)平(ping)分布(bu)。肺(fei)動(dong)脈(mai)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)在(zai)生(sheng)理(li)條(tiao)件(jian)下(xia)的(de)主要功(gong)能包括：構造(zao)和維(wei)持(chi)肺動(dong)脈(mai)的(de)正常形(xing)態(tai)；合(he)成(cheng)和釋(shi)放(fang)細(xi)胞(bao)外基(ji)質(zhi)；組織損傷後(hou)及時(shi)大量聚(ju)集(ji)修復(fu)損(sun)傷組織。
方法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司實(shi)驗室分離的(de)人肺(fei)動(dong)脈(mai)成(cheng)纖(xian)維(wei)采用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)混(hun)合消(xiao)化(hua)法(fa)結合差(cha)速(su)貼(tie)壁(bi)法(fa)制(zhi)備而來，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗室分離的(de)人肺(fei)動(dong)脈(mai)成(cheng)纖(xian)維(wei)經(jing)Vimentin免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可(ke)達90%以(yi)上，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細(xi)菌、酵母和真菌等。

本公(gong)司所(suo)有(you)產品僅(jin)供科(ke)學實(shi)驗，不做其(qi)他科(ke)學實(shi)驗外的(de)使用(yong)！

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生長(chang)特性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代特性 可(ke)傳(chuan)5代左右(you)；3代(dai)以(yi)內狀態(tai)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離心管(guan)、手術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行高壓(ya)滅(mie)菌或其他合(he)適(shi)的(de)消毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或(huo)購買(mai)合適(shi)的(de)培(pei)養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎牛血清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌且在有(you)效期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物或組(zu)織來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需求(qiu)，選擇(ze)合適(shi)的(de)動(dong)物並進(jin)行相應(ying)的(de)麻醉或(huo)處(chu)死，獲(huo)取(qu)所(suo)需組(zu)織；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組織樣本庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材(cai)與處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速(su)取(qu)出目標(biao)組織，盡量減(jian)少對(dui)組織的(de)損傷，並去除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪(fang)、結締(di)組(zu)織等非目的(de)組織。

2. 清洗：將取(qu)出的(de)組織用(yong)預冷(leng)的(de)無(wu)菌PBS沖洗數(shu)次(ci)，以(yi)去除(chu)血(xue)液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪切：將組(zu)織剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便後(hou)續消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎(sui)的(de)組織塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或(huo)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時(shi)間。期間可(ke)輕輕搖晃(huang)離心管(guan)，使消(xiao)化(hua)更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當組(zu)織塊大部分被(bei)消化(hua)成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)或(huo)小細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入(ru)含(han)血清的(de)培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過(guo)濾與離心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織碎片(pian)，然(ran)後(hou)將濾液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉速(su)離心，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀察與檢測(ce)

1. 日常觀察：每(mei)天(tian)用(yong)倒置顯(xian)微鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等(deng)，記錄細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情況，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染或(huo)異常，及(ji)時(shi)采取(qu)相(xiang)應(ying)措施。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活(huo)力檢測(ce)：在(zai)需要時(shi)，可(ke)采用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計數和活力檢測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)情況和健康狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分離

1. 快速(su)操作

- 組織取(qu)材(cai)後(hou)需立(li)即處理(li)，避免(mian)長(chang)時間暴露於室溫或(huo)非營(ying)養環境。

- 使用(yong)無(wu)菌 PBS 或生理(li)鹽(yan)水沖洗組(zu)織，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織類型選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免(mian)過(guo)度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消化(hua)時間需嚴格(ge)控制（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態(tai)。

二、培(pei)養條(tiao)件(jian)優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基(ji)選擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血清或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因子(zi)的(de)培(pei)養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞(bao)需添(tian)加胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換培(pei)養基(ji)品牌(pai)或批(pi)次(ci)，減(jian)少細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳(chuan)代

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較弱，可(ke)能需要包(bao)被(bei)培(pei)養皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度建(jian)議(yi)控制在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑制(zhi)和分化(hua)。

三、汙染控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性耗材，避免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培(pei)養基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加雙抗(kang)，但長(chang)期使用(yong)可(ke)能影響細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後(hou)需及(ji)時(shi)丟棄細(xi)胞(bao)。

四、狀態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常觀察

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度及(ji)培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更換(huan)培(pei)養基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙染或(huo)營(ying)養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分裂(lie)次(ci)數有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍存(cun)早期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培(pei)養基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮(dan)保存(cun)。