【概要(yao)描述】人真(zhen)皮(pi)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞公司(si)正在(zai)出(chu)售的產(chan)品(pin)：L5178-R白血病(bing)SF767 (人腦瘤細(xi)胞)SK-CO-1 (人結(jie)直腸腺癌(ai)細(xi)胞)SK-MEL-1 (人皮膚(fu)黑(hei)色瘤細(xi)胞) (STR鑒定正確(que))SK-N-BE (2) (人神經母細(xi)胞瘤細(xi)胞) (STR鑒定正確(que))SK-NEP-1 (人腎母細(xi)胞瘤細(xi)胞) (STR鑒定正確(que))SK-N-MC (人神經上(shang)皮瘤細(xi)胞)SNU-5 (人胃(wei)癌(ai)細(xi)胞)SUP-B15 (人Ph+急(ji)淋白(bai)血病(bing)細(xi)

人真(zhen)皮(pi)成(cheng)纖(xian)維(wei)分離自真(zhen)皮(pi)組織(zhi)；真(zhen)皮(pi)，位(wei)於(yu)表皮深(shen)層(ceng)，向(xiang)下(xia)與(yu)皮下(xia)組(zu)織(zhi)相連(lian)，真(zhen)皮(pi)結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)的(de)膠原纖(xian)維(wei)和(he)彈性(xing)纖(xian)維(wei)互(hu)相交(jiao)織(zhi)在(zai)壹起(qi)，埋於(yu)基質內。其內分布(bu)著各種結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)細(xi)胞和(he)大(da)量的(de)膠原纖(xian)維(wei)彈性(xing)纖(xian)維(wei)，使皮膚既(ji)有彈性(xing)，又(you)有韌性(xing)。其(qi)由(you)兩(liang)層(ceng)組成(cheng)——乳(ru)頭層(ceng)與(yu)網狀(zhuang)層。真(zhen)皮(pi)的結(jie)構(gou)組(zu)成(cheng)是(shi)膠原蛋(dan)白(bai)、彈性(xing)纖(xian)維(wei)以(yi)及基質。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞（Fibroblast）是(shi)疏松(song)結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)的(de)主(zhu)要(yao)細(xi)胞成(cheng)分，由(you)胚(pei)胎(tai)時(shi)期(qi)的(de)間(jian)充(chong)質(zhi)細(xi)胞分化而(er)來(lai)。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞較大(da)，輪廓(kuo)清楚，多為(wei)突起(qi)的紡錘(chui)形(xing)或(huo)星(xing)形(xing)的(de)扁平狀結(jie)構(gou)，其(qi)細(xi)胞核呈(cheng)規則的卵(luan)圓形(xing)，核(he)仁(ren)大(da)而明顯(xian)。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞功(gong)能活動旺盛，細(xi)胞質嗜(shi)弱堿性(xing)，具明顯(xian)的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)合成(cheng)和(he)分泌(mi)活(huo)動，在壹定條(tiao)件下(xia)，它可(ke)以實(shi)現跟(gen)纖(xian)維(wei)細(xi)胞的互(hu)相轉化；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞對不同(tong)程(cheng)度的細(xi)胞變性(xing)、壞死和(he)組織(zhi)缺(que)損的修(xiu)復(fu)有著十(shi)分重要(yao)的(de)作(zuo)用。剛分離的真(zhen)皮(pi)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞呈圓(yuan)形(xing)、折光性(xing)良(liang)好(hao)，懸(xuan)浮於(yu)培養(yang)基中。30min細(xi)胞貼壁，其中(zhong)部(bu)分開(kai)始伸(shen)出(chu)偽(wei)足，表現(xian)為(wei)小的(de)突起(qi)；6h後細(xi)胞基本貼(tie)壁wan全(quan)，伸(shen)展(zhan)成(cheng)梭形(xing)，胞(bao)核(he)清晰(xi)，分布(bu)較(jiao)均(jun)勻，散在生長，不聚集(ji)成(cheng)團(tuan)；細(xi)胞生長迅(xun)速，5-7天即呈融(rong)合狀(zhuang)態，細(xi)胞排列緊密(mi)，有的(de)交叉(cha)重疊生長，平坦、胞體(ti)較(jiao)大(da)，細(xi)胞質透明，細(xi)胞核較(jiao)大(da)，呈橢(tuo)圓形(xing)，顏(yan)色淡(dan)。細(xi)胞融(rong)合，並(bing)彼(bi)此(ci)連(lian)接(jie)成(cheng)網狀(zhuang)；細(xi)胞呈突起(qi)的紡錘(chui)形(xing)或(huo)星(xing)形(xing)的(de)扁平分布(bu)。真(zhen)皮(pi)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞在生理(li)條(tiao)件下(xia)的(de)主(zhu)要(yao)功(gong)能包括(kuo)：構造和(he)維(wei)持(chi)組(zu)織(zhi)的(de)正常(chang)形(xing)態，合成(cheng)和(he)釋放(fang)細(xi)胞外基質以(yi)及組(zu)織(zhi)損(sun)傷後(hou)及時(shi)大(da)量聚(ju)集(ji)修(xiu)復(fu)損(sun)傷組(zu)織(zhi)。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離的人真(zhen)皮(pi)成(cheng)纖(xian)維(wei)采(cai)用先(xian)中性(xing)dan白(bai)酶消化、後(hou)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠原酶(mei)混(hun)合消化法(fa)結(jie)合(he)差(cha)速貼壁法制(zhi)備而(er)來(lai)，細(xi)胞總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離的人真(zhen)皮(pi)成(cheng)纖(xian)維(wei)經Vimentin免疫(yi)熒光(guang)鑒(jian)定，純度可(ke)達(da)90%以上(shang)，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵母和(he)真(zhen)菌(jun)等。

