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Western Blot 彩(cai)虹(hong) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(窄譜(pu),2-73kD)隨著免疫組織(zhi)化(hua)學(xue)技(ji)術的(de)發展(zhan)和(he)各(ge)種(zhong)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)的(de)出(chu)現,使許(xu)多(duo)疑難(nan)腫瘤得(de)到了(le)明(ming)確診斷(duan)。在常(chang)規腫瘤病(bing)理診斷(duan)中,有(you)5%-0%的(de)病(bing)例(li)單靠常(chang)規染色難(nan)以作(zuo)出明(ming)確的(de)診斷(duan),而借(jie)助(zhu)免(mian)疫組化(hua)技(ji)術準(zhun)確率(lv)可高(gao)達(da)98%。
Western Blot 彩(cai)虹(hong) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(窄譜(pu),2-73kD)免疫組化(hua)染色流(liu)程
SP法(fa)
)脫蠟、水化;2)PBS洗2~3次各(ge)5分(fen)鐘(zhong);
3)3%H2O2(80%甲(jia)醇(chun))滴加在TMA上(shang),室(shi)溫(wen)靜置(zhi)0分(fen)鐘(zhong);
4)PBS洗(xi)2~3次(ci)各(ge)5分(fen)鐘(zhong);
5)抗(kang)原修復;
6)PBS洗(xi)2~3次(ci)各(ge)5分(fen)鐘(zhong);
7)滴加正(zheng)常(chang)山(shan)羊血(xue)清(qing)封(feng)閉(bi)液,室(shi)溫(wen)20分(fen)鐘(zhong)。甩(shuai)去(qu)多(duo)余(yu)液體(ti)。
8)滴加Ⅰ抗(kang)50μl,室(shi)溫(wen)靜置(zhi)小時(shi)或(huo)者(zhe)4℃過夜或(huo)者(zhe)37℃小時。
9)4℃過夜後需(xu)在37℃復(fu)溫(wen)45分(fen)鐘(zhong)。
0)PBS洗(xi)3次(ci)各(ge)5分(fen)鐘(zhong);
)滴加Ⅱ抗(kang)40~50μl,室(shi)溫(wen)靜置(zhi),或(huo)37℃小時(shi);
2)II抗(kang)中可加(jia)入0.05%的(de)tween-20。
3)PBS洗(xi)3次各(ge)5分(fen)鐘(zhong);
4)DAB顯色5~0分(fen)鐘(zhong),在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)掌(zhang)握(wo)染色程度;
5)PBS或(huo)自(zi)來(lai)水沖洗0分(fen)鐘(zhong);
6)蘇(su)木(mu)精(jing)復染2分(fen)鐘(zhong),鹽(yan)酸(suan)酒(jiu)精(jing)分(fen)化(hua);
7)自(zi)來(lai)水沖洗0~5分(fen)鐘(zhong);
8)脫水、透明(ming)、封片、鏡(jing)檢。
Western Blot 彩(cai)虹(hong) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(窄譜(pu),2-73kD)SABC法
)脫蠟、水化。
2)PBS洗兩(liang)次(ci)各(ge)5分(fen)鐘(zhong)。
3)用(yong)蒸餾水或(huo)PBS配置(zhi)新鮮(xian)的(de)3%H2O2,室(shi)溫(wen)封閉(bi)5~0分(fen)鐘(zhong),蒸(zheng)餾(liu)水洗3次。
4)抗(kang)原修復。
5)PBS洗(xi)5分(fen)鐘(zhong)。
6)滴加正(zheng)常(chang)山(shan)羊血(xue)清(qing)封(feng)閉(bi)液,室(shi)溫(wen)20分(fen)鐘(zhong)。甩(shuai)去(qu)多(duo)余(yu)液體(ti)。
7)滴加Ⅰ抗(kang),室(shi)溫(wen)小時(shi)或(huo)者(zhe)4℃過夜或(huo)者(zhe)37℃小時(4℃過夜後在37℃復(fu)溫(wen)45分(fen)鐘(zhong))。
8)PBS洗(xi)三(san)次每次2分(fen)鐘(zhong)。
9)滴加化二(er)抗(kang),20℃~37℃20分(fen)鐘(zhong)。
0)PBC洗(xi)3次(ci)每次2分(fen)鐘(zhong)。
)滴加試(shi)劑(ji)SABC,20℃~37℃20分(fen)鐘(zhong)。
2)PBS洗(xi)4次(ci)每次5分(fen)鐘(zhong)。
3)DAB顯色:DAB顯色試(shi)劑(ji)盒或(huo)者(zhe)自(zi)配(pei)顯色劑(ji)顯色(鏡下(xia)掌(zhang)握(wo)顯色程度)。
4)蒸餾水洗。蘇木素復染2分(fen)鐘(zhong)、鹽(yan)酸(suan)酒(jiu)精(jing)分(fen)化(hua)。
脫水、透明(ming)、封片、鏡(jing)檢。
GOY-S3 中譜(pu) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(藍(lan)色,2-05kDa) 20次/00微(wei)升
GOY-S4 中(zhong)譜(pu) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(藍(lan)色,2-05kDa) 50次/250微(wei)升
GOY-S5 中(zhong)譜(pu) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(藍(lan)色,2-05kDa) 00次/500微(wei)升
GOY-S6 寬(kuan)譜(pu) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(藍(lan)色,2-220kDa) 20次/00微(wei)升
GOY-S7 寬(kuan)譜(pu) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(藍(lan)色,2-220kDa) 50次/250微(wei)升
GOY-S8 寬(kuan)譜(pu) 預(yu)染蛋(dan)白質分(fen)子(zi)量標(biao)準(藍(lan)色,2-220kDa) 00次/500微(wei)升
GOY-S9 普(pu)通(tong) 蛋白(bai)質分(fen)子(zi)量標(biao)準(低範圍(wei),5-66kDa) 20次/00微(wei)升
GOY-S20 普(pu)通(tong) 蛋白(bai)質分(fen)子(zi)量標(biao)準(高(gao)範圍(wei),5-200kDa) 20次/00微(wei)升
GOY-S2 普(pu)通(tong) 蛋白(bai)質分(fen)子(zi)量標(biao)準(寬(kuan)範圍(wei),6.5-200kDa) 20次/00微(wei)升
GOY-S22 5x蛋(dan)白樣品上(shang)樣(yang)緩沖(chong)液 Western Blot 5 ml
GOY-S23 30%單/雙丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺預(yu)制膠(jiao)溶(rong)液 Western Blot(9:) 00ml
GOY-S24 30%單/雙丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺預(yu)制膠(jiao)溶(rong)液 Western Blot(9:) 500ml
GOY-S25 30%單/雙丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺預(yu)制膠(jiao)溶(rong)液 Western Blot(29:) 00ml
GOY-S26 30%單/雙丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺預(yu)制膠(jiao)溶(rong)液 Western Blot(29:) 500ml
GOY-S27 40%單/雙丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺預(yu)制膠(jiao)溶(rong)液 Western Blot(9:) 00ml
GOY-S28 40%單/雙丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺預(yu)制膠(jiao)溶(rong)液 Western Blot(9:) 500ml
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