本(ben)公司(si)所有產(chan)品僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗，不做(zuo)其(qi)他(ta)科學(xue)實驗外(wai)的(de)使用！

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生長添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換液壹次(ci)

生長特性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞形(xing)態 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左右；3代以內狀態

消化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準備：準備無(wu)菌(jun)的培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移液管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高壓(ya)滅(mie)菌(jun)或其他合(he)適(shi)的(de)消毒處理(li)。

2. 試劑(ji)準備：配制(zhi)或購(gou)買(mai)合適(shi)的(de)培養(yang)基、消化酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙(shuang)抗(kang)等試劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在有效(xiao)期內。

3. 實(shi)驗動物或組織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動物並(bing)進(jin)行(xing)相應的(de)麻(ma)醉或處(chu)死，獲(huo)取(qu)所需組織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的(de)組織(zhi)樣(yang)本庫(ku)中獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對(dui)組織(zhi)的(de)損傷，並(bing)去(qu)除多余的脂肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組織(zhi)用預(yu)冷的無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數(shu)次(ci)，以去除血液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續消化。

細(xi)胞分離

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有適(shi)量(liang)消化酶(mei)的(de)離心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中消化壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心管(guan)，使消化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止消化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分被消化成(cheng)單細(xi)胞懸液或小細(xi)胞團(tuan)時，加(jia)入含(han)血清的(de)培養(yang)基終止消化。

3. 過濾與(yu)離心：用細(xi)胞篩(shai)過濾細(xi)胞懸液，去除未消化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾液以適(shi)當(dang)的轉速離心，收集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱。

細(xi)胞觀察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞的形(xing)態、生長狀態、密(mi)度等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的變(bian)化情(qing)況(kuang)，如發現細(xi)胞汙(wu)染或異(yi)常(chang)，及時(shi)采(cai)取(qu)相應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計數(shu)與(yu)活力(li)檢(jian)測(ce)：在需要時(shi)，可(ke)采用臺盼(pan)藍(lan)染色等(deng)方法對(dui)細(xi)胞進行(xing)計數(shu)和(he)活力(li)檢(jian)測(ce)，以了(le)解細(xi)胞的生長情況(kuang)和(he)健康(kang)狀態。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需(xu)立(li)即(ji)處理(li)，避免長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或生理(li)鹽水(shui)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除血液、雜質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化酶(mei)，避免過度消化導(dao)致細(xi)胞損傷。

- 消化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞解離狀態。

二(er)、培(pei)養(yang)條(tiao)件優化

1. 培(pei)養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清或(huo)特定生長因(yin)子的(de)培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞需添(tian)加胰島素、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養(yang)基品牌或(huo)批(pi)次，減(jian)少(shao)細(xi)胞適(shi)應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代

- 原代(dai)細(xi)胞貼壁能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需要包被培養(yang)皿（如膠原蛋(dan)白(bai)、多聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控制(zhi)在 70%-80%，過度匯合會導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和(he)分化。

三(san)、汙(wu)染控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺(tai)操作(zuo)，使用壹次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培(pei)養(yang)基中可(ke)添加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長期使用可(ke)能影響細(xi)胞活性(xing)。

2. 支原體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定期檢(jian)測(ce)支原體(ti)汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後需(xu)及時(shi)丟棄細(xi)胞。

四(si)、狀態監控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞形(xing)態、密(mi)度及培(pei)養(yang)基顏(yan)色，及時(shi)更(geng)換培養(yang)基（通(tong)常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可(ke)能提示汙(wu)染或營(ying)養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存

- 原代(dai)細(xi)胞分裂次(ci)數(shu)有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需及時(shi)凍(dong)存早期(qi)代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液建(jian)議(yi)使用 DMSO+血清（或(huo)專用凍存培養(yang)基），梯度降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮保(bao)存。